微生物限度检查法PPT文档格式.ppt

微生物限度检查法PPT文档格式.ppt

《微生物限度检查法PPT文档格式.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《微生物限度检查法PPT文档格式.ppt（100页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

菌。

n一一个个细细菌菌、霉霉菌菌和和酵酵母母菌菌菌菌落落均均可可由由一一个个或或多多个个菌菌细细胞胞形形成成。

因因此此供供试试品品中中所所测测的的菌菌落落数数实实际际为为菌菌落落形形成成单单位位数数（colonyformingunit，CFU），而而不不应应理理解解为为细细菌菌、霉霉菌菌、酵母菌的个数。

酵母菌的个数。

微生物检验项目微生物检验项目：

细菌总数测定、：

细菌总数测定、霉菌与酵母菌总数测定、控制菌检验霉菌与酵母菌总数测定、控制菌检验（包括大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、沙（包括大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、沙门菌、金黄葡萄球菌、破伤风梭菌）以门菌、金黄葡萄球菌、破伤风梭菌）以及活螨的检验。

及活螨的检验。

n2.1设备设备n2.1.1无菌室无菌室n2设备、仪器及用具设备、仪器及用具n2.1.1.1结结构构和和要要求求无无菌菌室室应应采采光光良良好好、避避免免潮潮湿湿、远远离离厕厕所所及及污污染染区区（面面积积不不超超过过10m2，高高度度不不超超过过2.4m）由由缓缓冲冲间间（2个个）、操操作作间间组组成。

成。

n操作间与缓冲间之间应有样品传递操作间与缓冲间之间应有样品传递箱，出入操作间和缓冲间的门不应箱，出入操作间和缓冲间的门不应直对。

直对。

n无无菌菌室室内内应应六六面面光光滑滑平平整整，能能耐耐受受清清洗洗消消毒毒。

墙墙与与地地面面及及墙墙壁壁、天天花花板板连连接接处处应应呈呈凹凹弧弧形形无无缝缝隙隙，不不留留死角。

操作间内不应安装下水道。

死角。

n无无菌菌室室内内的的照照明明灯灯应应嵌嵌装装在在天天花花板板内内，室室内内光光照照应应分分布布均均匀匀，光光照照度度不不低低于于300勒勒克克斯斯。

缓缓冲冲间间和和操操作作间间均均应应设设置置紫紫外外线线杀杀菌菌灯灯（.5W/m3），紫紫外外杀杀菌菌灯灯应应距距实实验验台台面面高高度度不不超超过过1M，并并应应定定期期检检查查辐辐射射强强度度，不不得得低低于于70W.cm-2（M距距离离）。

不不符合要求的紫外杀菌灯应及时更换。

符合要求的紫外杀菌灯应及时更换。

n2.1.1.2温温度度、湿湿度度无无菌菌室室内内温温度度和和相相对对湿湿度度直直接接影影响响紫紫外外杀杀菌菌灯灯杀杀菌菌效效果果，故故温温度度应应控控制制在在1826，相相对对湿湿度度4060。

操操作作间间或或净净化化工工作作台台的的洁洁净净空空气气应应保保持持对环境形成正压、不低于对环境形成正压、不低于4.9Pa。

n2.1.1.3操操作作间间操操作作间间应应安安装装空空气气除除菌菌过过滤滤层层流流装装置置。

洁洁净净度度不不应应低低于于是是10000级级，局局部部净净化化度度为为100级级，或或放放置置同同等等级级净净化化工工作作台台，并并准准备备药药物物天天平平，乙乙醇醇灯灯，火火柴柴，乙乙醇棉，大、小橡皮乳头等。

醇棉，大、小橡皮乳头等。

n2.1.1.4缓缓冲冲间间缓缓冲冲间间内内应应有有洗洗手手盆盆，无无菌菌衣衣、帽帽、口口罩罩、拖拖鞋鞋等等。

缓缓冲冲间间内内不不应应放放置置培培养养箱箱和和其其他他杂杂物。

物。

n2.1.1.5洁净洁净级级别别及及检检查方法查方法通通常采用尘常采用尘粒粒数数及及浮浮游游菌菌数数或或沉沉降降菌菌数测数测定定法。

法。

洁净室（区）空气洁净度级别表洁净室（区）空气洁净度级别表洁净度级洁净度级别别尘粒最大允许数尘粒最大允许数/立方米立方米0.5m5m百级百级3，5000万级万级350，0002，000十万级十万级3，500，00020，000三十万级三十万级10，500，00060，000级别级别微生物最大允许数微生物最大允许数换换气气次次数数/小时小时浮游菌浮游菌/立方米立方米沉降菌沉降菌/皿皿百级百级510.3米米/秒秒万级万级100320十万级十万级5001015三十万级三十万级15-n2.1.1.5.1浮浮游游菌菌数数测测试试方方法法（参参照照中中人人民民共共和和国国国国家家标标准准GB/T16293-1996）。

