D-二聚体检测与应用优质PPT.ppt

D-二聚体检测与应用优质PPT.ppt

《D-二聚体检测与应用优质PPT.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《D-二聚体检测与应用优质PPT.ppt（66页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

分析法、乳胶增强型免疫分析法等。

90年代末到本世纪初，年代末到本世纪初，免疫比浊法在凝血仪上实现了免疫比浊法在凝血仪上实现了自动化检测。

自动化检测。

但但D-二聚体片段异源性的问题被忽略了二聚体片段异源性的问题被忽略了3凝血系凝血系统内源性凝血外源性凝血凝血酶原凝血酶FXIIIFXIIIa纤溶酶原纤溶酶纤维蛋白单体纤维蛋白原交联纤维蛋白FDPX,Y,D,E等碎等碎片片X,等碎片DD,DXD,DD/E,YXD等复合物一、一、D-D-二聚体的产生二聚体的产生纤溶系溶系统5所检测的D二聚体片段D-D-二聚体检测的技术现状二聚体检测的技术现状制备单克隆抗体，针对的只是某类型制备单克隆抗体，针对的只是某类型D-二聚体二聚体。

病理过程中可产生多种类型病理过程中可产生多种类型D-二聚体二聚体，由于不同检，由于不同检测试剂只测定其中某种类型，而非降解片段的全部，测试剂只测定其中某种类型，而非降解片段的全部，因此各类试剂在对同一标本进行测定时，其敏感性因此各类试剂在对同一标本进行测定时，其敏感性显著不同。

显著不同。

目前，目前，30种检测方法（种检测方法（20余余种单克隆抗体）被应用于临种单克隆抗体）被应用于临床，不同试剂间差异非常显著。

床，不同试剂间差异非常显著。

无统一的国际标准无统一的国际标准D-D-二聚体检验方法的演变二聚体检验方法的演变低敏方法导致许多病理状态无法及时反映。

低敏方法导致许多病理状态无法及时反映。

急性肺血栓栓塞症诊断治疗专家共识急性肺血栓栓塞症诊断治疗专家共识中华内科杂中华内科杂志志20102010年年11月。

月。

推荐推荐高敏感度的方法高敏感度的方法国际上目前已经开始逐渐推动高敏方法。

国际上目前已经开始逐渐推动高敏方法。

原方法敏感度低：

阳性率低原方法敏感度低：

阳性率低新方法敏感度高：

阳性率高新方法敏感度高：

阳性率高临床：

与既往的使用经验不符临床：

与既往的使用经验不符8二、二、D-D-二聚体检测试剂选择二聚体检测试剂选择高度敏感性和NPV-（几乎）无假阴性有明确的阈值（cutoff值）l适用于24小时作常规分析l可用于门急诊标本分析l自动化检测l操作步骤简易l快速的报告时间l定量检测,有标准、质控物l经济9检测试剂盒检测试剂盒目前市场上用于检测D-二聚体的试剂品种有很多种，大体上可分为两种情况：

一种一种是以欧美产品为代表，主要用于DVT/PE排除筛查特点特点：

灵敏度高，检测范围相对较窄。

另一种另一种是以日本产品为代表，主要是用于DIC诊断特点特点：

灵敏度相对较低，检测范围较宽10VTE（DVT/PE）exclusionDICD-Dimer无统一的国际标准无统一的国际标准目前有超过目前有超过30种检测方法和种检测方法和20多种单抗被使用。

多种单抗被使用。

存在两种报告单位：

D-dimer（DDU）和纤维蛋白原当量和纤维蛋白原当量（FEU）抗体对抗体对D二聚体不同片段有不同的亲和力二聚体不同片段有不同的亲和力不同的试剂有不同的干扰情况不同的试剂有不同的干扰情况11三、标准化问题三、标准化问题12美国临床实验室标准化协会（美国临床实验室标准化协会（CLSICLSI）H59-PH59-P推荐指南推荐指南13DD二聚体试剂标准二聚体试剂标准中国国家标准（讨论稿）中国国家标准（讨论稿）4.2阴性预测值结合临床诊断的验前概率进行D-二聚体检测，其阴性预测值应不低于95%。

4.3测试范围涵盖制造商提供的用于排除诊断的临界值的1/2到4倍的临床标本测定值。

4.4线性D-二聚体试剂在测试范围内，线性相关系数应大于0.98。

4.5精密度4.5.1重复性用正常质控血浆同日内重复测试所得结果的变异系数（CV）不超过15，用高值异常质控血浆同日内重复测试所得结果的变异系数（CV）不超过10。

144.74.7报告方式报告方式D-二聚体的报告单位通常包括纤维蛋白原等量单位（FEU）和D-二聚体单位（DDU）两种形式。

FEU是将D-二聚体的量用降解前纤维蛋白原分子的量来表达，因此，用FEU表达的D-二聚体的量相当于用DDU表达的1.7倍。

在D-二聚体报告方式中还包括ng/mL、ug/mL和mg/L等形式，通常应该直接采用制造商提供的单位，不建议进行形式和量纲的转换15四、四、InnovanceD-DimerInnovanceD-Dimer检测试剂检测试剂已通已通过美国美国FDA验证（FDA510K）明确可用于静脉栓明确可用于静脉栓塞性疾病的排除，其塞性疾病的排除，其阈值为阈值为0.5mg/LFEU0.5mg/LFEU已得到已得到EHAEHA，ICTHICTH和日本病理学会接受和日本病理学会接受2010年在中国成功注册1617检测原理全自动乳胶增强免疫比浊度法新一代单克隆抗体8D3检测系统SysmexCA-7000systemSysmexCA-1500systemSysmexCA-560systemCSseries18检测试剂抗体试剂：

