新脂肪细胞因子视黄醇结合蛋白4与肥胖及脂代谢的关系及机制研究重点Word格式.docx

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APNadiponectin脂联素

BMIbody

massindex体重指数FPG

fastingplasmaglucose空腹血糖FFA

freefattyacid游离脂肪酸FINS

fastinginsulin空腹胰岛素GLUT4

glucosetransporter4葡萄糖转运子4γGT

γ-glutamyltransferaseγ谷氨酰转肽酶HDL-Chigh

densitylipoproteincholesterol高密度脂蛋白胆固醇HbA1cGlycatedHemoglobinA1c

糖化血红蛋白NC

normalcontrol正常对照NGT

normalglucosetolerance正常糖耐量NW

normalweight正常体重LDL-Clow

densitylipoproteincholesterol低密度脂蛋白胆固醇PPARperoxisome

proliferatorsactivatedreceptor过氧化物酶体增殖子激活受体RBP4retinol

bindingprotein4视黄醇结合蛋白4RT-PCR

reversetranscriptionPCR反转录PCRSDrat

Sprague-DawleyratSD大鼠TC

totlecholesterol总胆固醇T2DMtype

2diabetesmellitus2型糖尿病TG

triglyceride甘油三脂

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学位论文原创性声明

本人郑重声明：

所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。

除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。

对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。

本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。

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新脂肪细胞因子视黄醇结合蛋白4与肥胖及脂代谢的关系及机制研究

摘要

第一部分肥胖及2型糖尿病患者血清视黄醇结合蛋白4水平

的临床研究

目的：

Yang等利用基因芯片比较了脂肪组织特异性过表达葡萄糖转运子4（GluT4-Tg）和脂肪特异性剔除GluT4（GluT4（-/-））小鼠附睾脂肪组织的基因表达谱，鉴定出一种新的参与胰岛素抵抗发生的脂肪细胞因子―视黄醇结合蛋白4（RBP4。

然而，RBP4是主要由肝脏合成和分泌，但血清RBP4与肝脏的关系仍具争议。

RBP4在人群中的研究资料尚少，它在人体内的病理生理意义仍需进一步的研究。

本研究主要通过临床研究探讨：

1.血清RBP4在肥胖和2型糖尿病患者中的变化。

2.血清RBP4与体脂、糖、脂代谢及肝功能的关系。

3.血清RBP4与游离脂肪酸以及脂肪细胞因子，如脂联素之间的关系。

对象与方法：

我们入选131例上海地区中国人，年龄20～69岁，分组：

正常对照组（NC）（n=31）和正常糖耐量超重/肥胖者（OW/OB-NGT）（n=31）、2型糖尿病正常体重组（NW-T2DM）（n=33）和2型糖尿病伴超重/肥胖组（OW/OB-T2DM）（n=36）。

采用HOMA-IR评价各组胰岛素抵抗程度，测定受试者的体重指数（BMI）、腰臀比（WHR），体脂含量（Fat%）；

检测空腹状态下血糖（FPG）、糖化血红蛋白（HbA1c）、谷丙转氨酶（ALT）、γ谷氨酰转肽酶（γGT）、胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、游离脂肪酸（FFA）、胰岛素（FINS）、脂联素（ADP）和RBP4。

结果：

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1.校正年龄后，男性的血清RBP4显著高于女性[（30.00±

0.78vs.27.27±

0.80

μg/ml，P＜0.05]。

校正年龄、性别后，OW/OB-NGT及OW/OB-T2DM组的血清RBP4水平显著高于NW-NGT组[（29.85±

6.60，30.86±

6.11μg/mlvs.25.47±

6.84μg/ml，均P＜0.05]。

2.NW-T2DM与NW-NGT组间的血清RBP4差异无显著性（25.47±

6.84vs28.35±

5.42μg/ml，但显著低于OW/OB-T2DM[（30.86±

6.11vs.28.35±

5.42μg/ml，P＜0.05]。

3.单因素回归分析见到，血清RBP4与BMI、Fat%、W、WHR、TG及HOMA-IR呈显著

正相关，未见到RBP4与ALT和γGT有显著相关。

多元逐步回归分析见到，WHR，TG和年龄是血清RBP4的独立相关因素。

4.将131名研究对象再次分组：

正常甘油三酯伴正常腰臀比组（NTG-NCO）[TG＜

1.7mmol/L，WHR≤0.90（男性），WHR≤0.85（女性）]（n=39），正常甘油三酯伴中心性肥胖组（NTG-NCO）（n=43），高甘油三酯伴正常腰臀比组（HTG-NCO）（n=11）和高甘油三酯伴中心性肥胖组（HTG-CO）（n=38）。

