超临界萃取结合水煎煮法提取丹参中有效成分的研究_精品文档资料下载.pdf

超临界萃取结合水煎煮法提取丹参中有效成分的研究_精品文档资料下载.pdf

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References：

1LiZLExploitationandExertionofGinkgoLeaves（银杏开发与利用）MShangshi：

ShanghaiScientificandTechnicalPublishers，19962ZhangDQ，HeZFResearchintheChemalIngredientsinLeavesofGinkgobiloba（银杏叶资源化学研究）MBeijing：

ChinaLightIndustryPress1999超临界萃取结合水煎煮法提取丹参中有效成分的研究张虹。

，柳正良，王洪泉。

，杨莺。

（1同济大学附属同济医院，上海200065；

2第二军医大学药学院，上海200433；

3利群医院，上海200333）丹参为唇形科植物丹参SalviamiltiorrhizaBge的干燥根及根茎，味苦，性微寒，祛瘀止痛、活血通经、清心除烦。

丹参主要含有结晶性菲醌类化合物，如丹参酮I（tanshinoneI）、丹参酮A、B（tanshinoneA、B）、隐丹参酮（cryptotanshinone）、二氢丹参酮（dihydrotanshinone）；

水溶性有效成分为丹参素（danshensu）及酚酸类成分原儿茶醛（protocatechualdehyde）、咖啡酸（caffeicacid）、迷迭酸甲酯（methylrosmarinate）等，以及棕罗汉松酚（Ierrugino1）等其他成分。

脂溶性有效成分丹参酮经研究表明具有抑制血栓形成等药理作用；

水溶性有效成分丹参素能抗心肌缺血并对冠状动脉有较好作用，原儿茶醛能显著增加冠状动脉流量，对抗ADP诱导的血小板积聚，并有广谱抗菌作用。

本实验对脂溶性有效成分以丹参酮为指标，水溶性有效成分以丹参素、原儿茶醛为指标对丹参进行提取研究，并作为制剂的一组质控指标。

1仪器与材料高效液相色谱仪：

日本岛津LC一9A，配有SPD6A紫外可变波长检测器；

CR一4A数据处理器；

超临界萃取设备：

SFX。

一10型超临界流体萃取器（美国Isco公司）；

Branson1200型超声波清洗器。

丹参酮A（批号：

0766200011）、原儿茶醛（批号：

08109402）购自中国药品生物制品检定所；

丹参素（纯度大于99）购自复旦大学药学院天然药物化学教研室。

丹参药材购于上海市药材公司，经第二军医大学宓鹤鸣教授鉴定。

本品经自然晾干后，60C干燥12h，粉碎，过三号筛。

甲醇为HPLC或AR纯，蒸馏水为双蒸水（自制）。

2有效成分的测定21脂溶性成分丹参酮的测定211色谱条件：

色谱柱：

DiamonsilTMCl8柱（250mm46mm，5m）（迪马公司）；

流动相：

甲醇一水收稿日期：

20040312作者简介：

张虹（1967一），女，浙江海宁人，副主任药师，1990年毕业于上海医科大学药学系，获理学学士学位，2001年毕业于第二军医大学药物分析专业，获医学硕士学位，主要从事药物分析及临床药学研究，发表论文1O余篇。

Tel：

（021）560510803203Email：

zkzhuyahoocomcn维普资讯http:

/中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第35卷第12期2004年12月1361（85：

15）；

体积流量：

10mLmin；

灵敏度：

008AUFS；

检测波长：

270am；

柱温：

35；

进样量：

1OttL。

丹参酮1I保留时间约为125min，其他成分不影响。

212线性关系考察：

精密称取丹参酮1I对照品10mg，置50mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。

用流动相稀释成1248gmL的系列溶液，进样1OL，以峰面积与质量浓度进行线性回归，得标准曲线方程：

y一433657X+0690，r一099998。

丹参酮1I在1248gmL时峰面积与其质量浓度具有良好的线性关系。

213供试品溶液的制备：

精密称取经真空干燥后的萃取物01g，加适量甲醇，超声使溶解，用甲醇配制成适当质量浓度，取少量溶液用微孔滤膜（045m）滤过，弃去初滤液，取续滤液01mL于50mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

22水溶性成分丹参素、原儿茶醛的含量测定221色谱条件：

色谱柱：

DiamonsilTMC18（250mm46mm，5m）（迪马公司）；

流动相：

甲醇一05醋酸水溶液（25：

75）；

体积流量：

10mErain；

灵敏度：

008AUFS；

检测波长：

280am；

柱温：

进样量：

1OL。

丹参素和原儿茶醛的保留时间分别约为65、102min。

222线性关系的考察：

精密称取丹参素、原儿茶醛对照品各5mg，分别置50mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用流动相稀释成一定质量浓度的系列溶液，进样1OL，以峰面积与质量浓度进行线性回归，得标准曲线方程及线性范围，丹参素：

Y一86746X一33，r一09999，线性范围：

5O250gmL；

原儿茶醛：

Y一623400X+9259，r一09999，线性范围：

25200gmL。

223供试品溶液的制备：

取丹参SFE提取后的残渣水煎液、SFE提取物水煎液或丹参药材的水煎液，浓缩，甲醇定容于100mL量瓶中。

精密吸取20mL样品液，再加甲醇20mL，摇匀，超声1Omin，冷却，用045m过滤膜滤过，取滤液，即得。

3提取工艺的考察31脂溶性成分的提取：

精密称取样品粉末（过60目筛）300g，放入萃取罐中，按表1设计因素水平，选L。

（3）正交设计表对丹参中脂溶性成分（以丹参酮I为测定指标）进行超临界萃取，收集萃取液，滤过，浓缩，浓缩后所得物再经真空干燥，即得萃取物，测定结果见表2。

经统计学分析，结果表明：

对丹参酮I影响为表1因素水平表Table1Factorsandlevels表2L，（3）正交试验结果Table2ResultsofL9（3）orthogonaltest试验号ABCD丹参酮IA（g100g）BCAD。

提取丹参酮1I的最佳条件是：

A。

BCD。

，即：

夹带剂为100g药材用35mL的乙醇，于55温度、30MPa压力下萃取25h。

32水溶性成分的提取：

称取经上述超临界萃取后的丹参残渣粉末5g，按表3，选用L。

（3）正交试验表对丹参素SFE残渣中的水溶性成分（以丹参素、原儿茶醛为测定指标）进行水煎煮提取。

提取液按上述丹参素、原儿茶醛的测定方法进行测定，测定结果见表4。

表3因素水平表Table3Factorsandlevels由统计学分析结果表明，对丹参素、原儿茶醛的影响均为因素ACB。

提取丹参素和原儿茶醛的最佳条件是A。

BC。

以丹参残渣8倍量的水煎煮3次，每次15h。

33最佳工艺的验证试验：

本实验通过对丹参中有效成分提取方法的摸索，发现SFE1特别适合脂溶性有效成分，如丹参酮II的提取，丹参酮的得率高，杂质少；

但SFE不适合水溶性有效成分如丹参素、原儿茶醛的提取，经检测，丹参经SFE所得提加O“盯u3鸲uH4弘聃M2123456789KKKR维普资讯http:

/1362中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第35卷第12期2004年12月取物中未检测出水溶性成分丹参素、原儿茶醛，两者存在于丹参的SFE残渣中，结果见表5。

可见丹参SFE残渣中的丹参素、原儿茶醛较丹参药材中的浓度高，其原因有待于进一步研究。

表4L，（3）正交试验结果Table4ResultsofL9（3）ohogonaltest表5丹参的有效成分的测定（，l一3）Table5Effectivecompone