BPG层析柱标准装柱流程规范文档格式.docx
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1基本术语概念
填料因子（PackingFactor，PF）：
指在在装柱过程中，用低流速（如60cm/h）对填料进行沉降压缩得到的调料高度和最后装柱完成时填料高度（柱高）的比值，
GEHC生产的各种常见填料的PF参见《GEHCAxiChrom300—1000columnsUserManual28-9562-89EditionAA》；
线性流速（linearflowrate）：
单位时间内液体流经的直线距离，常用cm/h表示；
体积流速（volumeflowrate）:
单位时间内液体流经的空间容积，常用ml/min表示；
换算:
2准备工作
2。
1检查层析柱的完整性，所带配件，是否水平（用水平仪矫正）,是否清洁（如有污染应进行清洗）.
2.2确定所用填料及其特性、浓度等
以DEAESepharoseFastFlow填料为例，其填料因子（PF）为1.15，新填料（slurry）浓度为75％（保存于20％乙醇中），耐压3bar。
2.3确定放大后的工艺参数
以XX生化制药股份有限公司的放大工艺为例，
中试工艺参数：
柱高h=10cm；
体积流速v1=3ml/min；
柱内径d=1.6cm.
即，线性流速v2=v1/s柱=3/（3.14×
0。
82）cm/min=1。
5cm/min；
样品与填料接触时间t=h/v2=10/1.5min=6。
67min；
在工艺的线性放大中h、v2和t均不变，则可保证样品出峰的位置（洗脱时间）和形状不变.
使用BPG300层析柱进行放大的工艺参数:
装柱体积V柱=S柱h=3.14×
1。
52×
1L=7L；
装柱需要slurry体积Vslurry=V柱×
PF/Cslurry
以DEAESepharoseFastFlow为填料,
则，Vslurry=7×
1.15/0。
75L=10。
73L；
装入柱中的slurry高度Lslurry=Vslurry/S柱=10.73/（3.14×
1.52）dm=1.52dm=15.2cm.
3管路安装
3.1层析柱管道和配件安装
3。
1.1卸下柱子顶部和底部的盲堵垫圈，旋松密封调节器,用纯水或20%乙醇充分浸润柱内壁和柱头O型圈；
2用扳手对称卸下支持杆连接到法兰的螺丝，并通过旋转高度调节手柄将柱头旋至最高处，在柱头顶部依次安装压力表和四路二通阀,在柱底安装四路二通阀；
1.3在顶部四路二通阀上横向连接一根细管，另一端连至Ä
KTAprocess上端连接口COLUMNTOP，同时从柱底四路二通阀横向接出一根细管至Ä
KTAprocess的下端连接口COLUMNBOTTOM。
图1、BPG300层析柱安装示意图
2层析柱下端筛网排气泡
3.2.1连接两根足够长的细管到Ä
KTAprocess进样泵的A1和B1进口，两管另一端均放入纯水中；
2从A1泵入纯水：
打开UNICORN软件,在systemcontrol窗口点击manual→valves→InletA，选择inletA1,insert；
InletB，选择closed，insert;
Column,选择upflow，insert;
Pump→Flow，设定流速60L/h，点击execute运行程序充水至BPG柱中2—3cm左右,pause，清除下端筛网中的空气,用注射器吸出筛网中残留的气泡.
4装填料
4。
1准备填料
所用填料为DEAESepharoseFastFlow，装置的是保存于20%乙醇中的新slurry；
4.2卸下柱头，用搅拌棍引流加入混匀的slurry至15。
2cm处，再加入纯水至40cm左右,充分搅拌混匀，同时避免挤压筛网和柱壁,静置使填料界面至少低于38cm；
3在systemcontrol窗口点击manual→valves→InletA,选择inletA1，insert;
InletB，选择closed，insert；
Column，选择downflow，insert；
Pump→Flow，设定流速60L/h,点击execute运行程序将柱头上端筛网充满水以除去气泡，再装上柱头,用密封调节器固定柱头，拧紧螺丝;
4在systemcontrol窗口点击manual→Pump→Flow，设定流速为42L/h（60cm/h），进行填料的沉降，待填料高度降至14cm左右,将密封调节器旋至全松，将柱头快速调至距离填料3-4cm处,将密封调节器旋至半松，将柱头快速调至滤网距离填料1—2cm，旋紧密封调节器,再设定高流速（如150L/h），继续压缩填料，最后再调节柱头至10cm。
整个过程一直有流速,泵速不能停。
5柱效测定
图2、柱效测定示意图
5.1平衡
将A1接口细管放入0.4MNaCl溶液中,将柱顶端四路二通阀调至管路与大气相连状态,在systemcontrol窗口点击manual→valves→InletA，选择inletA1，insert；
Column，选择downflow，insert;
Pump→Flow，再设定高流速（如150L/h），点击execute运行，排气泡，再将阀调至管路与柱头相连状态，平衡3—5个柱体积至电导曲线稳定，点击END；
5.2上样
5.2.1将B1接口细管放入2MNaCl溶液，柱顶端四路二通阀调至管路与大气相连状态，在systemcontrol窗口点击manual→valves→InletA,选择Closed，insert；
InletB,选择InletB1，insert；
Pump→Flow，设定高流速（150L/h）点击execute运行,排气泡，pause;
5.2。
2在systemcontrol窗口点击manual→Other→End_Timer，选择Acc.Volumn，Timeout设上样量为70mL（1%柱体积）;
Pump→Flow，设定上样流速60L/h，点击execute的同时将柱顶端四路二通阀调至管路与柱头相连，完成上样;
5.3洗脱
5.3。
1将柱顶端四路二通阀调至管路与大气相连状态，在systemcontrol窗口点击manual→valves→InletA，选择inletA1，insert；
InletB，选择closed,insert；
Pump→Flow,设定高流速（150L/h）点击execute运行，排气泡,同时将管路充满0。
4MNaCl溶液，调流速至21L/h（30cm/h）；
5。
2待流速稳定后，在systemcontrol窗口点击manual→valves→InjectionMark，insert，点击execute的同时将柱顶端四路二通阀调至管路与柱头相连，开始洗脱,在一个柱体积左右，电导检测下将产生目的峰.
5.4测柱效
在Evaluation窗口中，选择实验保存的结果，在结果图中点击鼠标右键,选择Properties，点击Clear，并选中Cond_102，点击OK。
回到Evaluation窗口，选择积分按钮,在弹出窗口中,选择Cond_102，peakwindow中调整积分的范围，并在RejectPeaks中，填Peakmustbeoneof1largest；
确定后,在积分结果窗口,点击右键,选择Properties，在peaktable选项中，勾选PlateHeight（HETP）和Asymmetry。
确定后即可计算得到计算理论塔板高度HETP和对称因子As。
1WhencalculatingtheamountofmediatobepackedusetheCompressionFactor1。
1insteadofthePackingFactorabovewhichisusedduringpacking。
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