基因工程Word文档格式.docx

1、质粒载体的基本要素和类型；l噬菌体的分子生物学；l噬菌体载体的克隆原理及步骤；M13噬菌体的生物学；M13噬菌体载体组成；噬菌粒的组成和特征。质粒载体的基本要素；a-互补作用；M13噬菌体在感染细胞中的复制；噬菌粒组成特点。第四章 人工染色体载体黏粒载体的结构特征和工作原理；YAC载体的复制元件和标记基因及工作原理；细菌人工染色体载体的结构和工作原理；P1噬菌体载体和P1人工染色体载体的组成。黏粒载体、YAC载体、细菌人工染色体载体的工作原理；P1噬菌体的分子遗传特征。第五章 表达载体大肠杆菌表达载体的结构；利用T7噬菌体启动子的表达载体；表达融合蛋白的表达载体；表达产物的纯化；大肠杆菌/革兰

2、氏阳性细菌穿梭载体；大肠杆菌/酵母菌穿梭载体；基因插入、基因敲除概念；随机插入突变载体。大肠杆菌中T7启动子表达调控；穿梭载体概念；基因插入、基因敲除概念。第六章 基因操作中大分子的分离和分析碱裂解法提取大肠杆菌质粒DNA; 电泳原理；DNA片段的纯化方法；RNA提取和纯化；分子杂交类型和原理；RNA作图和端点分析原理；重组DNA分子导入大肠杆菌的方法。碱裂解法提取大肠杆菌质粒DNA的原理；第七章 基因芯片技术生物芯片的定义；生物芯片分析流程；生物芯片分类；基因芯片的制作。第八章PCR技术及其应用PCR技术原理；PCR产物的克隆；PCR扩增未知DNA片段；与反转录相关的PCR；PCR产生DNA

3、指纹；实时定量PCR。A/T克隆法；反向PCR；热不对称交错PCR;5-RACE 和3-RACE；实时定量PCR原理。第九章DNA序列分析Maxam-Gilbert化学降解法；Sanger双脱氧链终止法；DNA片段序列测定的策略。Sanger双脱氧链终止法原理和步骤第十章DNA诱变随机诱变；DNA体外重组；寡核苷酸介导的定点诱变；嵌套缺失。 错误掺入诱变、盒式诱变；DNA洗牌法和交错延伸重组；寡核苷酸介导的定点诱变。第十一章DNA文库的构建和目的基因的筛选基因组DNA文库的构建；cDNA 文库的构建；基因克隆的筛选策略。文库的代表性和随机性；基因组DNA文库的构建流程；cDNA 文库的构建。第

4、十二章 基因组研究技术基因组遗传图谱的构建；基因组物理图谱的构建；基因组测序；基因组功能分析；基因组工程。基因组图谱的类型和构建第十三章 植物基因工程植物基因工程方法；转化子细胞的筛选；转化体的鉴定与证实。原生质体介导法和根癌农杆菌介导法；根癌农杆菌Ti质粒介导的基因转化的分子机理；选择基因和报告基因。第十四章 动物基因工程动物转基因技术；转基因动物制备。动物基因工程载体；基因敲除和基因敲入；基因转移技术；转基因动物的制备和鉴定。第十五章 酵母基因工程常用的酵母表达系统。不同类型的酵母表达系统。第十六章 细菌基因工程细菌基因工程的表达系统。表达系统构建原则；外源基因表达方式；枯草芽孢杆菌的表达

5、载体。第十七章 病毒基因工程病毒载体；病毒与基因工程。动物病毒载体类型；基因工程病毒疫苗。第十八章 医药基因工程基因工程蛋白和多肽药物；基因工程抗体；核酸类药物。抗体的结构特点；反义RNA；RNA干扰；基因治疗综合测试题一一、写出下列英文或英文缩写符号的中文名称（每个2分，共20分）：1. RNase 2. restriction endonuclease 3. Plasmid 4. SD sequence 5. MCS 6. IPTG 7. YAC 8. ori 9. promotor 10. Klenow fragment二、比较下列各组概念（每题5分，共20分）：1. 宿主细胞的限制和修

