化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定 PDFWord文档格式.docx

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细菌总数系指1g或1ml化妆品中所含的活菌，数量。

测定细菌总数可用来判明化妆品被细菌污染的程度，以及生产单位所用的原料、工具设备、工艺流程、操作者的卫生状况，是对化妆品进行卫生学评价的综合依据。

本标准采用标准平板计数法。

1方法提要化妆品中污染的细菌种类不同，每种细菌都有它一定的生理物质性，培养时对营养要求，培养温度、培养时间、pH值、需氧性质等均有所不同。

在实际工作中，不可能做到满足所有菌的要求，因此所测定的结果，只包括在本方法所使用的条件下（在卵磷脂、吐温80营养琼脂上，于37℃培养48h）生长的一群嗜中温的需氯及兼性厌氧的细菌总数。

2培养基和试剂2.1生理盐水：

见GB7918-87《化妆品微生物标准检验方法总则》。

2.2卵磷脂、吐温80-营养琼脂培养基成分：

蛋白胨20g牛肉膏3g氯化钠5g琼脂15g卵磷脂1g吐温807g蒸馏水1000ml制法：

先将卵磷脂加到少量蒸馏水中，加热溶解，加入吐温80将其他成分（除琼脂外）加到其余蒸馏水中，溶解。

加入已溶解的卵磷脂、吐温80，混匀，调pH值为7.1～7.2，加入琼脂，121℃（151b）20min高压灭菌，储存于冷暗处备用。

3仪器3.1锥形烧瓶。

3.2量筒。

3.3pH计或精密pH试纸。

3.4高压消毒锅。

3.5试管。

3.6灭菌平皿：

直径9cm。

3.7灭菌刻度吸管：

10ml、2ml、1ml。

3.8酒精灯。

3.9恒温培养箱。

3.10放大镜。

4操作步骤4.1用灭菌吸管吸取1:

10稀释的检样2ml，分别注入到两个灭菌平甲内，每皿1ml。

另取1ml注入到9ml灭菌生理盐水试管中（注意勿使吸管接触液面），更换一支吸管，并充分混匀，使成1:

100稀释液。

吸取2ml,分别注入到两个灭菌平皿内，每皿1ml。

如样品含菌量高，还可再稀释成1:

1000，1:

100，••••••等，每种稀释度应换1支吸管。

4.2将熔化并冷至45～50℃的卵磷脂、吐温

80、营养琼脂培养基倾注平皿内，每皿约15ml，另倾注一个不加样品的灭菌空平皿，作空白对照。

随即转动平皿，使样品与培养基充分混合均匀，待不琼脂凝固后，翻转平皿，置37℃培养箱内培养48h。

5菌落计数方法先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大5～10倍的放大镜检查，以防遗漏。

记下各平皿的菌落数后。

求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数。

若平皿中有连成片状的菌落或花点样菌落蔓延生长时，该平皿不宜计数。

若片状菌落不到平皿中的一半，面其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半个平皿菌落计数后乘2，以代表全皿菌落数。

6菌落计数及报告方法6.1首先选取平均菌落数在30～300之间的平皿，作为菌落总数测定的范围。

当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即以该平皿菌落数乘其稀释倍数（见表中例１）。

6.2若有两个稀释度，其平均菌落数均在30～300个之间，则应求出两者菌落总数之比值来决定。

若其比值小于或等于2应报告其平均数，若大于2则报告其中较小的菌落数（见表中例2及例3）。

6.3若所有稀释度的平均菌落数均大于300个，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表中例4）。

6.4若所有稀释度的平均菌落数均少于30个，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表中例5）。

6.5若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300个之间，其中一个稀释度大于300个，而相邻的另一稀释度小于30个时，则以接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表中例6）。

6.6若所有的稀释度均无菌生长，报告数为每克或每毫升小于10个。

6.7菌落计数的报告，菌落数在10以内时，按实有数值报告之，大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，应以四舍五入法计算。

为了缩短数字后面零的个数，可用10的指数来表示（见下表报告方式栏）。

在报告菌落

beefextractpeptone20g3Gsodiumchloride5gar15glecithin1gTwain807g1000mldistilledwaterpreparationmethod:

firstthelecithintosmallamountsofdistilledwater,heatingtodissolve,joinedTwain80otheringredients（exceptagaroutside）totherestofthedistilledwater,dissolved.Adddissolvedlecithin,Twain80,blending,regulatingpHvaluewas7.1～7.2,addtheagar,121℃（151b）20minhighpressuresterilization,storageinthecolddarkalternate.The3instrumentsofthe3.1conicalflask.3.2cylinder.3.3pHorpHtestprecision.3.4highpressuresterilizingpot.3.5tube.3.6sterilePetridish:

diameterof9cm.3.7:

10ml,2mlsterilizationscalestraw,1ml.3.8alcohollamp.The3.9thermostaticculturebox.3.10magnifier.4stepsof4.1sterilizationstrawdrawa1:

10dilutionofthesample2ml,injectedintothetwosterilizationflatA,eachdish1ml.Another1mlintothe9mlofsterilesalineinvitro（payattentionnottomakestrawcontactsurface）,replaceastraw,andmixedthoroughly,make1:

100dilution.Draw2ml,injectedintothetwosterilePetridish,eachdish1ml.Suchassamplesofbacteriacontenthigh,canbedilutedto1:

1000,1:

100,•••,eachdilutionshouldchange1straw.4.2willbemeltedandcooledto45~50℃lecithin,Twain80,nutrientagarpourplate,eachdishisabout15ml,theotherintoasampleofsterilizedemptyPetridish,asblankcontrol.ThenturningPetridish,makethesampleandthemediumarefullymixedevenly,whenagarsolidified,turningPetridish,is37℃incubatorculture48h.In5thecolonycountingmethodtoobservedwiththenakedeye,numberofcolonies,thenamagnificationof5~10timesmagnificationendoscopy,topreventtheomission.Writedowntheplateafterthecolonynumber.ThesamedilutionofthePetridishgrowthaveragebacterialcount.Ifthedishisconnectedintoalamellarcolonyorspendinglikecolonyspreadinggrowth,notcountingthePetridish.IfthelamellarcolonytoPetridishinhalf,facetheremainghalfcolonynumberindistributionisveryuniform,maybringthehalfaPetridishbacteriumcountby2,torepresentthewholedishcolonynumber.6colonycountingandreportingmethodfirstselects6.1averagecolonynumberin30~300betweentheplate,asthecolonydeterminationrange.Whenonlyadilutionoftheaveragecolonynumberisconsistentwiththisrange,namelyinthePetridishcolonynumberbythedilutionfactor（seeTable1）.6.2iftwodilution,theaveragecolonynumberallisin30～300between,shouldthecolonytotalratiotodecide.Iftheratioislessthanorequalto2shallreporttheaverage,ifgreater

colonynumberisgreaterthan300,itshouldbeaccordingtothedilutionofthehighestaveragecolonynumbermultipliedbythedilutionmultiplereport（seeTable4）.6.4ifallthedilutiondegreeaveragecolonynumberlessthan30,theyshouldbethedilutionofthelowestaveragecolonynum