月宫栓质量标准研究Word文件下载.docx
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确立月宫栓的鉴别及含量测定方法[1-4]]，制定月宫栓的质量标准草案[5]。
方法：
采用升华法、薄层色谱法，以对照药材随行对照进行鉴别；
采用高效液相色谱法（HPLC）进行含量测定研究[6]。
结果：
采用薄层色谱法鉴别月宫栓中血竭、苦参、乳香；
采用升华法进行冰片的鉴别；
以蛇床子素为定量评价指标进行研究；
结论：
初步确定了质量标准草案[7]。
[关键词]月宫栓质量标准薄层层析法高效液相色谱法蛇床子素
AbstractObjective:
TodevelopaquantitativemethodfordeterminationofYueGongShuan.Methods:
TheoptimalextractionprocessofJunduqingspraywasstudiedbyorthogonaldesignwithextractionyieldandthecontentofglycyrrhizicacidaminoasqualityassessmentindices.TLCmethodwasutilizedtoidentifywhethertheRhizomaChuanxiongandRadixGlycyrrhizaewereinthepreparation.HPLCmethodwasdevelopedtodeterminethecontentofglycyrrhizicacidaminointhepreparation.Results:
Thebestextractionmethodwastobeextractedbywater.Conclusion:
Wecanprimarilyobtaintheoptimalpharmaceuticalpreparatingtechniqueandthequalitystandard.
Keywords:
Junduqingspraypharmaceuticalpreparatingtechniquequalitystandard.
KeyWord:
YueGongShuanTLCHPLCosthole
前言
月宫栓为临床经验方，是由月石、血竭、乳香、没药、蛇床子等中药制成的治疗妇女宫颈糜烂的中空栓剂，疗效较好。
为提高药物质量控制方法，保证疗效，对药物质量标准进行研究。
分别采用薄层色谱法鉴别血竭、苦参、乳香，升华法鉴别冰片，高效液相色谱法进行该制剂中蛇床子素含量测定，该法操作简单，重复性好，可有效控制月宫栓质量。
1仪器与试剂
1.1仪器：
Agilent1100高效液相色谱仪（四元泵DE43633702）、可变波长紫外检测器（美国安捷伦公司），超声波提取器（AS3120A，上海），电热恒温鼓风干燥箱（GZX-GF40X45，上海），电子天平（ALC-110.4上海）。
1.2试剂：
液相用水为超纯水，甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯。
薄层层析用硅胶G由青岛海洋化工有限公司制造，为化学纯。
蛇床子素对照品（购于中国药品生物制品检定所，110822-200305）。
2方法与结果
2.1血竭的鉴别：
供试品溶液的制备：
取本品1.0g研细,置具塞锥形瓶中，加乙醚10ml，密塞,震荡10分钟,滤过,即得。
对照药材溶液的制备：
血竭对照药材0.2g,同法制成对照药材溶液。
阴性液的制备：
另取除去该药的其它药材，同法制成阴性液。
照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液,对照药材溶液、阴性液各10µ
l,分别点于同一硅胶G薄层板上。
以氯仿-甲醇（19:
1）为展开剂,展开,取出,晾干。
供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同的橙色斑点，阴性液无干扰。
见附图1。
2.2乳香的鉴别
取本品1.0g研细，置具塞锥形瓶中，加60%乙醇10ml，超声10min后，滤过，即得。
对照药材0.4g，同法处理，滤液作为对照药材溶液。
阴性液溶液的制备：
取除去该药的其它药材，同法制成阴性液。
照薄层色谱法试验，分别吸取供试品溶液、对照药材溶液各溶液2µ
l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯（17：
3）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰。
供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的紫色主斑点。
见附图2。
2.3苦参的鉴别
取本品0.5g研细,置具塞锥形瓶中,加氯仿25ml，浓氨试液0.3ml,放置过夜，滤过，滤液蒸干。
残渣加氯仿0.5ml,使溶解，作为供试品溶液。
另取对照药材0.4g，同法处理，滤液作为对照药材溶液。
照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各4µ
l，分别点于同一用2%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以苯-丙酮-甲醇（8：
3：
0.5）为展开剂，展开，展距约8cm,取出，晾干。
再以甲苯-醋酸乙酯-甲醇-水（2：
4：
2：
1）10℃以下放置分层后的上层溶液为展开剂，展距约8cm，取出，晾干。
依次喷以碘化铋钾试液和亚硝酸乙醇试液。
