蓝耳厂家分布Word文件下载.docx
《蓝耳厂家分布Word文件下载.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《蓝耳厂家分布Word文件下载.docx（14页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。
60代
90代
120代
病毒效价（TCID50/ml）
4.5
5.0
6.5
7.5
7.5
发病率（%）
100
50
30
10
死亡率（安全）
保护率
95
90
85
80
70
安全性
低------------------------------高
有效性
高------------------------------低
4．PRRSV传代致弱机理：
TJM-F92株（蓝特威）疫苗致弱机理
–传代病毒：
PRRSVTJ株F3（强毒）
–传代细胞：
Marc-145细胞
–强毒共传代92代做为疫苗原始种毒
–病毒纯化：
每5-10代进行一次噬斑克隆纯化
JXA1株（大华农）疫苗致弱机理
PRRSVJX株F5（强毒）
–强毒共传代90代做为疫苗原始种毒
JXA1株（中牧）疫苗致弱机理
5．TJ株不同代次Nsp2基因缺失电泳图：
解释：
F3和F16大小为1004bp；
F18代后Nsp2基因序列缺失360核苷酸，片段大小约644bp左右，说明F17代克隆噬斑后选择一株基因缺失毒株。
6．TJ株不同代次Nsp2序列PCR扩增结果：
F3和F17大小为1004bp；
7．PRRSVTJ株F3、F15、F18和TJM-F92株接种试验动物体温变化曲线
8．病毒分离结果（病毒血症天数）：
Group
攻击后天数
2d
4d
6d
8d
10d
12d
14d
16d
18d
20d
空白对照
0/3
0/3
F3强毒
3/3
2/3
2/2
1/1
F15缺失前
F18缺失后
1/3
F92疫苗株
F3强毒接种后，病毒血症全程都有，说明维持时间最长，并且致死率最高。
F15较强毒接种后，病毒血症全程都有，说明维持时间较长，并且致死率较高。
F18较弱毒接种后，病毒血症仅十来天左右，说明维持时间较短，并且致死率较低。
F92弱毒接种后，病毒血症仅十来天左右，说明维持时间最短，并且致死率最低。
9．不同代次病毒血症和死亡率
分组
毒血症（攻击后天数）
死亡率
空白对照
0
>
20
2/3
≥20
≤14
10．TJM-F92株Nsp2基因缺失示意图
11．TJM-F92株疫苗基因缺失意义
•基因缺失标记疫苗，是国际疫苗发展趋势；
•Nsp2基因缺失是病毒毒力减弱部分分子学基础，已得到国际上确认；
•更重要是不易发生毒力返强；
•Nsp2基因缺失可用于鉴别诊断，用于种群净化，区域净化
–RT-PCR鉴别诊断可用于病原鉴别，简单易操作，可在基层兽医实验室普及，结果判定直观，不易出现误差
–ELISA试剂盒可鉴别疫苗免疫和感染抗体，操作简单，使用常规仪器设备，结果判定客观。
12．蓝耳疫苗安全研究
•返强试验研究
•其他安全研究：
–单剂量单次、重复安全性试验
–超剂量安全性试验（10个剂量）
–对非试用日龄猪的安全性试验
–对妊娠母猪的安全性试验
–不同品种猪安全性试验
–水平传播试验
•评价标准：
动物增重、体温、临床症状、死亡、怀孕母猪产子状况等；
13．蓝耳疫苗安全性检验结果
1.所有接种疫苗动物，包括适龄和非适龄动物，不同品种动物，怀孕动物，和不同剂量，包括单剂量、重复、10倍剂量体温正常，无任何临床副反应，增重与对照无差异；
2.疫苗接种母猪产仔情况正常，未见流产及死胎等不良反应，仔猪未分离到PRRS病毒；
14．TJM株最高代次（F98）疫苗效力研究
•疫苗：
PRRSTJM株（批次：
004-169）
–免疫剂量：
104.6TCID50/ml
–细胞代次：
Marc-145细胞F21代（细胞最高代次）
–种毒代次：
PRRSVTJM株F98（病毒最高代次）；
•试验动物：
–4周龄健康仔猪，PRRS病毒检验阴性（SN滴度<
2）
•攻击用强毒：
–PRRSVTJ株F3（批次：
004-009）
–攻击用强毒毒价为104.1TCID50/ml。
15．疫苗质量标准
•最小免疫剂量104.5/头份
•使用剂量105/头份
•内部质量控制106.2/头份
–其中使用剂量105/头份