校正年龄、性别后，HTG-NCO和HTG-CO两组的血清RBP4水平均显著高于NTG-NCO和NTG-CO组

[（28.89±

0.87vs.26.20±

0.97μg/ml；

（31.59±

0.97vs.27.39±

1.58μg/ml，均P＜0.01]；

HTG-CO的RBP4水平显著高于HTG-NCO组[（31.59±

0.97vs.28.89±

0.87μg/ml，P＜0.01]，但在NTG-CO与NTG-NCO两组间的血清RBP4水平差异无显著性[（27.39±

1.58vs.26.20±

0.97μg/ml，P>

0.05]。

小结：

1.肥胖者的血清RBP4显著升高。

2.血清RBP4与WHR，TG，年龄呈正相关。

3.RBP4与血糖、血压、血脂以及中心型肥胖等与胰岛素抵抗有关指标有着不同

程度的相关，表明RBP4是提示代谢综合征的一项血清学标志物。

4.肥胖者和糖尿病患者的ALT和γGT较高，其肝脏可能存在不同程度脂质沉积，

但我们未发现这组人群的血清RBP4变化与ALT和γGT有显著相关。

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第二部分视黄醇结合蛋白4在大鼠各组织中的表达

RBP4在肝脏、肾、脂肪和骨骼肌等多种组织均有合成。

本研究通过动物试

验，阐明生理状态下RBP4在机体各组织的表达水平，为研究生理及病理状态下RBP4表达水平变化提供依据。

材料与方法：

应用RT-PCR和免疫组化的方法，对5只健康雄性SD大鼠的主要器官（肝脏、脂肪、骨骼肌、肾脏和心肌组织）RBP4的表达进行了测定及比较。

1.根据PCR产物测序结果，与Pudmed上公布的各基因mRNA标准序列进行比较

分析，证实PCR产物确为我们所需要的目标产物。

2.RBP4在各组织表达强度分别为：

肝脏（3.52±

0.39），肾脏（3.63±

0.63），

脂肪（0.64±

0.11），肌肉（0.38±

0.06）和心脏（0.24±

0.10）。

3.RBP4弥漫分布于肝细胞以及胆管内；

充满肾小管管腔及其上皮组织；

散在脂

肪细胞周边以及骨骼肌和心肌细胞内。

4.健康雄性SD大鼠脂肪组织中RBP4与GluT4mRNA的表达水平呈负相关（相关

系数r=-0.667，P=0.219），但未达统计学意义。

1.RBP4在肝脏、脂肪、骨骼肌、肾脏和心肌组织均有表达，以肝脏和肾脏表达

最强，脂肪其次，肌肉和心脏最少。

2.RBP4弥漫分布于肝细胞以及胆管内；

3.在健康雄性SD大鼠脂肪组织中，未见到RBP4与GluT4的相关。

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第三部分非诺贝特对高脂、高糖喂养大鼠血清、肝脏及脂肪组织

视黄醇结合蛋白4表达的影响

RBP4新功能的发现，为治疗胰岛素抵抗和糖尿病提供了新的靶点。

贝特类

药物具有减重和改善胰岛素敏感性的功能。

动物实验证明改善胰岛素敏感性可降低体内RPB4水平，故推测这类药也可能有降低体内RBP4水平的作用。

本研究通过动物试验探讨：

1.RBP4在高脂肥胖胰岛素抵抗大鼠模型血清、肝脏和脂肪组织中的变化。

2.非诺贝特对高脂肥胖胰岛素抵抗大鼠模型血清、肝脏和脂肪组织中RBP4和

GluT4水平的影响。

40只雄性SD大鼠随机分为5组，普通饮食（NC）组、高脂饮食对照（FC）

组和高糖饮食对照（SC）组，高脂饮食治疗（FF）组和高糖饮食治疗（SF）组，每组8只大鼠。

喂养6周后，NC组予生理盐水，FC和SC组予牛奶，治疗组予非诺贝特100mg/kg灌胃2周后，行口服糖耐量试验和胰岛素耐量试验检测胰岛功能，取空腹血清检测血脂和胰岛素等，并取附睾、肾周脂肪和肝脏组织称重，计算脂体比和饲养效率，RT-PCR检测附睾脂肪和肝脏组织RBP4和GluT4mRNA表达水平。

1.FC和SC组大鼠糖耐量和胰岛素耐量受损，血脂紊乱，空腹血糖和胰岛素升

高，脂体比增加，肝脏出现了脂质沉积。

FC和SC组的大鼠血清RBP4水平

显著高于NC组1.84和1.57倍，附睾脂肪组织RBP4mRNA水平显著高于NC

组2.47倍和2.35倍，而GluT4显著低于NC组1.5倍和1.37倍，而三组

肝脏RBP4mRNA水平无显著差异。

2.非诺贝特治疗后，治疗组体重、脂体比和饲养效率有所下降，血脂谱、胰

岛素敏感性和肝脏脂质沉积较对照组均有所改善。

FF组血清RBP4和附睾脂

肪组织RBP4mRNA水平较FC组分别下降了20.7％和56.4％；

SF组较SC组

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分别下降了24％和52％，治疗组附睾脂肪组织GluT4mRNA水平较对照组均

有升高，但各组肝脏RBP4mRNA水平无显著差异。

3.单因素相关分析见到，血清RBP4与脂肪组织RBP4mRNA水平显著相关，且

两者均与体脂相关参数，糖脂代谢以及胰岛素抵抗相关指标呈显著相关，

而与脂肪组织GluT4mRNA水平呈显著负相关，肝脏组织RBP4mRNA与各项代

谢指标以及脂肪组织GluT4mRNA水平均无显著相关。

1．成功地制作了高脂、高糖诱导胰岛素抵抗大鼠模型。

2．高脂或高糖的饮食结构都可导致肥胖的发生，并刺激脂肪组织RBP4的表达

增加。

RBP4与血糖，血脂代谢，腹内脂肪重量以及胰岛素抵抗密切相关，

提