观看细胞骨架实验报告docWord文档格式.docx

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　　2.向小皿中加入1.5mlTritonX-100（1%），浸没20min后，吸走TritonX-100

　　3.

向小皿中加入2mlMbuffer浸没置于摇床上5min，重复两次后，吸走Mbuffer

　　4.向小皿中加入105ml戊二醛（3%），浸没30min后，吸走戊二醛

　　5.向小皿中加入2mlPBS，浸没置于摇床上5min，重复两次

　　6.掏出表皮平铺于载玻片上，滴加100微升，静置100min后吸取染料

　　7.向表面滴加蒸馏水洗涤后用纸巾洗去液体，重复两次

　　8.盖上盖玻片，擦去残余液体，用光学显微镜观看并拍照记录

　　四、实验结果：

　　如下图，洋葱内表皮细胞轮廓清楚可见，细胞壁及其分界明显可见。

可观看到线性纤维交织而成的网状结构，同一细胞内遍地骨架密集度不均匀，细胞核区域纤维较密

　　集，蓝色较重。

调剂显微镜焦距可观看到细胞不同横切面的网络结构的转变，说明细胞骨架以三维立体结构的形式散布在整个细胞内。

　　五、试探题：

　　1.简述细胞质骨架的大体类型及结构特点答：

微管：

中空的圆筒状结构，直径为18nm～25nm，组成微管的要紧成份是微管蛋白。

这种蛋白有两个亚基，即α，β亚基它们成螺旋形排列。

进化高度保守。

微丝：

由肌动蛋白组成的直径约为7nm的骨架纤维，单体形式的球形肌动蛋白聚合形成纤维形肌动蛋白，在微丝结合蛋白的辅助作用下形成微丝高级结构，行使功能。

　　中间纤维：

中空的骨状结构，直径介于微管微丝之间，具有明显的组织细胞特异性，大体结构为一个中央α螺旋杆状区辅以双侧大小和化学组成不同的端区。

　　2.本实验观看到的蓝色纤维主若是哪一种细胞骨架？

　　答：

应为微丝和中间纤维。

　　3.考马斯亮蓝染色方式的优缺点。

优势：

反映相对迅速，其结合物在室温下1h内维持稳固，试剂配置简单，操作简便。

　　缺点：

用于不同蛋白质测按时有较大的误差，仍有一些物质干扰此法的测定。

　　六、实验讨论：

　　1.观看和分析细胞骨架的意义？

细胞骨架是细胞结构的重要组成部份，也是细胞行为与功能的重要调剂系统，观看和分析细胞骨架的性质与转变将帮忙咱们更好地熟悉和研究细胞性质、功能与机制。

　　2.考马斯亮蓝是一个理想的细胞骨架染料吗？

本实验的优势和缺点是什么？

不是，特异性荧光染料可能更好。

本实验优势是反映相对迅速，其结合物在室温下1h内维持稳固，试剂配置简单，操作简便。

缺点是无法直观分辨微管，微丝和中间纤维等。

篇二：

实验四细胞骨架观看

　　实验五细胞骨架观看XX.04.20

　　一、实验目的

　　了解用光学显微镜观看植物细胞骨架的原理及方式，观看光学显微镜下细胞骨架的网状结构。

　　二、实验原理

　　细胞骨架（cytoskeleton）是指细胞质中纵横交织的纤维网络结构，按组成成份和形态结构的不同可分为微管（MT，20－25nm）、微丝（MF，5－7nm）和中间纤维（IF，8－11nm）。

它们对细胞形态的维持、细胞的生长、运动、割裂、分化和物质运输等起重要作用。

　　光学显微镜下细胞骨架的观看多用1%TritonX－100（聚乙二醇辛基苯基醚，是一种非离子型表面活性剂或称去污剂）处置细胞，可使细胞膜和细胞质中的蛋白质和全数脂质被溶解抽提掉，而细胞骨架系统的蛋白质不受破坏被保留，经戊二醛固定，考马斯亮兰R250（CoomassiebrilliantblueR250是一种蛋白质染料）染色后，用光学显微镜观看，能够见到一种网状结构，即是细胞骨架结构。