REAGENT乳胶颗粒包被低压冻干，需蒸馏水复溶稀释液：

DILUENT液体，用于样本稀释、定标稀释有缓冲液作用添加剂：

SUPPLEMENT液体，用于封闭非特异性抗体缓冲液：

BUFFER液体，使信号增强含有聚合碳水化合物的缓冲液19定标品与试剂批号匹配有不同系统的靶值冻干粉人血浆为基质，所含D二聚体浓度大约为4.4mg/LFEU定标曲线有效期6个月以上20定标范围:

0.194.40mg/LFEU或更宽自动6点定标定标有效期达6个月以上样本每测试:

815L,单次检测检测范围0.1935.20mg/LFEU样本结果高于定标曲线范围，仪器自动稀释样本高于检测范围，可用Innovance*DDIMERDiluent再进行检测21质控品CONTROL1冻干粉正常范围，大约0.3mg/LFEU，低于参考范围和CUTOFF值CONTROL2冻干粉异常范围，大约3mg/LFEU，高于参考范围和CUTOFF值22试剂稳定性StabilityafterpreparationTemperatureReagentBufferSupplem.DiluentCal.Controls2to+8C4wks4wks4wks4wks-5days-18C8wks8wks8wks8wks-2wks+15to+25C-4hrs6hrsOnboardstabilityBCS/BCSXPBCTSysmexCA-7000SysmexCA-1500SysmexCA-560Reagents48hrs48hrs48hrs24hrs8hrsCalibrator4hrs4hrs4hrs4hrs4hrsControl8hrs8hrs8hrs8hrs8hrs分析性能23抗原过剩D-dimer在500mg/LFEU以下,和FDP在2000mg/LFEU以下都没有抗原过剩是cutoff值0.5mg/LFEU的1000倍！

分析灵敏度BCS/BCSXPBCTSysmexCA-7000SysmexCA-1500SysmexCA-560Analyticalsensitivitymg/LFEU0.0700.0750.0320.0360.06824对潜在干扰物质不敏感，主要通过SUPPLEMENT来阻断非特异性抗体抗干扰能力BCS/BCSXPBCTSysmexCA-7000SysmexCA-1500SysmexCA-560类风湿因子IU/mL13301330133013301330甘油三脂mg/dL600600400600400血红蛋白mg/dL200200200100200胆红素mg/dL6015601512总蛋白g/L7575757575肝素IU/mL8888825Innovance*D-DIMER的参考区间及cutoff值正常人群的百分之90分位数:

0.55mg/LFEUCutoff值：

0.5mg/LFEU没有检测系统差异略高于CUTOFF值85%的正常人群的D二聚体低于0.50mg/LFEU均值和中位数均低于CUTOFF值26271.在不同地区建立样本采集点；

2.收集门诊怀疑有DVT和PE的病人样本（至少300人）；

3.病人选择，采用Wells的验前概率（PretestProbabilityPTP）评估规则和影像学检查，并对阴性病人进行为期三个月的随访，以最终确诊是否患有DVT或PE；

4.剔除预防或抗凝治疗的病人和孕妇；

5.对所有选中的疑似患者同时进行D-二聚体检测和影像学检查；

6.对D-二聚体检测结果作受试者工作特征（ROC）曲线并确定cutoff值。

国外通常采用以下步骤建立国外通常采用以下步骤建立cutoffcutoff值：

值：

FDA验证结果（FDA510K）28NCutoffmg/LFEUNfalsenegativeNPV/LCL%Sensitivity/LCL%Specificity/LCL%Innovance*D-DIMERSysmexCA-700014250.50299.5/98.799.4/98.038.3/35.4SysmexCA-150014250.50299.5/98.799.4/98.039.3/36.9SysmexCA-56014250.50299.5/98.699.4/98.037.8/35.4ComparisonAssaysVIDASD-DimerExclusion14250.500399.3/98.399.0/97.438.1/35.7StratusCSDDMR11280.450299.4/98.499.2/97.539.7/37.0LCL=Lower95%confidencelimit29结果报告结果报告的形式和单位按厂家推荐，不要对单位做任何转换不是所有的D-二聚体检测的阈值（cutoff值）都是500ug/LFEU或0.5mg/LFEU报参考区间还是报cutoff值30InnovanceD-DimerInnovanceD-Dimer与与D-DimerPlusD-DimerPlus的比较的比较InnovanceDDD-DimerPlusFDA认证已通过（510K）没通过用于排除单抗8D3DD5报告单位mg/LFEUmg/LDDUCutoff值0.5mg/LFEU0.13mg/LDDU参考区间0.55mg/LFEU0-0.246mg/LDDU线性范围0.19-4.4mg/LFEU0.1-2.1mg/LDDU检测范围0.19-35mg/LFEU0.1-16mg/LDDU开瓶后稳定性2-84周-188周2-82天室温5天-182周抗类风湿因子、肝素抗类风湿因子、肝素1330I