核酸分子杂交试题Word下载.docx

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A.50—300bpB.20—200bp—400bp—500

7.进行核酸杂交时，一般适宜的复性温度较Tm值低（）o

）下进行。

9.下列哪种试剂能降低核酸杂交的币值（B）o

10.在凝胶中核酸变性时，为了使DNA片段在合理的时间内从凝胶中移动出来,必须将最长的DNA片段控制在大约（）。

11.将RNA或DNA变性后直接点样于硝酸纤维素膜上，用于基因组中特定基因

及其表达的定性及定量研究，称为（）o

A.原位杂交B.核酸酶保护实验

C.斑点印迹D.狭缝印迹

12.核酸保持在细胞或组织切片中经适当方法处理细胞或组织后，将标记的核酸探针与细胞或组织中的核酸进行杂交，称为（）o

A.原位杂交B.核酸酶保护实验C.斑点印迹D.狭缝印迹

13.在将固定于膜上的DNA片段与探针进行杂交之前，必须将膜上所有能与DNA结合的位点全部封闭，称为（B）o

A.杂交B.预杂交

C.杂交前处理D.Nouthern印迹杂交

14.进行间期细胞内染色体DNA的原位杂交时，关键是（）。

A.细胞的培养B.加固定液

C.载波片上的固定D.细胞染色体的制备

15.组织细胞杂交前的预处理的关键是（C）o

A.降解细胞外蛋白B.降解细胞内蛋白

C.降解核酸表面蛋白D.降解核酸内DNA

16.组织细胞杂交前预处理时，降解核酸表面的蛋白质常用的蛋白酶是（）o

A.蛋白酶CB.蛋白酶K

C.蛋白酶AD.蛋白酶I

17.在进行原位杂交时，RNA探针杂交的时间最好是（）o

18.在核酸杂交中，目前应用最为广泛的一种探针是（A）。

A.基因组DNA探针B.寡核昔酸探针

C.cDNA探针D.RNA探针

19.在Southern印迹杂交中用来标记核酸探针最常用的核素是（）。

A.32PB.3HC.35SD.1251

20.在下列非核素标记物中，既属于半抗原，同时也属于配体的是（）o

A.地高辛B.生物素C.亲合素D.罗丹明

21.一些标记物可与某种物质反应产生化学发光现象，通过化学发光可以象核素

一样直接使X线胶片上的乳胶颗粒感光。

这些标记物称为（）。

A.半抗原B.配体C.荧光素D.化学发光探针

22.SephadexG—50柱析法中，随着流动相流出的是（）。

A.小分子物质B.dATP

C.大分子探针D.dGTP

23.下列DNA分子的组成中，哪种是核酸变性的最主要的因素（C）o

A.ATB.AGC.GCD.TC

24.在探针的纯化时，无水乙醇可以沉淀（）。

A.DNA片段B.蛋白质分子

C.RNA片段D.小分子物质

25.待测DNA样品的电泳分离中，作为分子量标准的入DNA是用（）酶消化

的。

3.多项选择题:

1.导致DNA变性的常用方法有（）o

A.热变性B.碱变性C.酸变性D.化学试剂变性

2.影响核酸杂交的因素有（）o

A.核酸分子的浓度和长度B.温度

C.离子浓度D.核酸分子的复杂性

3.核酸分子处于何种情况下，核酸的双链可以完全打开成为单链（）o

A.PH<

3B.3<

PH<

5C.5<

10D.PH>

10

4.在杂交液中加入甲酰胺，其目的是（）o

A.在低温下探针更稳定

B.使杂交液为中性

C.能更好的保留非共价结合的核酸

D.减少核酸杂交的副反应

5.为减少非特异性杂交反应，在杂交前将非特异性杂交位点进行封闭，常用的封闭物有（）o

B.复性的非特异性RNA

C.变性的非特异性DNA

D.高分子化合物

E.低分子化合物

6.下列哪些步骤属于Southern印迹杂交（）。

A.待测核酸样品的制备

B.待测DNA样品的电泳分离

C.凝胶中核酸的变性

D.Southern转膜

7.Southern转膜时常用的膜是（）。

A.化学活化膜B.尼龙膜C.硝酸纤维素膜D.滤纸

8.常用的Southern转膜方法有哪几种（）。

A.硝酸纤维素膜法B.毛细管虹吸印迹法

C.电转印法D.真空转移法

9.用于Southern印迹杂交的探针可以是（）。

A.纯化的DNA片段B.纯化的RNA片段

C.多核昔酸D.寡核昔酸片段

10.原位杂交可以用来检测（）o

A.DNAB.RNAC.cDNAD.RNA和DNA

11.原位杂交所用的探针可以是（）o

A.mRNAB.DNAC.RNAD.cDNA

12.Northern印迹杂交中转膜时可采用的方法有（）。

A.毛细管虹吸印迹法B.电转印法

13.核酸原位杂交包括（）o

A.组织细胞的固定B.预杂交C.杂交D.冲洗

14.下列哪些属于核酸原位杂交的常用固定液（）o

A.10%甲醛B.4%多聚甲醛

C.乙醇：

冰醋酸（3:

1）D.戊二醛

15.RNA酶保护分析法可用于（）o

A.mRNA定量B.mRNA定性

C.mRNA末端定位D.确定内含子在相应基因中

16.核酸酶S1能降解（）o

A.DNA单链B.DNA双链

C.RNA单链D.DNA/RNA杂交双链

17.根据检测方法的不同，非核素标记物可分为以下几类（）o

A.半抗原B.配体C.荧光素D.化学发光探针

18.下列物质属于半抗原的是（）。

A.亲和素B.罗丹明C.生物素D.地高幸

19.核酸分子杂交所用探针采用体外标记法的优点是（）o

A.安全系数高

B.需要活体生物或细胞培养系统

C.探针，核酸分离和纯化及储存很方便

D.体外标记一般比体内标记的比放射活性高

20.化学法体外标记核酸探针最常用的是（）o

A.1251B.光敏生物素C.3HD.32P

21.DNA探针的酶促标记法包括（）o

A.缺口平移法B.随机引物法

C.PCR标记法D.末端标记法

22.探针的纯化包括（）。

A.乙醇沉淀法B.SephadexG-50

C.甲醇沉淀法D.丝柱离心法

23DNA变性后的理化性质的变化有（）o

A.粘度降低B.密度增加

C.紫外吸收值增加D.熔点减小

24.Southern杂交结果检测包括（）。

A.放射自显影B.比色或化学发光检测

C.酶切图谱分析D.凝胶电泳分离

25.Southern杂交在医学中的应用包括（）。

A.酶切图谱分析B.特定基因定性和定量

C.基因突变分析D.限制性片段长度多态性的分析

4.填空题：

1.核酸分子杂交中，杂交的双方分别称为与。

2.核酸分子杂交中已知的核酸序列称为。

3.适当的电泳缓冲液中，DNA在电场作用下，由负极向正极泳动，分子越大，

7永动速度O

4.当促使变性的因素解除后，两条DNA又通过碱基互补配对结合形成DNA双螺

旋结构，称为O

5.在DNA的碱基组成中，AT之间是氢键，GC之间是氢键。

6.鉴别DNA靶分子的杂交称为,鉴别RNA靶分子的杂交称为。

7.根据检测对象的不同，可将原位杂交分为和。

8.常用的液相杂交有和o

9・RNA酶保护分析法（RPA）的基本程序包扌舌：

、、、、O

10.液相杂交的核酸酶S1保护分析法可用于、、和o

11.核酸探针包括：

、、和O

12.在用核酸标记的探针，大多数标记方法需要的是Q-32P,末端标记必须使

用O

13.核酸的体外标记法分为和o

14.核酸的体外标记法中的酶法最常用的是和标记。

五、简答题

1、DNA变性的常用方法有哪几种

2、简述DNA的复性过程。

3、一个良好固相支持物应具备哪些特性

4、试比较硝酸纤维素膜、尼龙膜和化学活化膜的优缺点。

5、核酸原位杂交的理想固定液应具备哪些特点

6、一种理想标记物应具备哪些特性

7、随机引物法标记DNA探针有哪些优点

六、论述题

1、试述核酸分子杂交的原理。

2、试述影响核酸分子杂交的因素。

3、试述Southern印迹杂交的基本步骤。

4、试述Southern印迹的常用方法及原理。

5、试述核酸原位杂交的基本过程。

6、试述探针的种类及其制备。

7、试述切口平移法标记DNA探针的原理。

名词解释:

SiRNA：

利用双链小片段RNA高效、特异性降解细胞内同源mRNA,从而阻断体内靶基因表达，使细胞出现靶基因缺失的表型。

Blue/whitescreen:

蓝白斑筛选。

即B-半乳糖苗酶基因失活筛选。

其原理是：

某些质粒载体带有大肠杆菌乳糖操纵子的lacZ'

基因，该基因含一段编码B-半乳糖昔酶氨基末端145个氨基酸a—肽的DNA片断，IPTG可诱导此片断合成，此片断能与宿主细胞所编码的缺陷型B-半乳糖昔酶实现基因内a—互补，形成完整的B—半乳糖昔酶。

该酶能催化指使剂底物X-gal形成蓝色菌落。

当外源基因插入lacZ'

基因中MCS（多克隆位点），laca-肽基因阅读框架被破坏，细菌内将无B—半乳糖昔酶活性，结果重组克隆呈白色菌落。

Knockdown:

（基因）敲除。

是指对一个结构已知但功能未知的基因，从分子水平上设计实验，将基因去除，或用其它顺序相近基因取代，然后从整体观察实验动物，推测相应基因的功能。

基因敲除除可以终止某一基因的表达外，还包括引入新基因及引入定点突变，既可以是用突变基因或其它基因敲除相应的正常基因，也可以用正常基因敲除相应的突变基因。

G-protein:

G蛋白。

是三聚体GTP结合调节蛋白的简称，位于质膜内胞浆的一侧，由a,B,丫三个亚基组成，BY二聚体通过共价结合锚定于膜上起稳定a亚基的作用，而a亚基本身具有GTP酶活性。

G蛋白在信号转导过程中起着分子开关的作用，当G蛋白a亚基与GDP结合，处于关闭态；

当胞外配体与受体结合形成复合物时，导致受体胞内结构域与a亚基偶连，并促使a亚基结合的GDP被GTP交换而被活化，即处于开启状态，从而传递信号。

DNA-chip:

DNA芯片。

指通过微阵列技术将高密度DNA片断阵列通过高速机器人或原位合成方式以一定的顺序或排列方式使其附着在如玻璃片等固相表面作为探针，荧光标记的样品DNA/RNA借助碱基互补作用与探针进行杂交，从而进行大量的基因表达及检测等方面的研究。

Off-targeteffect:

脱靶效应。

指的是与一个内源性基因某一位点并不完全同源的RNA亦能通过抑制翻译而导致基因表达的静默。

SupergenefamiIy:

超基因家族。

指一个共同的