微管不够稳固，其他类型纤维太细，无法分辨，只能观看到由微丝组成的微丝束（40nm）为网状结构。

M缓冲液使细胞骨架中的微丝维持稳固，在M缓冲液中，其中咪唑是缓冲剂EGTA和EDTA螯合Ca离子，溶液并提供Mg离子，在低钙条件下，骨架纤维维持聚合状态而且较为舒张，便于观看。

　　三、实验仪器、材料和试剂

（一）仪器、用具：

光学显微镜，镊子，剪子，试管，载玻片，盖玻片，培育皿，烧杯。

（二）材料：

新鲜洋葱鳞茎。

　　（三）试剂：

　　1．2％考马斯亮蓝R250染色液：

0.2g考马斯亮蓝R250粉加入甲醇46.5mL、冰醋酸7mL、蒸馏水46.5mL。

　　2．磷酸缓冲液（pH6.8）：

0.2149gNa2HPO4·

12H2O、0.0816gKH2PO4加入100ml蒸馏水。

　　3．M缓冲液（pH7.2）50mmol／L咪唑，50mmol/L）氯化钾、0.5mmol／L氯化镁、1mmol/L乙二醇（a-氨基乙基）醚四乙酸、0.1mmol/L乙二胺四乙酸；

1mmol／L巯基乙醇，调至pH7.2。

　　4．1%TrionX-100（聚乙二醇辛基苯基醚）：

0.5ml100％TritonX-100加入M缓冲液49.5ml。

　　5．3%戊二醛：

6mL25％戊二醛加入磷酸缓冲液44mL。

　　四、实验方式与步骤

　　1．用镊子撕取洋葱鳞叶内侧的表皮假设干片约1cm2大小假设干片），置于50mL烧杯中，加入pH6.8磷酸缓冲液，使其下沉；

　　2．吸去磷酸缓冲液，用1％TritonX—100处置20min。

　　3．吸去TritonX—100，用M缓冲液洗3次，每次5min。

　　4．用3％戊二醛固定30min。

　　5．磷酸缓冲液（pH6.8）洗3次，每次5min。

　　6．0.2%考马斯亮蓝R250染色10min。

　　7．蒸馏水洗2次，然后将样品置于载玻片上,加盖玻片，于一般光学显微镜下观看。

　　8．若是染色成效好，那么可依次用50％乙醇、70%乙醇，95％乙醇、正丁醇、二甲苯处置样品，各5min，然后将样品平展于载玻片上，加一滴中性树胶，盖上盖玻片封片，制成永久切片。