–冻干损失100.5/头份
–保存期损失100.7/头份
16．疫苗效力结论
•疫苗对于适龄猪免疫死亡保护达100％；
•疫苗对于临床发病及病理解剖保护至少达80%以上；
•疫苗免疫保护期4-6个月；
•疫苗免疫途径是肌肉注射；
•疫苗最小免疫剂量10４.５TCID50/头份
•疫苗使用剂量105.0TCID50/头份
•疫苗生产剂量105.７TCID50/头份。
17．HP-PRRS控制与净化
•影响清除与净化实施因素与应具备条件：
–有效疫苗并与野毒存在可遗传鉴别标记；
–疫苗对各年龄猪安全；
–疫苗株应具有低排毒，复制和传播性能差；
–配套鉴别诊断试剂盒；
•HP-PRRSTJM-F92具有上述特点，和已研制出配套诊断试剂盒。
18．抗体鉴别诊断
19．多肽表位的筛选
•利用DNAStar中的Kyte-Doolittle方案预测缺失序列的亲水性，Jameson-Wolf方案预测缺失序列的抗原指数，根据建立的20种氨基酸残基抗原性指数，对预测的表位进行综合评判，选取三条可能的B细胞表位，经试验优化测定最终确定多肽1用于ELISA方法建立：
名称
位置
长度
序列
抗原指数
多肽1
2-15
14
SVKITRPKYSAQAI
0.364
多肽2
24-32
9
GHLQKEKEA
0.247
多肽3
105-119
15
PRTPAPSVSAESDLT
0.465
20．免疫后攻毒抗体检测结果
21．强毒攻击后抗体检测结果
22．ELISA检测
商业PRRSELISA盒
鉴别诊断ELISA盒
猪群未感染PRRS
-
自然感染野毒株
+
TJM-F92株免疫猪
其他疫苗免疫猪
23．净化方案
•净化原则：
–用TJM-F92株免疫
–检测与剔除阳性动物
–用TJM-F92株免疫,检验，剔除；
•净化方法：
–在同一猪场同时用TJM-F92株疫苗免疫，包括断奶猪，怀孕猪，种公猪等；
–用鉴别诊断ELISA试剂盒常规检验，例如半年；
–更换阳性猪，控制引进猪群，保证阴性猪引入；
–2-3年时间，猪群可转变为阴性群。
24．TJM-F92株疫苗特点
•种毒经细胞传代致弱
–每5-10代克隆纯化一次；
–筛选Nsp2基因360个核苷酸缺失的疫苗弱毒毒株，稳定性高
•可用作基因标记疫苗
–用RT-PCR或ELISA技术鉴别强毒株和疫苗株
–可用于大规模清群计划，鉴别免疫和感染动物；
•安全性好，早期怀孕母猪使用未见流产
•对免疫猪无免疫抑制作用
–可与其他疫苗同时使用
•工艺先进/质量稳定
–应用耐热冻干保护剂技术，保存期18个月以上
–不需冰冻保存，方便运输与保存；
25．TJM-F92株疫苗特点的描述
1.自然基因双缺失，唯一的PRRS标识疫苗
2.不散毒、不返强，全面解决生物安全问题
–接种后，疫苗毒的病毒血症持续时间在10天左右，
–病毒载量仅为其他疫苗的1%，是当前最安全的PRRS弱毒疫苗；
3.添加耐热保护剂，无需加量
–应用耐热冻干保护剂技术，保存期18个月以上，只需1头份。
–高剂量疫苗毒可快速阻断野毒感染。
4.对免疫猪无免疫抑制作用
–可与猪瘟疫苗同时使用
5.产生效力快，可用于紧急免疫
–安全性好，早期怀孕母猪使用未见流产
备注解释：
病毒载量：
简单的说就是通过测量从而显示每毫升血液里病毒的数量。
病毒血症：
当病毒进入机体后，病毒在细胞内产生毒素到一定浓度就会通过血管壁进入血液，在血液中达到一定浓度就会形成病毒血症，随后可侵入全身器官或中枢神经系统；
亦可由病毒直接侵犯中枢神经系统，继而临床出现症状。
26.总结语
TJM-F92株疫苗的安全性：
理论支撑：
从PRRSV传代致弱、病毒血症、病毒载量两方面来阐述，其安全性。
临床支撑：
用实验数据来证明，在猪体中的攻毒实验来论证不用代次的死亡率和病毒血症的维持天数，并且在不同日龄的猪和妊娠母猪来验证其安全性。
TJM-F92株的鉴别性：
自然基因双缺失，唯一的PRRS标识疫苗，对于要净化蓝耳的猪场，意义较大。
TJM-F92株的主要弱势：
TJM-F92株自然基因双缺失，对于初次接种安全系数较高，JXA1-R株的初次免疫约有逊色，主要是毒力的强弱有所不同，但是免疫之后存在基因重组的风险远比JXA1-R株的概率高，因为JXA1-R株是单基因缺失，出现基因重组的概率小很多，以后对于猪场蓝耳变异的风险的可能性会小，所以对于高致病性蓝耳的选择要理性分析以后再作出选择。
升级会员 