多肽药物分析PPT文件格式下载.ppt

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甚至由受体的激动剂变为拮抗剂甚至由受体的激动剂变为拮抗剂;

n人工设计出的多肽人工设计出的多肽:

多肽固相合成和组合化学产生了肽库多肽固相合成和组合化学产生了肽库,短时间内获短时间内获得大量的多肽化合物得大量的多肽化合物药物筛选的效率不断提高药物筛选的效率不断提高获得多肽类药物的可能性提高获得多肽类药物的可能性提高二、合成多肽药物药学研究的基本考虑二、合成多肽药物药学研究的基本考虑1、关于多肽（原料药）合成工艺选择的考虑、关于多肽（原料药）合成工艺选择的考虑目前主要有目前主要有液相合成和固相合成两种方法液相合成和固相合成两种方法。

n液相合成液相合成:

逐步合成或片段缩合方法。

n逐步合成法逐步合成法:

n片段缩合片段缩合:

n液相合成的优点液相合成的优点:

中间产物纯化、中间产物的理化常数、可以随意中间产物纯化、中间产物的理化常数、可以随意进行非氨基酸修饰、可以避免氨基酸缺失进行非氨基酸修饰、可以避免氨基酸缺失n缺点是较为费时、费力等。

缺点是较为费时、费力等。

固相合成固相合成:

n优点优点简化了每步反应的后处理操作，避免因手工操简化了每步反应的后处理操作，避免因手工操作和物料转移而产生的损失，产率较高且能够实现作和物料转移而产生的损失，产率较高且能够实现自动化等自动化等n缺点缺点每步中间产物不可以纯化，必须采用较大的氨每步中间产物不可以纯化，必须采用较大的氨基酸过量投料，粗品纯度不如液相合成物，必需通基酸过量投料，粗品纯度不如液相合成物，必需通过可靠的分离手段进行纯化等。

过可靠的分离手段进行纯化等。

n液相合成法较适于合成短肽；

液相合成法较适于合成短肽；

n固相合成法更适于合成中、长肽。

固相合成法更适于合成中、长肽。

2、关于多肽结构确证研究的考虑、关于多肽结构确证研究的考虑氨基酸组成分析、质谱、氨基酸序列测定等对氨基酸组成分析、质谱、氨基酸序列测定等对其结构确证有重要意义。

其结构确证有重要意义。

对于具有一定空间结构才能发挥其活性的多肽，对于具有一定空间结构才能发挥其活性的多肽，应进行必要的立体化学研究。

应进行必要的立体化学研究。

3、关于多肽制剂处方工艺研究的考虑、关于多肽制剂处方工艺研究的考虑合成多肽药物制剂研究的总体目标和要求与其合成多肽药物制剂研究的总体目标和要求与其它类型化学药物制剂是一致的，即通过一系列研究它类型化学药物制剂是一致的，即通过一系列研究工作，保证制剂剂型选择依据充分、处方合理、工工作，保证制剂剂型选择依据充分、处方合理、工艺稳定、生产过程得到有效控制，并能实现工业化艺稳定、生产过程得到有效控制，并能实现工业化生产。

生产。

但是，由于多肽药物的生物活性可能和但是，由于多肽药物的生物活性可能和其空间结构相关，多肽分子中存在大量的酰胺其空间结构相关，多肽分子中存在大量的酰胺键，另外还可能有羧基、羟基、氨基、巯基等键，另外还可能有羧基、羟基、氨基、巯基等较为活泼的基团，较易水解或降解，因此了解较为活泼的基团，较易水解或降解，因此了解合成多肽药物的物理化学稳定性和生物学稳定合成多肽药物的物理化学稳定性和生物学稳定性对选择适宜的剂型和合理的处方、制备工艺性对选择适宜的剂型和合理的处方、制备工艺有重要作用。

有重要作用。

4、关于多肽药物质量研究的考虑、关于多肽药物质量研究的考虑n多肽药物质量研究与其它类型化学药物基本一致。

多肽药物质量研究与其它类型化学药物基本一致。

n不同之处在于不同之处在于:

氨基酸组成分析；

中、长肽要做效价、免疫原性氨基酸组成分析；

中、长肽要做效价、免疫原性和抗原活性等研究。

和抗原活性等研究。

注意工艺杂质注意工艺杂质:

n缺失缺失（不完全不完全）肽、断裂肽、去酰胺多肽、氨基酸侧肽、断裂肽、去酰胺多肽、氨基酸侧链的不完全脱保护所形成的副产物、氧化肽、二硫链的不完全脱保护所形成的副产物、氧化肽、二硫键交换的产物、非对映异构的多肽、低聚物和键交换的产物、非对映异构的多肽、低聚物和/或或聚合物聚合物n毒性试剂和溶剂毒性试剂和溶剂5、关于多肽药物稳定性研究的考虑、关于多肽药物稳定性研究的考虑多肽药物不稳定的原因多肽药物不稳定的原因:

n水解、氧化、外消旋化、二硫键的断裂及重排、水解、氧化、外消旋化、二硫键的断裂及重排、消除、凝聚、沉淀、吸附等。

消除、凝聚、沉淀、吸附等。

n稳定性研究应根据多肽药物稳定性的特点合理稳定性研究应根据多肽药物稳定性的特点合理选择试验条件、考察项目。

选择试验条件、考察项目。

三、合成多肽药物药学研究的主要内容三、合成多肽药物药学研究的主要内容n原料药的制备工艺研究原料药的制备工艺研究n结构确证研究结构确证研究n制剂的处方工艺研究制剂的处方工艺研究n质量研究和质量标准的制订质量研究和质量标准的制订n稳定性研究稳定性研究

（一）原料药制备工艺研究

（一）原料药制备工艺研究1、工艺选择、工艺选择根据目标肽的结构、自身生产条件等考虑选用根据目标肽的结构、自身生产条件等考虑选用液相合成或固相合成工艺。

液相合成或固相合成工艺。

均需要提供均需要提供:

化学反应式、工艺流程图、操作过程等，对工化学反应式、工艺流程图、操作过程等，对工艺参数（如投料量、反应条件、反应试剂）要有详艺参数（如投料量、反应条件、反应试剂）要有详细的描述，包括对于多肽的修饰（例如二硫键的形细的描述，包括对于多肽的修饰（例如二硫键的形成等）。

成等）。

2、起始原料、试剂的质量控制、起始原料、试剂的质量控制n氨基酸及其衍生物氨基酸及其衍生物n氨基酸及其衍生物的质量标准一般应包括氨基酸及其衍生物的质量标准一般应包括:

n性状、熔点、比旋度、化学纯度、色谱纯度及光学性状、熔点、比旋度、化学纯度、色谱纯度及光学纯度、含量等，其中化学纯度和光学纯度的控制尤纯度、含量等，其中化学纯度和光学纯度的控制尤为重要。

为重要。

n如果使用了特殊的氨基酸或其衍生物如果使用了特殊的氨基酸或其衍生物,申报资料中还申报资料中还应提供其合成工艺及结构研究的相关资料。

应提供其合成工艺及结构研究的相关资料。

树脂树脂n采用固相合成方法制备多肽，应提供树脂的来源、采用固相合成方法制备多肽，应提供树脂的来源、质量标准和检验报告，并对树脂的摩尔取代系数、质量标准和检验报告，并对树脂的摩尔取代系数、在不同溶剂中的膨胀系数、所用合成条件下的稳定在不同溶剂中的膨胀系数、所用合成条件下的稳定性情况、交联度等予以说明。

性情况、交联度等予以说明。

n常用树脂包括聚苯乙烯常用树脂包括聚苯乙烯-苯二乙烯交联树脂、聚丙苯二乙烯交联树脂、聚丙烯酰胺和聚乙烯烯酰胺和聚乙烯-乙二醇类树脂及衍生物等，应根乙二醇类树脂及衍生物等，应根据目标多肽据目标多肽C末端氨基酸的不同类型（如羧酸型、末端氨基酸的不同类型（如羧酸型、酰胺型等）选择特定用途的树脂，并说明选择的依酰胺型等）选择特定用途的树脂，并说明选择的依据。