　　五、结果

　　光学显微镜下洋葱内表皮细胞的轮廓清楚可见（如图），细胞壁及其分界明显。

10×

10倍镜下可粗略观看到细胞内粗细不等的蓝色纤维、团块形成的网状结构。

同一细胞内遍地骨架的密集度不均匀，细胞核区域的纤维相对密集，蓝色浓重，乃至分辨不出网络结构，另外可见细胞壁区域有零星蓝色纤维散布；

相邻细胞的密集程度大体一致，但有少数细胞有较大不同。

　　10×

40倍镜下可清楚观看到蓝色的网状结构确实由线性纤维交织成，纤维间的结合点稍膨大。

细胞边缘骨架较稀疏，但可见由与胞壁相同走向的纤维形成的细胞质膜的轮廓，与细胞内部的纤维通过纵向的纤维相连。

相邻细胞有纤维穿过胞间的细胞壁。

篇三：

细胞生物学

实验报告

　　实验一：

细胞的形态观看及其大小测量

　　一、实验目的：

　　一、通过对原核和真核各类形态细胞的光学显微镜观看，了解细胞的形态及其显微结构；

　　二、学习显微测量的方式，对细胞的大小有一直观熟悉。

　　二、实验材料和仪器：

　　小白鼠肝细胞切片；

鸡血红细胞；

蚕豆叶片横切片；

　　一般光学显微镜；

目镜测微尺；

镜台测微尺；

载玻片；

盖玻片。

　　三、实验步骤：

（一）细胞形态观看

　　l、动物细胞的观看

（1）人肝细胞切片：

在显微镜下认真观看肝细胞的形态构造。

（2）鸡血细胞涂片的观看：

观看血细胞的组成；

红细胞、白细胞、血小板的形态特点。

　　二、植物细胞的观看

（1）取蚕豆叶片横切片的观看：

注意表皮细胞和叶肉细胞的大体结构。

（二）细胞的大小和测量

　　一、卸下目镜的上透镜，将目镜测微尺刻度向下装在目镜的焦平面上，再旋上目镜的上透镜。

　　二、将镜台测微尺刻度向上放在镜台上夹好，使测微尺分度位于视野中央。

调焦至能看清镜台测微尺的分度。

　　3、警惕移动镜台测微尺和转动目镜测微尺（如目镜测微尺分度模糊，可转动目镜上透镜进行调焦），使两尺左侧的一直线重合，然后由左向右找出两尺另一次重合的直线。

　　4、记录两条重合线间目镜测微尺和镜台测微尺的格数。

按下式计算目镜测微尺每格等于多少μm：

　　镜台测微尺的格数

　　目镜测微尺每格的微米数=—————————×

10

　　目镜测微尺的格数

　　四、实验结果：

　　一、目镜校正：

40倍显微镜目镜测微尺每格的微米数=17/70=0.24

　　二、细胞大小的测量：

　　五、作业与试探：

　　一、血细胞按含量高低，要紧含有：

红细胞，白细胞，血小板。

　　白细胞最大，红细胞次之，血小板最小。

红细胞：

要紧的功能是输送氧。

白细胞：

要紧扮演了免疫的角色，当病菌侵入人体时，白细胞能穿过毛细血管壁，集中到病菌入侵部位，将病菌包围，吞噬。

血小板：

止血进程中起着重要作用。

细胞形态见以下图。

　　二、植物细胞一样比动物细胞大一些。

形态图见下。

　　3、在不同放大倍数下，测定的细胞大小大体一致，但有一些误差。

放大倍数越大，在视野中一样实际距离下的两点视野距离更大，而更易测量准确。

　　实验二：

PAS（PeriodicAcidSchiff）反

　　应显示糖原和其它多糖物质

　　一、实验目的

　　一、熟悉PAS法原理及操作步骤；

　　二、观看PAS反映的染色结果，并观看多糖在组织细胞中的散布。

　　多糖是由多个单糖分子缩合脱水而生成的化合物。

一些不溶性的多糖组成植物和动物的骨架，如植物的纤维素和动物的甲壳素，一样称为结构多糖。

另一些多糖在生物体内作为能量贮存，如淀粉（植物）和糖元（动物），在需要时能够通过生物体内酶系统的作用分解，释放出单糖。

　　三、实验用品：

　　过碘酸酒精溶液、Schiff试剂、亚硫酸水溶液、苏木精溶液、二甲苯、100%乙醇+二甲苯（1：

1）。

　　梯度乙醇溶液：

100％，95％，90％，80％，70％，50％各两份，一份用于脱腊复水，一份用于脱水。

　　载玻片、盖玻片、染色缸、显微镜、小烧杯、胶头滴管、镊子、刀片、马铃薯；

小鼠肝细胞石蜡切片。

　　四、实验步骤:

（一）马铃薯切片的观看

　　制作马铃薯徒手切片→过碘酸处置15～30min→70%乙醇1min→schiff试剂15min→亚硫酸水漂洗2～3次→蒸馏水漂洗→镜检

（二）小鼠肝细胞切片的观看

　　取鼠肝石蜡切片→二甲苯脱蜡约10min→二甲苯+100%乙醇（3min）→梯度乙醇脱二甲苯，在各浓度乙醇（100％，95％，90％，80％，70％，50％）中约2～3min→过碘酸氧化15～30min→蒸馏水漂洗→Schiff试剂15～30min→亚硫酸水漂洗2～3次→蒸馏水漂洗→苏木精染色