）。

n2.1.1.5.2沉降菌数测定沉降菌数测定（法法）n无菌室操作台消毒擦拭处理后，先启无菌室操作台消毒擦拭处理后，先启动层流净化装置动层流净化装置30min，将备妥的营将备妥的营养琼脂平板养琼脂平板3个个（经经3035预培养预培养48h，证明无菌落生长。

证明无菌落生长。

）以无菌方以无菌方式（或经传递箱）移入操作间，置净式（或经传递箱）移入操作间，置净化台左、中、右各化台左、中、右各1个，开盖，暴露个，开盖，暴露30min后将盖盖上。

后将盖盖上。

在在3035培养箱内倒置培养培养箱内倒置培养48h，取出检查。

取出检查。

3个平板生长的平均菌落个平板生长的平均菌落数不超过数不超过1个。

个。

n无无菌菌室室操操作作台台或或净净化化工工作作台台要要定定期期检检测测其其洁洁净净度度，应应达达到到100级级。

净净化化工工作作台台中中的的高高效效及及中中效效过过滤滤器器应应根根据据检检测测情情况况，必必要要时时予予以以更更换换处处理。

理。

n2.1.1.6消毒处理消毒处理无菌室应在每次无菌室应在每次操作前、后均用操作前、后均用.1%苯扎溴铵溶苯扎溴铵溶液或其他消毒液擦拭操作台及可能液或其他消毒液擦拭操作台及可能污染的死角。

开动层流净化装置，污染的死角。

开动层流净化装置，同时用紫外杀菌灯照射同时用紫外杀菌灯照射30min。

n2.1.2其其他他设设备备、净净化化工工作作台台、恒恒温温培培养养箱箱（3035）、生生化化培培养养箱箱（2528），微微波波炉炉（或或其其他他适适宜宜加加热热装装置置）、康康氏氏振振荡荡器器、匀匀浆浆仪仪（30008000r/min）、恒恒温温水水浴浴、电电热热干干燥燥箱箱（250300）、电电冰冰箱箱、空空调调、高高压压蒸蒸汽汽灭灭菌菌器器（使使用用时时要要进进行行灭灭菌菌效效果果检检查查并并应应定定期期请请有有关关部门检定）。

部门检定）。

n2.2仪器及器皿仪器及器皿n2.2.1菌菌落落计计数数器器、显显微微镜镜（1500X）、电电子子天天平平或或药药物物天天平平（感量（感量0.1g），），pH系列比色计。

系列比色计。

n2.2.2玻玻璃璃器器皿皿锥锥形形瓶瓶（250300ml，内内装装玻玻璃璃珠珠若若干干）、研研钵钵（陶陶瓷瓷制制，直直径径1012cm）、培培养养皿皿（9cm）、量量筒筒（100ml）、试试管管（18180mm）及及塞塞、吸吸管管（1ml分分度度0.01，10ml分分度度0.1）、注注射射器器（20或或是是30ml）、注注射射针针头头、载载玻玻片片、盖盖玻玻片、玻璃消毒缸片、玻璃消毒缸（带盖带盖）。

n玻玻璃璃器器皿皿用用前前应应洗洗涤涤干干净净，无无残残留留抗抗菌菌物物质质吸吸管管口口上上端端距距0.5cm处处塞塞入入约约2cm的的适适宜宜疏疏松松棉棉花花，置置吸吸管管桶桶内内或或牛牛皮皮纸纸袋袋中中。