6、饰作用2. pBR322和pUC载体3.核酸水解酶和限制性内切酶 4. DNA文库和cDNA文库三、判断题（每题2分，共20分）：1. 型限制性核酸内切酶识别与切割的序列有严格特异性。2. 大肠杆菌DNA连接酶既可以连接黏性末端DNA，也可以连接平齐末端DNA。3. Klenow片段来自于大肠杆菌DNA聚合酶的N末端，具有聚合酶活性和35外切酶活性。4. 逆转录酶是依赖于DNA的DNA聚合酶。5. -互补筛选法中，含重组质粒的转化子在生色诱导培养基上只能形成蓝色菌落。6. 当外源蛋白以包涵体形式表达后就无法恢复其生物学活性。7. Southern blotting是DNA与DNA杂交的技术。8

7、. 将外源基因导入培养的哺动物细胞的常用方法中不包括氯化钙法。9. Sanger的双脱氧末端终止法DNA序列测定中不需要ddNTP。10.禽流感（avian influenza）是由A型流感病毒引起的一种烈性传染病。该病毒的核酸类型为负链单股RNA病毒。四、问答题：（每题8分，共40分）： 1. 分离纯化核酸总的原则是什么？2. 基因工程载体应具备哪些特点？3. 简述分子克隆的基本流程？4. 什么是重组子筛选？主要有哪些方法？5. 利用原核细胞表达真核基因是比较困难的，主要表现在哪些方面？综合测试题二1. Reverse transcriptase2. transferred DNA（T-DN

8、A） 3. Ti Plasmid4. restriction endonuclease5. Multiple cloning Site6. IPTG7. Plasmid8. HAT9. SD sequence10. YAC二、解释概念（每题4分，共20分）：1.双元载体系统pUC载体噬菌体的溶菌途径4. cDNA文库5Southern Blotting 三、判断题（每题1分，共10分）：1. I型限制性核酸内切酶识别与切割的序列都有严格特异性。3. 在土壤农杆菌中仅存在Ti质粒。6. 在T链复合物中，T链含有核定位信号。7. 细菌质粒DNA提取后，电泳检测只可能出现一条DNA条带。8. 在正常

9、的非转基因植物中报告基因如gus等编码的酶及其所催化的反应是存在的。10. 当外源蛋白以包涵体形式表达后就无法恢复其生物学活性。四、简答题（每题6分，共30分）：3. 简述根癌农杆菌侵染植物的分子机理。4. 画出生产转基因动物的步骤示意图。五、论述题（每题10分，共20分）：1.论述分子克隆技术流程？在课程实验中，采用什么克隆载体？其特点是什么？2.什么是PCR？该技术的基本原理是什么？举出2种PCR技术？综合测试题三一、写出下列英文中文名称并解释（每个2分，共20分）：1. blunt end2. Deoxyribonuclease3. Plasmid4. SD sequence 5. MC

10、S6. Vactor7. RFLP8. AFLP9. DDRT-PCR10. Klenow fragment二、比较下列各组概念（每题4分，共20分）：1. 宿主细胞的限制和修饰作用核酸水解酶和限制性内切酶4. DNA文库和cDNA文库5. SOUTHERN BIOTTING 和 WESTERN BIOTTING三、判断并改错（每题1分，共10分）：1. 所有限制性核酸内切酶识别与切割的序列都有严格特异性。（每题5分，共30分）： 1. 分离纯化核糖核酸（RNA）应注意什么？2. 简述根癌农杆菌侵染植物的分子机理。3. 简述表达载体构建的一般原则。4. 简述建立植物转化受体系统的主要考虑因素。

11、6简述基因导入动物细胞的方法。五、论述题（每题10分，共20分）1画出生产转基因动物的步骤示意图。2什么是PCR？一、比较下列各组概念（每小题5分，共20分。）1PCR和RT-PCR2噬菌粒载体和黏粒载体3. 琼脂糖电泳和聚丙烯凝胶电泳4基因打靶和同源重组二、判断题（每小题1分，共10分。1. 甘油会使许多限制性内切核酸酶的特异性发生改变，是导致一些酶的星活性的主要原因之一，防止的办法是在酶切反应体系中，将甘油的浓度控制在5以下。【 】2T4 DNA 连接酶和E.coli 连接酶作用时都需要ATP 和NAD+作为辅助因子。 【 3用同一种酶切割载体和外源DNA 得到黏性末端后，为防止它们自身环化，要用CIP将它们都脱磷酸。4有a、b、c 三个质粒，因为a 和b 能够共存于一个细胞，a 和c 也可共存于同一个细胞，所以