试验5柱色谱分离实验_精品文档PPT格式课件下载.ppt

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,一、实验目的,柱色谱分离示意图,二、实验原理,二、实验原理,吸附剂的性质：

均匀、表面积大、不反应、吸附能力不同,化合物的结构：

化合物的吸附性和它们的极性成正比,洗脱剂的极性：

溶解度适中、不反应、易获取回收,影响分离效果主要因素,3.试样成分的性质在给定的条件下，各个成分的分离情况，与被分离物质的结构和性质有关，对极性吸附剂而言，被分离物质的极性越大，两者吸附作用也越强。

具有极性基团的化合物，其吸附能力按下列顺序增加：

Cl，Br，IC=C-OCH3-CO2RC=O，CHO-SH-NH2-OH-CO2H,溶解试样用的溶剂，极性应与流动相接近,装置图,装柱,洗脱,主要试剂及其物理常数,偶氮苯,苏丹,300目硅胶,石油醚、乙酸乙酯,乙酸乙酯,吸附剂装填紧密，排除气泡。

最终应使吸附剂的上端平整，无凹凸面，无断层。

干法装柱湿法装柱,装柱,三、实验内容,五、实验操作步骤,1、装柱：

湿法装柱，在烧杯中，称取6g300目的硅胶粉末，再向烧杯中加入约35mL的石油醚，用玻璃棒搅拌是混合均匀。

2、混合液的加入：

将色谱柱固定好，色谱柱下放置一锥形瓶。

将石油醚硅胶混合液摇匀，趁硅胶未沉淀，通过漏斗迅速将混合液倒入色谱柱中，注意混合液不要倒满溢出。

装住过程中要不断的敲打柱子，使硅胶沉淀均匀、密实。

五、实验操作步骤,3、加样：

待溶剂石油醚至硅胶层相平时，用滴管吸取分离混合物，向色谱柱中滴加5-8滴，至混合物完全渗入到硅胶中。

（混合物为：

苏丹三、偶氮苯的苯溶液，注：

不能用极性大的溶剂溶解混合物，否则柱色谱不能分离。

4.洗脱：

用滴管吸取纯的石油醚沿管壁加入到色谱柱中，注意滴加过程沿色谱柱壁加入，防止硅胶层溅起。

继续加入石油醚，当黄色组分被洗脱至与红色组分完全分离后可用洗脱液（石油醚：

乙酸乙酯=9:

1）洗脱，直至所有物质都被洗脱完全。

4、产品收集：

分别收集不同颜色的产物及洗脱剂，并量取和记录各自的体积。

六、注意,1、吸附剂的选择和活化2、洗脱剂的选择：

对未知样品先用极性小的溶剂洗脱，再用极性大的溶剂洗脱3、装柱的技术：

松紧度4、吸附剂的用量：

是被分离样品量的30-40倍,有时需增加至100倍5、柱高：

柱子太高洗脱慢,样品为液体，可直接加样；

样品为固体，可选择合适溶剂溶解为液体再加样。

加样时，要沿管壁慢慢加入至柱顶部，勿使样品搅动吸附剂表面。

加样,三、实验内容,洗脱,在柱顶不断加入洗脱剂，使洗脱剂永远保持有适当的量，不要让洗脱剂表面流干，使流动相流速适当。

三、实验内容,试样有色，在层析柱上可直接观察。

洗脱后分别收集各个组分。

收集,试样无色，收集洗脱液时，多采用等份收集，每份洗脱剂的体积随所用吸附剂的量及试样的分离情况而定。

收集的每份洗脱剂的体积越小，分离效果越好。

三、实验内容,三、实验内容,玻砂防堵塞装柱需紧密加压不可大溶剂勿流干,四、注意事项,色谱法在有机化学中的应用:

分离混合物精制提纯化合物利用比移值（Rf）鉴定化合物跟踪反应进程,小结,色谱法的特点:

分离效率高复杂混合物,同系物,异构体等。

灵敏度高可以检测出gg-1（10-6）级甚至ngg-1（10-9）级的物质量。

分析速度快几分钟或几十分钟内可以完成一个试样分析。

小结,柱色谱法分离甲基橙和甲基蓝,实验原理,甲基橙和亚甲基蓝均为指示剂,它们的结构式如下所示:

甲基橙,亚甲基蓝,由于甲基橙和亚甲基蓝的结构不同,极性不同,吸附剂对它们的吸附能力不同,洗脱剂对它们的解析速度也不同,极性小、吸附能力弱、解析速度快的亚甲基蓝先被洗脱下来，而极性大、吸附能力强、解析速度慢的甲基橙后被洗脱下来，从而使两种物质得以分离。

本实验以硅胶为吸附剂，95%乙醇作为洗脱剂，先洗出亚甲基蓝，再用蒸馏水作洗脱剂把甲基橙洗脱下来。

三、实验内容,干法：

10g硅胶+乙醇,先用乙醇后用水操作,组分颜色,组分颜色,1mL样品加样操作0.5mL2乙醇洗涤,柱色谱操作：

实验步骤:

仪器和试剂,1.仪器锥形瓶、玻璃漏斗、色谱柱2.试剂柱层析硅胶、脱脂棉、乙醇（95%）甲基橙、亚甲基蓝。

H2O95%乙醇=11（A液）0.2molL-1HCl95%乙醇=11（B液）,实验步骤,装柱：

1、装色谱柱：

（1）取一支色谱柱，在柱子的收缩部塞一小团脱脂棉花将色谱柱垂直固定在铁架台上。

（2）关闭活塞，向柱中倒入蒸馏水（也是洗脱剂，至柱体积的1/2）（3）填吸附剂：

称取10g硅胶于小烧杯中,加入15mL蒸馏水,用玻璃棒调好通过漏斗慢慢装入玻璃柱,使其逐渐沉入底部。

用洗耳球敲打柱身使硅胶装填紧密，打开活塞，用小锥型瓶承接,控制滴速为1滴秒,装完后在上面加一层脱脂棉（，操作时要注意吸附剂始终不能露出液面）。

实验步骤（续）,加样：

当液面刚好流至脱脂棉平面相切时，立刻关闭活塞，加入5mL左右的A液,当硅胶面又将要露出时,关紧活塞,用量筒准确加入0.50mL以A液做溶剂的混合液（含甲基橙和亚甲基蓝各为0.400gL-1）。

洗脱：

待此混合液将要渗入柱内时,立即用A液洗脱,此时可以观察到有鲜明的黄、蓝两条色带形成。

黄色的甲基橙色带随洗脱剂的加入不断下移,而其顶部蓝色带不移动,当黄色带到达柱底部时,更换接受器,全部收集此黄色带,洗脱时间约10min。

此后改用B液做洗脱剂,这时可看到蓝色带开始下移,当亚甲基蓝色带到达底部时,更换接受器,全部收集此蓝色带,洗脱时间约30min。