western转膜条件Word格式.docx
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0.45PVDF
湿转恒压100V
60~70min
设备名字是“Bio-Radmini”。
乳鼠心肌细胞和成年鼠心肌组织总蛋白和核蛋白
保密
55KD
PVDF（预先用甲醇处理）
半干转恒压12V
30-40min
设备：
“Bio-Radmini”
建议：
最开始做过湿转（过夜的那种），太费事费时，效果也不如半干转。
293T细胞
95KD&
35KD
PVDF
湿转恒压90V-110V，控制电流不要超过300mA。
70min
肿瘤手术标本
转录因子
33KDa
PVDF膜
350mA恒流
150min
转膜设备：
湿转Bio-Rad
说明：
相同条件曾用于数个30-70KDa的蛋白，都能成功转上，不过没有试缩短时间效果如何；
实验时没为转膜条件苦恼，倒是电泳时胶的浓度及时间根据不同分子量而有区别。
成纤维细胞
smad3
54KDa
湿转Bio-Rad
胰腺癌细胞
16KDaand42KDa
120V恒压
90min
大鼠血管平滑肌细胞
72KD，42KD和22KD
一般的PVDF膜
湿转，恒流一张膜0.26A，两张膜0.3A。
转膜缓冲液最多用3次，最好现用现配，我们用的没有加SDS，转的时候最好能用冰块一类的东西降一下温，这样转的效果要好一些，转的时候一定要把三明治每层之间的气泡除去，同时使滤纸大于膜，膜大于胶，以免烧坏电极。
大鼠PBMC
55KD
0.22的PVDF膜
转膜方式（恒流）：
湿转
60-90min
转膜液用过两三次之后转膜效果就很差了其它按照常规就好了
其实0.22的膜一般不怕转过头以我们的经验，转膜时间、电压其实
也有很大范围的调整，并不是非要固定于哪一个最合适，曾经做过
一张膜转，17KD的和170KD的，按照170KD的条件，17KD的转膜也很好的。
人非小细胞肺癌细胞系
大于250kD
milliporePVDF膜0.45um
湿转，恒流0.3A。
180min
“Bio-Rad”
电转保持电压在70V以上，保持低温，如果电压低过70就需要换缓冲液了。
白血病细胞
28KD
0.45的NC膜
湿转，90min，0.25A
海绵厚度要合适，一次转磨用的海绵太薄，导致三明治没夹紧，转膜后拿出来一看，marker都变得七扭八歪。
但是有前辈说垫的海绵太厚可能将胶压断，没经历过，不知道是不是会有这种情况。
肿瘤细胞
磷酸化蛋白
10-200KDa
120v恒压
120min
转膜缓冲液只用2次，基本都转上，5%BSA封闭，减少背景。
胰腺β细胞
******
90-130KDa
250mA恒流
原核表达
38KD
湿转恒压：
100V
心脏
220kDa，130kDa，70kDa，41kDa
恒压
70v120min，180min，5-6h
伯乐湿转
建议改进方向（可选）：
40kDa一下，70v，60-90min足够，40-70kDa90-120min即可。
70-120kDa，70v，120-180min足够，120-180kDa，180-240min，180kDa以上建议6h。
卵巢癌细胞膜蛋白
53KD
PVDF膜0.45um
80V100min
人宫颈癌HELA细胞总蛋白
β-actin
42
504h
脑组织
16KD、27KD、32KD、42KD
PVDF0.22um
半干转恒流1mA/cm2或2mA/cm2
不定
北京六一仪器
我共做了六个蛋白，所以总在想节约时间的方式。
在预试时我会观察电压数与转膜效率的关系，所以我不会按时间来定何时转完，而是按电压来定。
通过染胶来确定电压数与转移蛋白分子量上限的关系。
这样有的5分钟就转完了，不用多浪费时间。
并且六一的半干转膜仪随着使用次数的增多，效率也会下降，所以时间和转膜效率（尤其是使用后期）的关系并不稳定，单纯依靠时间有时会有问题。
CHOcell
酶原
40KD
0.22的PVDF膜（Biorad）
转膜方式（恒压）：
100V，湿转，转膜时间：
60min。
Tanon（上海天能）
1.
转膜液现用现配，用完倒掉。
2.
转膜时间，电压可以适当调整。
分子量大或者小一些的蛋白，采用此条件一样转膜效率很高。
Hepg2
EGFR
170kd
pvdf0.45
24V
2个半小时
伯乐半干转
肝癌细胞
蛋白名称：
HIF-1α
120kD
NC膜
80伏，湿转
150分钟
建议：
湿转，转膜液特别重要，否则会导致电压或者电流不稳影响转膜条带。
转膜均现配先用，不重复利用。
转膜时间一般是150分钟，80伏恒压。
经李春红染色，靠近蛋白胶的一侧膜上蛋白染色深，膜另外一面染色浅，说明蛋白未转过。
该湿转条件自己做过的蛋白分子量范围：
170-36kD。
心肌细胞总和膜
128KD，100，60，55，43KD
NC膜0.2um
70V200min
转膜液最好现配现现用，或配成母液，最好不重复使用，70V电压下，电流约154mA。
甲醇可以加到150ml。
对大分子量如200KD转膜时间延长6-8h。
肺脏
ICAM-1
85~110KD
0.22NC
湿转恒流300mA
设备名字Bio-Radmini
一抗用的santacruz1mL包装的。
比例调整到1：
800做出很好的条带。
效价会一直降低的。
去年做的这个指标，今年夏天做就不行了。
16KDa
0.2umPVDF膜
0.2A恒流
65min
28KDa
0.2umPVDF膜
0.25A恒流
60min
人肿瘤细胞
80KD
0.45umPVDF膜
半干转移系统恒流，勿超过0.85mA/cm2，同时转多张膜电流需累加（串联）
Bio-Rad
其实有些东西并不是非常严格的，要转移的目的蛋白分子量小，那么转移的时间就短一些，反之，则长一点；
蛋白量充足，可以多转一会，蛋白量较少，则要少转一下，免得蛋白穿膜而过到了滤纸上而前功尽弃。
人和鼠肝癌细胞总蛋白、胞浆、胞核蛋白
***
17--116kd
恒流200mA
3h
湿转北京六一24Dmini
COCOS7293T
80725652482518KD
湿转90V电流约为230--280mA之间。
两张膜串联叠加。
40min
Bio-Rad法码西亚
蛋白名称（可保密）
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