据。

3、工艺的过程控制、工艺的过程控制

（1）反应终点监控）反应终点监控n液相合成属于常规有机合成，一般可采用色谱法液相合成属于常规有机合成，一般可采用色谱法（如如TLC法、法、HPLC法法）监测；

监测；

n固相合成偶合反应的终点可采用茚三酮法、三硝基固相合成偶合反应的终点可采用茚三酮法、三硝基苯磺酸（苯磺酸（TNBS）法和四氯苯醌等监测。

二硫键连）法和四氯苯醌等监测。

二硫键连接的终点可用接的终点可用Ellman试验或试验或HPLC法监测。

法监测。

（2）中间体质量控制）中间体质量控制n液相合成：

液相合成：

缩合片段：

比旋度、熔点和纯度等进行控制。

较长序列的中间体：

氨基酸组成分析、氨基酸序列较长序列的中间体：

氨基酸组成分析、氨基酸序列分析、质谱、比旋度等。

分析、质谱、比旋度等。

n固相合成：

一般无中间体分离过程。

但如果多肽从固相合成：

但如果多肽从树脂上切割后还需进行后续反应，对中间体的质量树脂上切割后还需进行后续反应，对中间体的质量也要进行相应控制，同时还要进行相应的结构研究。

也要进行相应控制，同时还要进行相应的结构研究。

4、分离和纯化、分离和纯化n多肽纯化的方法包括：

多肽纯化的方法包括：

重结晶、逆流分布、电泳、离子交换色谱、凝胶过滤重结晶、逆流分布、电泳、离子交换色谱、凝胶过滤色谱、反相色谱等。

色谱、反相色谱等。

n常见的纯化方法常见的纯化方法：

凝胶柱脱盐，制备型高效液相：

凝胶柱脱盐，制备型高效液相色谱纯化。

色谱纯化。

n样品的干燥方法样品的干燥方法：

常用冻干法，如果多肽对温度：

常用冻干法，如果多肽对温度不敏感，也可采用室温或高温干燥。

不敏感，也可采用室温或高温干燥。

申报资料纯化方法应包括：

n详细的验证性资料例如纯化前后样品的代表性色谱详细的验证性资料例如纯化前后样品的代表性色谱图以说明纯化效果。

图以说明纯化效果。

n提供详细的纯化过程和相关的工艺参数。

提供详细的纯化过程和相关的工艺参数。

n纯化工艺的研究可结合质量研究中杂质分析方法的纯化工艺的研究可结合质量研究中杂质分析方法的验证进行。

验证进行。

（二）结构确证研究

（二）结构确证研究多肽结构研究的主要目的：

多肽结构研究的主要目的：

是要说明其氨基酸组成，序列是否正确，多肽分是要说明其氨基酸组成，序列是否正确，多肽分子中如有半胱氨酸，应明确其状态（氧化态或还子中如有半胱氨酸，应明确其状态（氧化态或还原态），对含有多个半胱氨酸的多肽，应明确二原态），对含有多个半胱氨酸的多肽，应明确二硫键的正确连接位点。

对于长肽，需要对其空间硫键的正确连接位点。

对于长肽，需要对其空间结构（例如二级、三级结构）进行研究。

结构（例如二级、三级结构）进行研究。

n短肽：

短肽：

元素分析、红外光谱、核磁共振谱、氨基酸组元素分析、红外光谱、核磁共振谱、氨基酸组成分析、质谱等常见方法，氨基酸序列测定。

成分析、质谱等常见方法，氨基酸序列测定。

n中、长肽：

中、长肽：

氨基酸组成，氨基酸序列分析。

（氨基酸组成，氨基酸序列分析。

（Edman降解，降解，质谱：

分子量及其序列信息，是对质谱：

分子量及其序列信息，是对Edman降解降解的很好补充。

）的很好补充。

）n中、长肽的结构研究中，尽管紫外光谱、红外光谱、核磁中、长肽的结构研究中，尽管紫外光谱、红外光谱、核磁共振谱等能够提供的可供分析的信息有限，但在一些情况共振谱等能够提供的可供分析的信息有限，但在一些情况下，上述研究还应考虑进行。

例如，在可获得结构确证对下，上述研究还应考虑进行。

例如，在可获得结构确证对照品时，进行上述谱图的对比测定，对于说明所研制产品照品时，进行上述谱图的对比测定，对于说明所研制产品的结构有重要意义；

对于全新结构的多肽，进行上述研究，的结构有重要意义；

对于全新结构的多肽，进行上述研究，也可为说明多肽