医学检验规培考试复习资料Word下载.docx
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2.检验标本采集时的质量控制
2.1
严格做好查对制度，采血试管的标签上要填写清楚患者室科、姓名、住院号、床号，与
申请单一致。
根据不同检验项目，将标本注入不同的试管内。
2.2
血液标本采集时的注意事项
静脉采血应取坐位，使用止血带的时间不得超过1min，穿刺成功立即松开止血带，血液抽出后要沿着管壁慢慢注入到抗凝管或干净试管中。
按检验项目加入特别规定的抗凝剂，如凝血酶原时间测定应加入1%草酸钠，送检标本中加入乙二胺四乙酸抗凝。
血液标本中抗凝剂比例要适当，如血沉标本按1︰4抗凝。
标本采集后放置时间不要超过2h；
采集标本时要检查医嘱用药情况，如静脉用葡萄糖、氯化钾或口服药物等。
2.3
尿液标本留取时的注意事项
护理人员应指导住院患者正确留取尿液，容器应清洁干燥，避免经血、白带、精液、粪便等混入；
标本应新鲜，以晨尿为宜，如放置时间过长，尿酮体中的乙酰乙酸易挥发，还应避光。
尿培养标本应清洁外阴，无菌操作，留取中段尿或无菌穿刺膀胱留取尿液。
2.4
大便标本采集
标本要求新鲜取有脓血或黏液部分，尽快送检，做潜血试验，应告诉患者3d内素食。
禁服含铁药物和禁食含铁蔬菜等避免鼻血、牙龈出血、经血的影响；
做细菌培养的标本应用无菌操作收集。
2.5
体液及分泌物标本留取时的质量控制
脑脊液标本采集后要立即送检，一般不能超过1h，因时间过长细胞易破坏或沉淀、糖分解、细胞溶解。
痰标本收集时间应向患者说明检验目的和收集标本方法，痰液的一般检查应收集新鲜痰留取标本前用清水漱口3次之后用力咳出。
咳痰较困难者可用雾化蒸气吸入以利痰液咳出。
幼儿可用手指轻叩胸骨柄上方以诱发咳痰。
由于工作性质的不同，临床医护人员对检验工作影响因素不甚了解，在主观上没有引起重视，这是检验质量中最薄弱的环节。
为了加强检验质量控制，笔者认为应定期与临床科室联系举办业务讲座，通过讲座使医护人员对检验技术有更深的了解。
如各项指标的误差范围、误差来源、标本的正确采集等，完善各项规章制度，强化质量管理，重视检验质控实验室外部各环节的质量管理，达到预防和控制检验误差的目的。
（2）采血及抗凝剂的选择
（3）分析前质量控制
手工法白细胞计数
原理:
血液经稀酸稀释后，成熟红细胞全部被溶解，注入汁数池后，在显微镜下计数白细胞。
五.仪器:
OLYMPUS显微镜、血球计数板
六.试剂:
冰醋酸2ml，蒸馏水98ml，10g／L亚甲蓝溶液3滴，混匀过滤后备用。
七.样本要求：
静脉采血使用EDTA-K2抗凝。
毛细血管采血应擦去第一滴血，以免混入组织液影响结果。
标本采集完成放置5-10分钟后测定。
八.操作步骤：
1．小试管1支，加白细胞稀释液0．38ml。
2．用微量吸管准确吸取末梢血20µ
l，擦去管尖外部余血，将吸管插入小试管中稀释液的底部，轻轻将血放出，并吸取上层清液，清洗吸管二次，混匀。
3．充池，静置2～3min，待白细胞下沉。
4．用低倍镜计数四角4个大方格内的白细胞数。
5.计算
白细胞数/L=4个大方格内白细胞总数*10*20*106/4即4个大方格内白细胞总数*50*106=白细胞数/L
手工法红细胞计数
原理：
用等渗稀释液将血液按一定倍数稀释，充人计数池后显微镜下计数一定体积内红细胞
数，换算求出每升血液中红细胞的数量。
试剂与耗材
1.红细胞稀释液
枸橼酸钠
1.0
g;
36%甲醛液
ml
氯化钠0.6
g
加蒸馏水至100
；
混匀、过滤两次后备用。
2.
