最低抑菌浓度MIC测定文档格式.docx

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63.4%

40.38

25600

头孢曲松

81.5%

2.45

2000

环丙沙星

84.4

3.8

⏹分装与保存:

每管200μl,-70℃可保存一年。

(2)抗菌药物工作液制备

青霉素:

管号

原液

11

10

9

8

7

6

5

4

3

2

浓度(μg/ml)

1600

800

400

200

100

50

25

12.5

6.25

3.12

1.56

0.78

取量(μl)

200→

溶剂(μl)

 

四环素:

大观霉素:

12800

6400

头孢曲松:

浓度

(μg/ml)

0.4

0.2

40

360

环丙沙星:

13

12

浓度(ug/ml)

(3)抗菌药物梯度培养皿的制备

⏹培养皿编号:

按各抗菌药物浓度编号。

⏹将配制好的各抗菌药物工作液150μl加到各培养皿中,与15ml50℃预温的培养基充分混匀,平放在超净台,半开培养皿盖至培养基凝固后,用塑料袋密封保存于4℃冰箱。

(4)菌悬液接种与培养

⏹多头接种针以及菌液板用高压法灭菌处理,其他配件用酒精消毒处理;

使用前必须确认完全烘干。

⏹按照仪器要求将菌悬液接种于各抗菌药物梯度培养皿,接种菌后置超净台直至菌悬液渗入。

⏹置35℃~36℃、5%~10%CO2一定湿度的环境中培养。

⏹记录放置时间。

⏹培养18~24小时观察结果。

(5)结果判读

⏹观察细菌生长情况:

-记录结果读取时间。

-在适宜的光线下,观察对照培养皿的菌落生长情况,并对所有菌株进行初步鉴定(涂片染色和氧化酶试验)。

-比较观察对照平皿和抗菌药物平皿,进行判读:

接种点有1个以上菌落或呈菌苔状为生长;

接种点无任何菌落或呈薄雾印迹为无生长。

⏹MIC判读与记录:

-MIC是指抗菌药物能够抑制细菌生长的最小抑菌药物浓度,表示单位为μg/ml。

-记录各抗菌药物浓度平皿上细菌生长情况,在《WHO参考菌株及MIC实验结果记录表》用(+)表示生长,(-)表示无生长。

-每批实验结果必须由另外一名技术人员复读、签字,以确保结果的准确性。

⏹参考菌株的判读:

-本次测定的参考菌株MIC值在标准MIC值围或在标准MIC值±

1个浓度围表明本次试验有效。

-本次测定的参考菌株MIC值超出上述围则表明本次试验无效,需重新配制抗菌药物平皿和测定。

3.β-酰胺酶测定

(1)纸片酸度定量法

⏹将一小片滤纸置于空平皿中:

⏹让滤纸吸足青霉素液(pH值8.0的0.05mol/L磷酸盐缓冲液100ml+0.2g溴甲酚紫+5g无缓冲剂的结晶青霉素):

⏹用接种环将10~20个菌落涂到滤纸上,涂膜直径约为5mm,35℃孵育30分钟:

⏹观察结果:

产生β-酰胺酶的淋球菌使滤纸颜色由紫变黄。

(2)产色头孢菌素法

将头孢硝噻吩纸片置于空平皿中,用接种环将菌落涂到纸片上,3分钟观察有无颜色变化,变红者为β-酰胺酶阳性。

附件3.5

WHO参考菌株及淋球菌临床分离株MIC实验结果记录表

记录时间:

实验人员:

核读人员:

①青霉素(P),②四环素(T)及β-酰胺酶:

平皿号

P1

P2

P3

P4

P5

P6

P7

P8

P9

P10

P11

T1

β-酰胺酶

0.0078

0.0156

0.0312

0.0625

0.125

0.25

0.5

A

B

C

D

E

合计

③大观霉素(S):

S1

S2

S3

S4

S5

S6

S7

16

32

64

128

④头孢曲松(CE):

CE1

CE2

CE3

CE4

CE5

CE6

CE7

CE8

CE9

CE10

0.002

0.004

0.50

⑤环丙沙星(CI):

CI1

CI2

CI3

CI4

CI5

CI6

CI7

CI8

CI9

CI10

CI11

CI12

CI13

附件3.6

淋球菌临床分离株对各监测药物MIC结果统计表

①青霉素:

总数

菌株数

②四环素/β-酰胺酶:

③大观霉素:

④头孢曲松:

浓度(μg/ml

⑤环丙沙星:

附件3.7

抗菌药物敏感性的判断标准

敏感(S)

中敏(IS)

耐药(R)

≤0.5

≥1

≥16(TRNG)

≤64

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