锥锥形形瓶瓶、量量筒筒、试试管管均均应应加加棉棉塞塞或或硅硅胶胶塞塞，再再用用牛牛皮皮纸纸包包扎扎。

玻玻璃璃器器皿皿，均均于于160干干热热灭灭菌菌2h或或高高压压蒸蒸汽汽121灭灭菌菌30min，烘干备用。

烘干备用。

n2.3用具用具n2.3.1大大、小小橡橡皮皮乳乳头头（放放于于干干净净带带盖盖的的容容器器中中，并并应应定定期期用用70%75%乙醇溶液浸泡）。

乙醇溶液浸泡）。

n2.3.2无无菌菌衣衣、帽帽、口口罩罩、手手套套（洗洗净净后后配配套套，用用牛牛皮皮纸纸包包严严）灭灭菌菌，备备用用。

也也可可用用一一次次性性无无菌菌衣衣、帽、口罩、手套。

帽、口罩、手套。

n2.3.3接接种种环环（白白铱铱金金或或镍镍铬铬合合金金，环环径径45mm、长长度度610cm）、乙乙醇醇灯灯、乙乙醇醇棉棉球球或或碘碘伏伏棉棉球球、灭灭菌菌剪剪刀刀或或灭灭菌菌手手术术刀刀和和灭灭菌菌镊镊子子、灭灭菌菌钢钢锥锥、灭灭菌菌称称样样纸纸、不不锈锈钢钢药药匙匙、试试管管架架、火火柴柴、记记号号笔笔、白白瓷瓷盘盘、洗洗手手盆盆、陶陶瓦瓦盖盖（12cm）、实实验记录纸等。

验记录纸等。

n3试液试液n3.1消毒液消毒液n3.1.10.1%苯苯扎扎溴溴铵铵溶溶液液（供供洗洗手手、擦拭操作台面用）。

擦拭操作台面用）。

n3.1.25%石石碳碳酸酸溶溶液液（配配好好后后装装入入玻玻璃璃消消毒毒缸缸内内，供供消消毒毒带带菌菌吸吸管管用用）亦可选用其他适宜消毒液。

亦可选用其他适宜消毒液。

n3.1.375%乙醇溶液乙醇溶液n3.1.4碘酊或碘伏溶液碘酊或碘伏溶液n3.2稀释剂和试剂稀释剂和试剂n3.2.10.9%无菌无菌n氯化钠溶液氯化钠溶液（附录附录3.1）n3.2.2无菌聚山梨酯无菌聚山梨酯-80n3.2.3无无菌菌聚聚山山梨梨酯酯-80氯氯化化钠钠溶溶液液（附录附录3.2）n3.2.4无无菌菌磷磷酸酸盐盐缓缓冲冲液液（pH7.2）（附录附录3.3）n3.2.5无无菌菌0.1%氯氯化化三三苯苯四四氮氮唑唑溶溶液液（TTC）（附录附录2.15）n4培养基培养基n4.1营养琼脂培养基营养琼脂培养基（附录附录5.2）n4.2玫玫瑰瑰红红钠钠琼琼脂脂培培养养基基（附附录录5.3）n4.3酵酵母母浸浸出出粉粉胨胨葡葡萄萄糖糖（YPD）琼脂培养基琼脂培养基（附录附录5.4）n培养基制备应注意：

培养基制备应注意：

n4.3.1采采用用干干燥燥培培养养基基，按按说说明明配配制制，应应对对灭灭菌菌后后的的培培养养基基pH值值进进行行校校验验。

若若为为自自配配培培养养基基，原原料料应应挑挑选选，琼琼脂脂凝凝固固力力应应测测定定，以以确确定定配配制制时时琼琼脂脂用用量量。

试试剂剂规规格格应应为为化化学学纯纯以以上上的试剂。

的试剂。

n4.3.2配配制制的的培培养养基基不不应应有有沉沉淀淀，如如有有沉沉淀淀，应应于于溶溶化化后后趁趁热热过过滤滤，灭灭菌菌后使用。

后使用。

n4.3.3培培养养基基的的分分装装量量不不得得超超过过容容器器的的确确2/3，以以免免灭灭菌菌时时溢溢出出。

包包装装时时，塞塞子子必必须须塞塞紧紧，以以免免松松动动或或脱脱落落造造成成染菌。

染菌。

n4.3.4培培养养基基配配置置后后应应在在2h内内灭灭菌菌，避免细菌繁殖。

避免细菌繁殖。

n4.3.5灭菌后的培养基在冷暗处保存灭菌后的培养基在冷暗处保存备