最低抑菌浓度MIC测定文档格式.docx
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63.4%
40.38
25600
头孢曲松
81.5%
2.45
2000
环丙沙星
84.4
3.8
⏹分装与保存:
每管200μl,-70℃可保存一年。
(2)抗菌药物工作液制备
青霉素:
管号
原液
11
10
9
8
7
6
5
4
3
2
浓度(μg/ml)
1600
800
400
200
100
50
25
12.5
6.25
3.12
1.56
0.78
取量(μl)
→
200→
溶剂(μl)
四环素:
大观霉素:
12800
6400
头孢曲松:
浓度
(μg/ml)
0.4
0.2
40
360
环丙沙星:
13
12
浓度(ug/ml)
(3)抗菌药物梯度培养皿的制备
⏹培养皿编号:
按各抗菌药物浓度编号。
⏹将配制好的各抗菌药物工作液150μl加到各培养皿中,与15ml50℃预温的培养基充分混匀,平放在超净台,半开培养皿盖至培养基凝固后,用塑料袋密封保存于4℃冰箱。
(4)菌悬液接种与培养
⏹多头接种针以及菌液板用高压法灭菌处理,其他配件用酒精消毒处理;
使用前必须确认完全烘干。
⏹按照仪器要求将菌悬液接种于各抗菌药物梯度培养皿,接种菌后置超净台直至菌悬液渗入。
⏹置35℃~36℃、5%~10%CO2一定湿度的环境中培养。
⏹记录放置时间。
⏹培养18~24小时观察结果。
(5)结果判读
⏹观察细菌生长情况:
-记录结果读取时间。
-在适宜的光线下,观察对照培养皿的菌落生长情况,并对所有菌株进行初步鉴定(涂片染色和氧化酶试验)。
-比较观察对照平皿和抗菌药物平皿,进行判读:
接种点有1个以上菌落或呈菌苔状为生长;
接种点无任何菌落或呈薄雾印迹为无生长。
⏹MIC判读与记录:
-MIC是指抗菌药物能够抑制细菌生长的最小抑菌药物浓度,表示单位为μg/ml。
-记录各抗菌药物浓度平皿上细菌生长情况,在《WHO参考菌株及MIC实验结果记录表》用(+)表示生长,(-)表示无生长。
-每批实验结果必须由另外一名技术人员复读、签字,以确保结果的准确性。
⏹参考菌株的判读:
-本次测定的参考菌株MIC值在标准MIC值围或在标准MIC值±
1个浓度围表明本次试验有效。
-本次测定的参考菌株MIC值超出上述围则表明本次试验无效,需重新配制抗菌药物平皿和测定。
3.β-酰胺酶测定
(1)纸片酸度定量法
⏹将一小片滤纸置于空平皿中:
⏹让滤纸吸足青霉素液(pH值8.0的0.05mol/L磷酸盐缓冲液100ml+0.2g溴甲酚紫+5g无缓冲剂的结晶青霉素):
⏹用接种环将10~20个菌落涂到滤纸上,涂膜直径约为5mm,35℃孵育30分钟:
⏹观察结果:
产生β-酰胺酶的淋球菌使滤纸颜色由紫变黄。
(2)产色头孢菌素法
将头孢硝噻吩纸片置于空平皿中,用接种环将菌落涂到纸片上,3分钟观察有无颜色变化,变红者为β-酰胺酶阳性。
附件3.5
WHO参考菌株及淋球菌临床分离株MIC实验结果记录表
记录时间:
实验人员:
核读人员:
①青霉素(P),②四环素(T)及β-酰胺酶:
平皿号
P1
P2
P3
P4
P5
P6
P7
P8
P9
P10
P11
T1
β-酰胺酶
0.0078
0.0156
0.0312
0.0625
0.125
0.25
0.5
A
B
C
D
E
1
2
合计
③大观霉素(S):
S1
S2
S3
S4
S5
S6
S7
16
32
64
128
④头孢曲松(CE):
CE1
CE2
CE3
CE4
CE5
CE6
CE7
CE8
CE9
CE10
0.002
0.004
0.50
⑤环丙沙星(CI):
CI1
CI2
CI3
CI4
CI5
CI6
CI7
CI8
CI9
CI10
CI11
CI12
CI13
附件3.6
淋球菌临床分离株对各监测药物MIC结果统计表
①青霉素:
总数
菌株数
②四环素/β-酰胺酶:
③大观霉素:
④头孢曲松:
浓度(μg/ml
⑤环丙沙星:
附件3.7
抗菌药物敏感性的判断标准
敏感(S)
中敏(IS)
耐药(R)
≤0.5
≥1
≥16(TRNG)
≤64