培养基的制备实验总结Word下载.docx

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基础培养基含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。

其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素，而NaCl提供无机盐。

在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂，琼脂在常用浓度下96℃时溶化，实际应用时，一般在沸水浴中或下而垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。

琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。

固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。

由于这种培养基多用于培养细菌，因此要用稀酸或稀碱将其PH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。

牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下：

牛肉膏3.0g

蛋白胨10.0g

NaCl5.0g

水1000ml

pH7.4—7.6

实验仪器与药品

1.溶液或试剂：

牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol／LNaOH、1mol／LHCl。

2.仪器或其他用具：

试管、三角瓶、1000ml烧杯（或1000ml刻度搪瓷杯）、量筒、玻棒、培养基分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH试纸（pH5.5-9.0）、普通棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布等。

实验步骤

（一）牛肉膏蛋白胨培养基的制备

1.称量（假定配制1000ml培养基）

按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯（或1000ml刻度搪瓷杯）中．牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。

也可放在称量纸上，称量后直接放人水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。

2.溶化

在上述烧杯中先加入少于所需要的水量（如约700ml），用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解，将药品完全溶解后，补充水到所需的总体积（1000ml）；

如果配制固体培养基时，将称好的琼脂放人已溶的药品中，再加热溶化，最后补足所损失的水分。

3.调pH

在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH，如果偏酸．用滴管向培养基中逐滴加入1mol／LNaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其PH，直至pH达7.4-7.6。

反之，用1mol／LHCl进行调节。

4.过滤

趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利某些实验结果的观察。

可以省去（本实验勿需过滤）。

5.分装

液体分装

分装高度以试管高度的1／4左右为宜。

分装三角瓶的虽则根据需要而定，一般以不超过三角瓶容积的一半为宜，如果是用于振荡培养用，则根据通气量的要求酌情减少；

有的液体培养基在灭菌后，需要补加一定量的其他无菌成分，如抗生素等，则装量一定要准确。

固体分装

分装试管，其装量不超过管高的1／5，灭菌后制成斜面。

分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。

半固体分装

一般以试管高度的1／3为宜，灭菌后垂直待凝。

6.加塞

培养基分装完毕后，在试管口或三角瓶口上塞上棉塞（或硅胶塞、金属或高温塑料试管帽等），以阻止外界微生物进入培养基内面造成污染，并保证有良好的通气性能（棉塞制作方法附本实验后面）。

7.包扎

加塞后，将全部试管放入铁丝筐或用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。

用记号笔注明培养基名称、配制日期。

三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，使用时容易解开，同样用记号笔注明培养基名称、配制日期。

8.灭菌

将上述培养基以0.103MPa，l21℃，20min高压蒸气灭菌。

9.摆斜面

将灭菌的试管培养基冷至50℃左右（以防斜面上冷凝水太多），将试管口端搁在玻棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜

