无菌及环氧乙烷残留量检测_精品文档PPT推荐.ppt

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干热空气灭菌常用：

135145灭菌35h；

160170灭菌24h；

180200灭菌0.51h。

湿热灭菌法湿热灭菌法v湿热灭菌法是通过热蒸汽或沸水使细菌蛋白质变性而杀灭微生物的方法。

v分类分类:

煮沸灭菌流通蒸汽灭菌热压灭菌适用于：

耐高温、耐高压蒸气的物品。

金属或玻璃容器及用具、瓷器、橡胶塞、膜滤器等均能采用此法。

常用条件（温度、蒸气表压与时间）为：

115（67kPa），30min；

121（97kPa），20min；

126（139kPa），15min。

v影响湿热灭菌的因素有：

影响湿热灭菌的因素有：

细菌的种类与数量器械（被灭菌物）性质灭菌温度、压力与时间射线灭菌法射线灭菌法常用的有：

常用的有：

辐射灭菌法：

原理是射线可直接破坏细菌DNA，导致微生物死亡。

辐射灭菌的特点是不升高灭菌产品的温度，穿透性强。

羊肠线、高分子材料等医疗器械的灭菌。

紫外线灭菌法：

是利用紫外线作用于菌体核酸蛋白促使其变性，同时空气受紫外线照射后产生微量臭氧，从而起共同杀菌作用。

紫外光波长190-350nm之间，其中波长为260nm左右，对微生物的生物效应最大。

无菌室、某些工作区的空气灭菌、物体表面灭菌。

微波灭菌法：

采用频率300MHz300kMHz的电磁波照射产生热能杀灭微生物的方法。

紫外线照射灭菌时注意的问题紫外线照射灭菌时注意的问题紫外线的杀菌力，随使用时间增加而减退，一般使用时间达到额定时间70时应更换紫外线灯管，以保证杀菌效果。

紫外线灯平均寿命一般为2000h。

紫外线的杀菌作用随菌种不同而不同，杀霉菌的照射量要比杀杆菌大4050倍。

紫外线照射通常按相对湿度为60的基础设计，室内湿度增加时，照射量应相应增加。

紫外线灭菌效果与照射的时间长短有关，这需要通过验证来确定照射时间。

紫外照射灯的安装形式及高度，应根据实际情况，参考使用说明决定滤过除菌法滤过除菌法v滤过除菌法：

滤过除菌法：

指用滤过方法除去活的或死的微生物的方法，是一种机械除菌方法，供除菌用的滤器，要求能有效地从溶液中除净微生物，溶液能顺畅地通过，容易清洗，操作简便。

v适用于：

对热不稳定的药物溶液、气体、水等的除菌。

v常用除菌滤器常用除菌滤器（应在无菌操条件下进行）：

0.22m或0.3m的微孔滤膜G6垂熔玻璃滤器化学灭菌法化学灭菌法v气体灭菌法：

气体灭菌法：

指用化学药品的气体或蒸气杀灭微生物的方法。

常用气态杀菌剂：

为环氧乙烷、甲醛、丙二醇、臭氧、乳酸、过氧乙酸等。

v药液灭菌法药液灭菌法:

药液灭菌法利用药液杀灭微生物的方法。

常用的有0.1%0.2%苯扎溴铵溶液，75%乙醇、2%煤酚皂溶液、1%聚维酮碘溶液等。

小结小结v高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌:

工作服、口罩、稀释液等，置高压杀菌锅内，一般采用121灭菌半小时,不同的培养基有不同的要求,应分别处理。

v火焰灭菌：

火焰灭菌：

接种针、接种环等可直接火焰灭菌。

v高温干燥灭菌：

高温干燥灭菌：

各种玻璃器皿、注射器、吸管等，置于燥箱中160灭菌2小时。

v一般消毒一般消毒:

无菌室内的凳、工作台、试管架、天平、待检物容器或包装均无法进行灭菌，必须用其他方法进行消毒处理，可采用适当的消毒液擦拭消毒，工作人员的手也用此法进行消毒。

v空气的消毒：

空气的消毒：

开启紫外灯照射3060分钟即可。

提纲提纲1.1.常用灭菌方法常用灭菌方法常用灭菌方法常用灭菌方法3.3.微生物检验基础知识微生物检验基础知识微生物检验基础知识微生物检验基础知识4.4.医疗器械无菌检查医疗器械无菌检查医疗器械无菌检查医疗器械无菌检查2.2.环氧乙烷残留量环氧乙烷残留量环氧乙烷残留量环氧乙烷残留量环氧乙烷灭菌相关知识环氧乙烷灭菌相关知识v环氧乙烷灭菌利用环氧乙烷在常温下为气态，蒸汽压较大，对灭菌物品的穿透性强，可以穿透微孔而达到物品的深部，环氧乙烷是一种非常活泼的灭菌剂，杀菌能力强且广泛，有很强的穿透能力，适合于包装物品的灭菌，对物品损坏轻微，且费用较低。

