药敏试验程序及步骤Word文件下载.docx
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D采集适量标本，量不应过少，注意采集不同时间不同部位标本，要全面有特征
E安全采集
2）标本处理
2h送到检验处，部分菌应保温于一定环境中保存注意安全尤其对烈性传染病。
有时可
以直接用抽取标本的注射器
如尸检组织、支气管洗液、心包液、痰、尿等标本要保存于4?
环境中，脑脊液保存于
25?
3）各部位标本的采集及注意事项
A血液
皮肤消毒采血部位采血量采血次数采血时间不同动物有所不同血液应马上送检室
温保存不可冷藏。
配置的培养基血液和肉汤比为1:
5,1:
10
血液中常见的病原体引起的疾病有葡萄球菌菌血症，肠球菌菌血症、革兰隐性杆菌、厌
氧菌菌血症真菌血症。
B脑脊液
采集脑脊液一般用腰椎穿刺术获得。
采集后立即送检，一般不要超过1h，避免凝固和混
入血液一般取3,5ml35度保温送检不可至于冰箱保存做病毒检查时应放置冰块
4度保存72h
application;
infectionandantibacterialdrugofclinicalapplication;
transfusionreferstolevy;
nutritionsupportofadaptedcardandclinicalapplication;
commonlifesupporttechnology（ascyclebreathingsupport,andnutritionsupport,）andemergencytechnologyofapplication;
commonguardianshipinstrumentusing.Look:
shock,cardiacrespiratoryarrestandacuteorganfailure,systemicinflammatoryresponsesyndromeandsevereinfectionandmultipleorgandysfunctionsyndrome（MODS）,severedisturbanceofbodyfluidenvironmentsuchascriticaltheoryandprogressoftheillness.2.basicrequirements
（1）speciesandcasesofstudyrequirements:
severepneumoniaindisease-diseasemyocardialinfarction...3.highrequirements
（1）learningdiseasespecies:
diseasespeciesdiseasespeciesimageradiation:
rheumaticheartcongenitalheartintestinalCrohn'
s（Crohn）diseaseintestinaltuberculosisbileductcancerchronicpancreaticinflammatoryurinarysystemstoneurinarysystemtumoradrenaldiseasethyroiddiseasecranialwithininfectionnervoussystemtumornuclearmedical:
Digestroadbleedingexplicitlikebrainbloodflowperfusionexplicitliketesticularbloodpoolexplicitlikesalivaryglandsexplicitlike
（2）clinicalknowledge,andskillsrequirements:
understandvariousimagecheck
常见细菌性脑膜炎如流行性脑脊髓膜炎肺炎球菌脑膜炎，链球菌脑膜炎等真菌性脑膜炎常见隐球菌脑膜炎假丝酵母菌脑膜炎等特别是免疫功能低下和恶性疾病患者易并发。
如AIDS恶性肿瘤严重糖尿病等
流行性乙型脑炎是一种人兽共患病肠道病毒可见多种病毒引起脑膜炎和肺炎c脓液标本的采集
首先用无菌生理盐水清洗脓液及病灶的杂菌，在采集标本，用针和注射器抽吸采取，再移入无菌容器立即送检也可用拭子在伤口深部采集渗出物，对于皮肤或下表皮的散播性感染，应采集病灶出边缘而非中央处的感染组织送检。
脓肿标本以无菌注射器抽取为好，也可用排液法取得，先用70的酒精擦拭病灶部位，袋干燥后用以无菌刀切开排脓，以无菌拭子采取，不能及时送检可放冰箱冷藏，厌氧菌培养的标本只能放于室温下。
厌氧菌感染的脓液常有腐臭味，采集和运送要注意不要接触空气，可直接针筒送检或置于厌氧运送培养基送检。
外伤性创伤感染以葡萄球菌和链球菌多见，放线菌，结核分枝杆菌，大肠埃希菌，铜绿假单胞杆菌也常见。
深部感染极易引起破伤风和气性坏死感染。
烧伤创面最常见革兰阴性杆菌感染和革兰阳性球菌感染
急性化脓性骨关节炎常由金黄色葡萄球菌感染溶血性链球菌肺炎链球菌感染所致慢性化脓性骨关节炎慢性骨髓炎常由结合分支杆菌感染所致。
放线菌感染可发生在免疫功能下降时或由于拔牙口腔粘膜损伤一起的感染。
d痰液标本的采集
自然咳痰法和支气管镜采集法对呼吸道感染诊断有重要意义，细菌性肺炎为下呼吸道感染最常见的类型。
支原体肺炎常以不典型肺炎表现。
真菌性肺炎和病毒性肺炎也常见。
E粪便标本的采集
用药前自然排便采集脓血粘液部分2,3g，粪便表面采样，液体便取絮状物1,2ml置于无菌容器内送检。
细菌性痢疾细菌真菌病毒引起的胃肠炎细菌性食物中毒致病性大肠埃希菌的肠道感染幽门螺杆菌感染导致消化性溃疡，主要部位是十二指肠球部。
F尿液标本采集
采集清洁中段尿最好早晨取样，先清洗尿道口。
必要时导尿或膀胱穿刺留尿样本采集容器要求清洁无菌、密封、加盖、防渗透、广口、容积大于50ml。
主要主要经尿道口上行感染，极少数血道感染，可反映肾脏，膀胱，尿道，前列腺等处的炎症变化。
药敏试验
用药敏实验进行药物敏感度的测定，以便准确有效的利用药物进行治疗。
但由于药敏试验要求比较严格，条件比较高。
目前，临床微生物实验室进行药敏试验的方法主要有纸片扩散法，稀释法（包括琼脂和肉汤稀释法），抗生素浓度梯度法（E-test法），和自动化仪器等。
一、纸片扩散法
该法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加，抗菌药物的浓度呈对数减少，从而在纸片的周围形成浓度梯度。
同时，纸片周围抑菌浓度范围内的菌株不能生长，而抑菌范围外的菌株则可以生长，从而在纸片的周围形成透明的抑菌圈，不同的抑菌药物的抑菌圈直径因受药物在琼脂中扩散速度的影响而可能不同，抑菌圈的大小可以反映测试菌对药物的敏感程度，并与该药物对测试菌的MIC呈负相关。
二、稀释法
稀释法药敏试验可用于定量测试抗菌药物对某一细菌的体外活性，分为琼脂稀释法和肉汤稀释法。
实验时，抗菌药物的浓度通常经过倍比稀释，能抑制待测菌肉眼可见生长的最低药物浓度成为最小抑菌浓度（MIC），一个特定抗菌药物的测试浓度范围应该包含能够检测细菌的解释性折点（敏感、中介和耐药）的浓度，同时也应该包含质控参考菌株的MIC.
2.1琼脂稀释法首先制备含抗菌药物的琼脂稀释平板。
再接种待测菌株，然后是结果判读。
2.2肉汤稀释法
三、抗生素浓度梯度法
四、自动化仪器法
实验步骤
一、实验材料
普通营养琼脂培养基:
可去生化试剂店购买，做不同细菌的药敏试验可选择不同的培养基，如做大肠杆菌的药敏试验可选择普通营养琼脂或麦糠凯培养基。
做沙门氏菌可选择血清培养基。
药敏试纸:
购买或自制（详见实验准备）
细菌:
待做药敏试验的细菌
仪器:
接种环、酒精灯、打孔器、牛津杯、移液器、滴头
三、实验操作方法
3.1药敏片法
infect
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