l0.无菌检查

将灭菌培养基放入37℃的恒温箱中培养24-48h．以捡查灭菌是否彻底。

注意事项

1.蛋白胨很容易吸湿，在称取时动作要迅速，另外，称量时严防药品混杂．一把牛角匙用于一种药品．或称取一种药品后，洗净——擦干——再称职另一药品——瓶盖也不要盖错。

2.在琼脂溶化过程中．应控制火力，以免培养基因沸腾而溢出容器。

同时，需不断搅拌，以防琼脂糊底烧焦，制培养基时，不可用铜或铁锅加热溶化，以免离子进入培养基中，影响细菌生长。

3.对于有些要求PH较精确的微生物，其PH的调节可用酸度计进行（使用方法、可参考有关说明书）。

pH不要调过头，以避免回调而影响培养基内各离子的浓度。

配制pH低的琼脂培养基时．若预先记好PH并在高压蒸汽下灭菌，则琼脂因水解不能凝固。

因此，应将培养基的成分和琼脂分开灭菌后再混合，或在中性pH条件下灭菌，再调整pH。

4.分装过程中，注意不要使培养基沾在管（瓶）口上，以免沾污面塞而引起污染。

（二）高压蒸汽灭菌法步骤

1.加水

使用前在锅内加入适量的水，加水不可过少，以防将灭菌锅烧干，引起炸裂事故。

加水过多有可能引起灭菌物积水。

水面与三角架相平为宜

2.装料

将灭菌物品放在灭菌桶中，不要装得过满。

3.加盖

盖好锅盖，按对称方法旋紧四周固定螺旋，打开排气阀。

4.加热排气

加热后水蒸气与空气一起从排气孔排出，待锅内沸腾并有大量蒸汽自排气阀冒出时，排出的气流很强并有嘘声时，维持2—3min以排除冷空气。

如灭菌物品较大或不易透气，应适当延长排气时间，务必使空气充分排除，然后将排气阀关闭。

5.加压

将排气阀关闭

6.保压

当压力升至0.1MPa时，温度达121℃，此时应注意观察，控制热源。

保持压力稳定，维持20-30min后，切断热源。

7.自然降压

当压力表降至“0”处，稍停，使温度继续降至100℃以下后，打开排气阀，旋开固定螺旋，开盖，取出灭菌物。

注意：

切勿在锅内压力尚在“0”点以上，温度也在100℃以上时开启排气阀，否则会因压力骤然降低，而造成培养基剧烈沸腾冲出管口或瓶口，污染棉塞，以后培养时引起杂菌污染。

压力降到“0”时，方可打开排气阀。

8.保养

灭菌完毕取出物品后，将锅内余水倒出，以保持内壁及内胆干燥，盖好锅盖。

9.培养基无菌检查五、关键步骤及注意事项

1.要严格按配方配制。

2.调pH不要过头。

3.干热灭菌要注意物品不要堆放过紧，注意温度的时间控制，70oC以下放物、取物。

4.高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零取物。

5.过滤除菌要注意各部件灭菌，压滤时，压力要适当，不可太猛太快，滤膜要注意清洗保存。

陕西师范大学远程教育学院

生物学实验报告

报告题目《培养基的制备与消毒灭菌》

姓名学号

专业

批次/层次

指导教师学习中心实验报告

篇二：

培养基的制备与灭菌实验报告（详细）

一、实验题目：

培养基的制备与灭菌

二、实验目的：

1、明确培养基的配置原则，掌握配置方法。

2、了解灭菌的原理，学习掌握灭菌器的使用方法。

三、实验器材：

1、药品：

牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。

2、仪器：

三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。

四、实验原理：

1、培养基的制备

包括一下几种成分：

（1）水分：

主要成分。

（2）N源：

包括无机氮和有机氮。

（3）C源：

主要是含碳有机物、碳氢化合物等。

（4）无机盐：

如NaCl、KH2PO4等。

微量元素：

Cu、K、Mg、S、P、Zn。

有些还需要添加“生长因子”，通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等。

2、培养基配置的原则

根据不同的培养对象及培养目的，选用不同的培养基，但有机物总量不得超过15%，盐类一般不超过1%。

培养基有以下分类：

按成分：

天然培养基、合成培养基、半合成培养基

按状态：

固体培养基、半固体培养基、液体培养基

按用途：

基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基

培养基配好后应立即灭菌，防止营养物质中的微生物富集。

3、灭菌：

用理化手段杀灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子，在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。

（1）高压蒸汽灭菌：

将物品放入封闭的加压灭菌器，加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽，将冷空气排尽，压力上升，使水沸点变高，导致菌体蛋白质变性，一般0.1MPa、121℃、15~30min可以彻底灭菌，本次实验灭菌20min。

若是含糖培养基，110℃、30min。

（2）干热灭菌：

微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变性。

因高温，所以含水量小，不利于蛋白质受热变性，所以温度高，时间长。

（3）紫外灭菌：

诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DNA复制。

（4）过滤除菌：

实验室中用微孔滤膜（孔径一般为0.22μm）。

除病菌需更小。

五、实验步骤：

1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备

依次准确称取0.5g牛肉粉、1.0g蛋白胨、0.5gNaCl放入烧杯，加入100mL水，用玻璃棒搅匀溶解，移入三角瓶，并加入1.5g琼脂。

加上棉塞，迅速拔出能发出清脆声响即可，用报纸包住并系好麻绳。

2、包移液管和培养皿

（1）包一包培养皿（一包五个）：

用手压紧、塞好，折出棱角，包好后摇晃没有培养皿相互碰撞的声音即可。

（2）包2支移液管：

用棉花塞好移液管尾部，露出1~2cm即可。

取长条报纸，一端折

90°

角，紧密严实沿30°

角卷好移液管，尾部叠好防止散开。

3、高压蒸汽灭菌

（1）灭菌前要先看水位是否合适。

（2）将包好的待灭菌物品放入内层锅，不要装得太挤，棉塞不应染上培养基。

（3）加盖，两两对称旋紧螺栓。

（4）设定条件：

0.1MPa、121℃、20min，进行加热。

（5）先打开排气阀，待空气排尽后，关上排气阀。

（6）结束后，自然降温，压力降为0后，打开排气阀取出物品。

4、干热灭菌

（1）将包好的待灭菌物品放入电热干燥箱内，关好门箱。

（2）设定条件：

160~170℃，恒温2h。

（3）结束后，切断电源，自然降温，降到70℃以下后开箱取物。

六、思考题：

1、你配制的是什么培养基？

选择培养基。

2、选择培养基与鉴别培养基的区别？

这两种