其他
显微镜、改良Neubauer血细胞计数板等。
操作
1.取中号试管1支，加红细胞稀释液2.0ml。
用清洁干燥微量吸管取末梢血10μl
，擦去管外余血后加至红细胞稀释液底部，再轻吸上层清洗吸管2-3次立即混匀。
3.
混匀后，用干净微量吸管将红细胞悬液充人计数池，不得有空泡或外溢，充池后静置2-3
min后计数。
4.
高倍镜下依次计数中央大方格内四角和正中共5
个中方格内的红细胞。
对压线细胞按"
数上不数下、数左不数右"
的原则进行计数。
四、计算
红细胞数/L=5个中方格内红细胞数×
5×
10×
200×
106
=5个中方格内红细胞数×
1010=5个中方格内红细胞数÷
100×
1012
式中：
×
5
5个中方格换算成1个大方格；
10
1个大方格容为0.1μl，换算成1.0μl；
200
血液的实际稀释倍数应为201倍，按200是便于计算；
×
由1μl换算成1L。
手工法血小板计数
试剂：
草酸铵法稀释液：
分别溶解草酸铵1．0g及EDTA·
Na20．012g，合并后加蒸馏水至100ml，混匀。
样本要求：
操作步骤：
1.于清洁试管中加入稀释液0．38ml。
2.准确吸取毛细血管血20μl，擦去管尖外附着血液，置于血小板稀释液内，立即充分混匀。
待完全溶血后再次混匀lmin。
3.取上述均匀的血小板悬液1滴，注入计数池内，静置10～15min，使血小板下沉。
4.用高倍镜计数中央5个中方格内血小板。
5.计算
血小板数/L=5个中方格内血小板数×
201×
10*6/L
5：
5个中方格换算成1个大方格；
10：
1个大方格容积为0.1μl;
201：
血液的稀释倍数;
10*6：
由μl换算成L
全自动计数
1.标本的采集
按采血部位的不同，取得血常规检验标本，最常用的途径是静脉采血和末梢毛细血管采血。
各类文献均表明，静脉血血样是最可靠的标本，手指血是末梢毛细血管血样中与静脉血差异最小且较为稳定的血样。
有研究表明，与静脉血相比，手指血的准确性和可重复性仍然较差：
白细胞计数明显高（+8%）而血小板计数明显低（-9%）。
因此，绝大多数专家建议：
血常规检验特别是应用血液分析仪时，应使用静脉血。
2.标本的抗凝
用于血常规检验的血样必须经抗凝剂抗凝处理，在目前的众多抗凝剂中，EDTA盐（EDTA-Na2，EDTA-K2，EDTA-K3）是对白细胞形态和血小板影响相对较小的抗凝剂，最适合用于血常规检验。
除采血因素的影响（生理性因素、采血部位等）外，多数情况下，血样的质量取决于血液和抗凝剂的比例。
血液比例过高时，由于抗凝剂相对不足，血浆中出现微凝血块的可能性增加，在用于血细胞分析仪时，微凝血块可能阻塞仪器，同时影响一些检验指标。
血液比例过低，抗凝剂相对过剩，对检验指标会造成严重影响。
血液经EDTA抗凝后，白细胞的形态会发生改变，这种改变和时间及EDTA浓度有关。
EDTA的最佳浓度（与血液比）为1.5mg/ml，如果血样少，EDTA的浓度达到2.5mg/ml，中性粒细胞肿胀、分叶消失，血小板肿胀、崩解、产生正常血小板大小的碎片，这些改变都会使血常规检验和血细胞计数得出错误结果。
这一点在用自动血细胞分析仪时尤为重要。
静脉血和末梢血均可经抗凝剂抗凝成全血标本（标本中不含稀释液，或对标本造成的稀释的影响极小），显而易见，末梢血抗凝标本要达到合适的血液和抗凝剂的比例是非常困难的。