供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的两个橙色斑点，阴性液无干扰.见附图3。
2.4冰片的鉴别
取本品粉末10mg研细,置200ml烧杯中，加热，滴加乙醇数滴使溶解，上方翻盖一蒸发皿，待有少数升华物聚集蒸发皿底，取下，加新制的1%香草醛硫酸溶液1~2滴,溶液边缘显紫色。
3含量测定
3.1测定指标与测定方法的确立本制剂由月石、枯矾等11味中药经提取加工制成，经筛选，拟以高效液相色谱法（紫外检测器）测定蛇床子中蛇床子素的含量，在选定的色谱条件下，供试品溶液中蛇床子素与相邻组分分离度良好，阴性液无干扰，经方法学考察，方法的重复性、稳定性、精密度、回收率试验均符合有关规定，因此确立本制剂含量指标为蛇床子素，方法为高效液相色谱法。
3.2测定波长的确立确定最大吸收波长为320nm。
3.3对照品溶液与供试品溶液的制备
对照品溶液的制备：
精密称取蛇床子素对照品，加乙醇溶解，制成每1ml含4.832µ
g蛇床子素的溶液，作为对照品溶液。
取本品3.0g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称重，水浴40℃加热溶解，超声处理30分钟，冷藏（0～4℃）放置过夜，取出，用甲醇补足损失，滤过，取续滤液经微孔滤膜（0.45µ
m）滤过，即得。
3.4方法系统适用性试验考察
流动相的筛选与确立：
本实验先后采用甲醇-水溶液（70：
30）（Ⅰ），甲醇-水溶液（67：
33）（Ⅱ），甲醇-水溶液（65：
35）（Ⅲ）为流动相，在系统（Ⅲ）的条件下，供试品溶液中蛇床子素与相邻组分分离度良好，阴性液无干扰。
故确立甲醇-水溶液（65：
35）为流动相系统。
色谱柱：
以十八烷基键合硅胶为填充剂；
检测波长为320nm。
理论塔板数按蛇床子素色谱峰计算，不得低于4000。
3.5对照品纯度检查取蛇床子素对照品，经液相色谱法用归一化法测定，蛇床子素对照品纯度为98.5%。
3.6阴性干扰试验取除去蛇床子以外的其它药材，按样品制备方法制成阴性液。
精密吸取供试品溶液、阴性液、对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪中，绘制液相色谱图，由色谱图提示，在对照品色谱相应的位置上，供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰，阴性液在此峰位无吸收，对本品中蛇床子素含量测定无干扰，方法专属性良好，见附图4、5、6。
4方法学考察
4.1线性范围考察取蛇床子素对照品溶液，分别精密吸取3、6、9、12、15μl溶液，注入液相色谱仪中，测定色谱峰面积，测定结果见表7。
表7蛇床子素线性范围考察表
对照品进样量ul
ug
3
14.496
6
28,992
9
43.488
12
57.984
15
72.480
色谱峰面积A
64
126
187
251
317
以蛇床子素进样量为横坐标，色谱峰峰面积为纵坐标绘制标准曲线，其回归方程为Y=21.033X-0.300（r=0.9998），蛇床子素在14.496—72.480ug的范围内线性关系良好，见附图1-1。
附图1-1
4.2精密度试验精密吸取同一供试品溶液10ul，按正文[含量测定]项下方法操作，连续进样5次，测定色谱峰面积。
结果见表10。
表10精密度考察表
测定次数12345
RSD（%）
色谱峰面积240244243235227237.82.9
实验结果提示，仪器精密度良好。
4.3稳定性试验考察取本品3.0g，精密称定，按含量测定项下制成供试品，精密取同一供试品溶液10μl，分别间隔0、2、4、6、8小时，进样分析，测定色谱峰面积，测定结果如下（表9）
表9稳定性考察表
放置时间（小时）01234
色谱峰面积234.5235231242246237.72.5
实验结果表明，供试品溶液制备后，4小时内测定，色谱峰面积无明显变化，样品稳定性良好。
4.4重复性试验分别取本品3.0g五份，精密称定，按3.3项下方法操作，制备样品。
分别精密吸取10ul，测定蛇床子素含量。
结果见表11。
表11重复性考察表
称样量（g）3.04073.04173.04363.10163.1007
蛇床子素含量（mg/g）0.08570.08310.08560.07830.08170.082882.8
实验结果提示，方法重复性良好。
4.5回收率实验精密称取已知准确含量的本品（含量0.08288mg/g）五份,各1.5g。
分别置100ml量瓶中，精密加入蛇床子素对照品溶液（0.00205mg/ml）50ml，加乙醇稀释至刻度。
结果见表12。
表12回收率实验考察
序号取样量样品含量对照品加入量实测总量回收率
RSD
（g）（mg）（mg）（mg）（%）（%）（%）
11.35730.11250.10250.211396.496.91.9
21.44790.12000.10250.222399.8
31.35210.11210.10250.209595.0
41.39010.11520.10250.213696.0
51.50980.12510.10250.224797.2
实验结果提示，本方法蛇床子素的回收率为96.9%，RSD%为1.9%。
5.十批样品含量测定
分别取10批样品，按质量标准草案【含量测定】项下方法进行测定，结果见表13。
表1310批样品中蛇床子素含量测定结果
批号
1
2
4
5
平均蛇床子素含量（mg/g）
0.0802
0.0736
0.0914
0.0813
0.0723
7
8
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