现大部分的医疗器械生产企业采用此种方法灭菌。

v环氧乙烷能够高效地对医疗产品进行灭菌，在杀灭微生物的同时医疗产品上的环氧乙烷残留也会对使用者和患者的身体带来一定的毒害。

其毒性包括两个方面：

一为环氧乙烷本身的毒性。

通过呼吸器官吸入体内刺激呼吸道，引起恶一为环氧乙烷本身的毒性。

通过呼吸器官吸入体内刺激呼吸道，引起恶心、呕吐、头昏、头痛、嗜睡等症状。

严重者可引起肺水肿；

通过皮肤、心、呕吐、头昏、头痛、嗜睡等症状。

通过皮肤、粘膜接触后，引起红肿、水泡及血泡，严重者可出现局部皮肤烧伤及粘粘膜接触后，引起红肿、水泡及血泡，严重者可出现局部皮肤烧伤及粘膜组织灼伤，造成毛发脱落；

超量进入人体血液内，可致红细胞溶解，膜组织灼伤，造成毛发脱落；

超量进入人体血液内，可致红细胞溶解，补体灭活和凝血酶破坏引起全身性溶血。

补体灭活和凝血酶破坏引起全身性溶血。

二是灭菌后生成物的毒性。

环氧乙烷与氯元素接触产生毒性很大的氯醇，二是灭菌后生成物的毒性。

环氧乙烷与氯元素接触产生毒性很大的氯醇，与水接触形成乙二醇，对环境和种植物的生产起到很大的破坏作用。

与水接触形成乙二醇，对环境和种植物的生产起到很大的破坏作用。

环氧乙烷灭菌相关知识环氧乙烷灭菌相关知识v医疗器械产品如采用环氧乙烷灭菌，应由有资格的人员负责设备维护灭菌的确认和常规控制及产品放行工作。

应不断提高各类人员对环氧乙烷残留量造成健康风险的意识，首先经环氧乙烷灭菌的医疗器械必须按规定进行解析，即纸塑包装灭菌首先经环氧乙烷灭菌的医疗器械必须按规定进行解析，即纸塑包装灭菌后解析后解析77天，全塑包装灭菌后解析天，全塑包装灭菌后解析1414天，并经检测确定器械上的环氧乙烷天，并经检测确定器械上的环氧乙烷残留量小于残留量小于1010g/gg/g后出厂；

后出厂；

其次经环氧乙烷灭菌的医疗器械应采用透气性好，有助于消除残留环氧其次经环氧乙烷灭菌的医疗器械应采用透气性好，有助于消除残留环氧乙烷的纸塑包装，以最大限度地降低环氧乙烷残留，降低器械使用的风乙烷的纸塑包装，以最大限度地降低环氧乙烷残留，降低器械使用的风险；

险；

第三体积越大，环氧乙烷含量绝对就越高；

对于医用敷料、无纺布、合第三体积越大，环氧乙烷含量绝对就越高；

对于医用敷料、无纺布、合成医用乳胶手套等对环氧乙烷气体有很强的吸附性，吸附在这类产品上成医用乳胶手套等对环氧乙烷气体有很强的吸附性，吸附在这类产品上的残留量很难彻底解析，所以对此类产品，不应选用环氧乙烷灭菌。

的残留量很难彻底解析，所以对此类产品，不应选用环氧乙烷灭菌。

环氧乙烷残留量测定方法环氧乙烷残留量测定方法v气相色谱法v比色分析法原理：

环氧乙烷在酸性条件下水解成乙二醇，乙二醇经高碘酸氧化生成甲醛，甲醛与品红-亚硫酸试液反应产生紫红色化合物，通过比色法分析可求得环氧乙烷含量。

所用试剂：

高碘酸，硫代硫酸钠，无水亚硫酸钠，碱性品红，盐酸，乙二醇等浸提方法：

分模拟使用浸提法和极限浸提法。

模拟使用浸提法：

用0.1mol/L盐酸作为浸提介质,整个或部分与人体接触的器械在37（人体温度）浸提,不直接与人体接触的器械在25（室温）浸提.浸提时间应考虑在推荐或预期使用最为严格的时间条件下进行,但不短于1h.浸提表面为器械与药液或血液接触的表面.极限浸提法:

取样品上有代表性的部位,截为5mm长碎块,称取2.0g置于容器中,加0.1mol/L盐酸10ml,室温放置1h,作为供试液;

对于容器类样品,可加0.1mol/L盐酸至公称容量,在371下恒温1h.环氧乙烷残留量环氧乙烷残留量v试验步骤绘制标准曲线：

取5支纳氏比色管，分别精确加入0.1mol/L盐酸2ml,再精确加入0.5m、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml乙二醇标准溶液。

另取一支纳氏比色管，精确加入0.1mol/L盐酸2ml作为空白对照。

于上述各管中分别加入高碘酸溶液（5g/L）0.4ml，摇匀，放1h，然后分别滴加硫代硫酸钠溶液（10g/L）至出现的黄色恰好消失。

再分别加入品红-亚硫酸试液0.2ml，用蒸馏水稀释到10ml，摇匀，3537条件下放置1h,于560nm波长处以空白液作参比，测定吸光度。

绘制吸光度-体积标准曲线。

试验方法：

精确量取供试液2.0ml于纳氏比色管中，按上面的步骤操作，以测得的吸光度从标准曲线上查得试液相应的体积。

、提纲提纲1.1.常用灭菌方法常用灭菌方法常用灭菌方法常用灭菌方法3.3.微生物检验基础知识微生物检验基础知识微生物检验基础知识微生物检验基础知识4.4.医疗器械无菌检查医疗器械无菌检查医疗器械无菌检查医疗器械无菌检查2.2.环氧乙烷残留量环氧乙烷残留量环氧乙烷残留量环氧乙烷残留量微生物检验基础知识微生物检验基础知识无菌技术：

无菌技术：

是指在微生物试验工作中，控制或防止各类微生物的污染及其干扰的一系列操作方法和有关措施，其中包括无菌环境设施、无菌试验器材以及无菌操作。

无菌环境设施无菌环境设施无菌室的使用与管理要求超净工作台的使用与管理要求生物安全柜无菌试验器材无菌试验器材无菌操作：

无菌操作：

概念：

是指在无菌环境条件下，在对无菌制品或无菌器械进行检验的过程中，能防止微生物污染与干扰的一种常规操作方法。

注意事项。

提纲提纲1.1.常用灭菌方法常用灭菌方法常用灭菌方法常用灭菌方法2.2.环氧乙烷残留量环氧乙烷残留量环氧乙烷残留量环氧乙烷残留量4.4.医疗器械无菌检查医疗器械无菌检查医疗器械无菌检查医疗器械无菌检查3.3.微生物检验基础知识微生物检验基础知识微生物检验基础知识微生物检验基础知识医疗器械无菌检查引用标准医疗器械无菌检查引用标准v中华人民共和国药典中华人民共和国药典20052005版版v/医用输液输血医用输液输血注射器具检验方法第部分：

生物学试验方法注射器具检验方法第部分：

生物学试验方法无菌检查法的定义无菌检查法的定义v中华人民共和国药典中华人民共和国药典20052005版：

版：

无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品，医疗器具，原料，辅料及其他品种是否无菌的一种方法v/：

本试验系将医疗器械或其浸提液接种于培养基内，以检验供试品是否有细菌和真菌污染无菌检查方式无菌检查方式v直接接种法直接接种法v薄膜过滤法薄膜过滤法主要设备主要设备v超净工作台超净工作台v恒温培养箱恒温培养箱v恒温水浴箱恒温水浴箱v压力蒸汽灭菌器压力蒸汽灭菌器v电热干燥箱电热干燥箱v光学显微镜光学显微镜主要器具主要器具v试管及试管架试管及试管架v酒精灯酒精灯v7575乙醇棉乙醇棉v灭菌刻度吸管灭菌刻度吸管（1ml）（1ml）v灭菌平皿（灭菌平皿（9cm9cm）v锥形瓶锥形瓶v三角烧瓶三角烧瓶v灭菌剪刀、镊子等灭菌剪刀、镊子等主要培养基主要培养基v流体硫乙醇酸盐培养基流体硫乙醇酸盐培养基v改良马丁培养基改良马丁培养基v营养琼脂培养基营养琼脂培养基稀释液、冲洗液及其制备方法稀释液、冲洗液及其制备方法v无菌氯化钠溶液：

无菌氯化钠溶液：

质量浓度为9g/L的无菌氯