因此，多数专家建议，在制备全血比例是非常困难的。
因此，多数专家建议血管采集静脉血。
无论镜检，或是使用血液细胞分析仪，由于绝大多数的对标本稀释的稀释液中含有抗凝剂，在一定量的稀释液中可直接加入微量静脉血或末梢血液（10-40μl）即可制备成通常所说的预稀释标本。
多数情况下，预稀释标本的制备适用于末梢血的血样。
二、标本的稀释
血液是由血细胞和血浆两部分组成的红色粘稠混悬液。
在进行血细胞检验计数时，直接用血液计数是困难的，无论是镜检还是用血细胞分析仪，血液均需合适准确的稀释后才能进行血细胞的检验计数。
基于血细胞分析仪的基本原理，在血细胞分析仪的设计应用中，稀释倍数和计数容量是最重要的设计指标之一。
稀释倍数过低，会形成细胞排队通过传感器的重合缺损；
稀释倍数过大，则会造成一定测量容量内血细胞的数量过少，这都会严重影响血液细胞检验的测量精度。
三、标本的储存
抗凝剂因时间和浓度的不同，会造成对血细胞形态的影响。
有研究表明，用EDTA抗凝静脉血标本，在标本收集后的5分钟内或30分钟后，8小时内（室温）检测，可以得到最佳的检测结果。
如果不需要血小板和白细胞分类的准确数据，则标本可以在2℃-8℃的条件下存入至24小时。
预稀释标本一般需要在标本制备后10分钟内予以测量；
如果稀释液中添加细胞稳定剂，预稀释标本的存放时间也不可超过4小时。
总之，影响血常规检验结果的因素很多，要想取得准确的检验数据，就要在实验的每一个步骤中都严格按照操作规程进行。
本文所讲述的内容，仅仅是对血常规检验中注意事项的部分总结，可能存在的不足和缺陷，还是请常年处于临检一线工作中的老师们批评、指正。
四、血液细胞分析仪计数法：
计数细胞数量多、速度快、易于标准化、计数精确性较高，适合大规模人群健康筛查，但需特殊仪器。
某些人为因素（如抗凝不充分）、病理情况（如出现有核红细胞、巨大血小板、血小板凝集等）可干扰白细胞计数。
使用前须按NCCLS规定方法对仪器进行校准，且须认真坚持日常质控工作。
电阻型血液分析仪
血液按一定比例稀释后经负压吸引通过仪器的一个微孔小管，由于血细胞与稀释液相比是相对不良导体，当每个血细跑通过微孔时均挤代等体积的稀释液在电路上形成一短暂的电阻而导致电压的变化，产生相应的脉冲信号并经放大、甄别后被累加记录。
脉冲数被转换为细胞数量；
脉冲的高低与细胞体积大小成正比，经计算机处理得出各种血细胞的数量、血细胞体积大小的平均数、变异系数、占全血体积的百分比和体积大小分布直方图等。
一般仪器分为红细胞/血小板和白细胞/血红蛋白两个通道，白细胞/血红蛋白通道需加入溶血剂使红细胞破坏后测定血红蛋白、白细胞数量和粗略分类（按溶血后白细胞体积大小分出两类或三类白细胞）。
由于电阻型血液细胞分析仪操作简便、快速、分析参数较多、价格便宜，目前已在国内普遍使用。
激光型血液分析仪
血液按一定比例稀释后形成一个极细的液流穿过激光束，每个血细胞被激光照射后产生光散射并被光电倍增管接收。
细胞的前向角散射与细胞的体积大小有关、侧向角（或高角）散射与细胞的内部结构、颗粒性质等有关，细胞数量则与细胞通过激光束时光散射的脉冲次数相同。
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