食品微生物之检验方法病原性大肠杆菌之检验101年署授文档格式.docx

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2.2.1.生物安全操作櫃（Biologicalsafetycabinet,BSC）：

第二等級（classII）（含）以上者。

2.2.2.乾熱滅菌器。

2.2.3.高壓滅菌釜。

2.2.4.冰箱：

能維持5±

3℃者。

2.2.5.顯微鏡：

能放大至1000倍之一般光學顯微鏡。

2.2.6.培養箱：

能維持內部溫差在±

1.0℃以內者。

2.2.7.水浴：

能維持水溫溫差在±

0.2℃以內者。

2.2.8.攪拌均質器（Blender）或鐵胃（Stomacher）：

能適用於無菌操作者。

2.2.9.燈箱：

觀察血清試驗用。

2.2.10.吸管（Pipette）：

已滅菌。

1mL吸管應有0.01mL之刻度；

5mL及10mL吸管應有0.1mL刻度。

2.2.11.培養皿：

已滅菌，內徑約90mm，深度約15mm，底皿之內外面應平坦，無氣泡、刮痕或其他缺點。

2.2.12.稀釋用容器：

無菌袋或有1000mL、500mL、99mL及90mL標記附蓋（栓）之可滅菌廣口瓶。

2.2.13.增菌用容器：

附蓋之500mL或1000mL廣口瓶。

2.2.14.杜蘭發酵管（Durhamfermentationtube）：

外徑9×

22mm，使用時倒置於15×

150mm之試管內。

2.2.15.接種針及接種環（直徑約3mm）：

鎳鉻合金，鉑銥或鉻線材質，或可拋棄式者。

2.2.16.載玻片及蓋玻片：

適用於染色及鏡檢者。

2.2.17.褐色試藥瓶。

2.2.18.蠟筆：

塗寫、劃記載玻片時使用。

2.2.19.研缽、杵：

研磨試藥用。

2.2.20.無菌濾膜：

孔徑0.45μm或以下之親水性醋酸纖維濾膜。

2.2.21.試藥：

氯化鈉、磷酸二氫鉀（KH2PO4）、磷酸氫二鉀（K2HPO4）、結晶紫（crystalviolet）、甲基紅（methylred）、伊紅Y（eosinY）、亞甲藍（methyleneblue）、磷酸氫銨鈉（NaNH4HPO4．4H2O）、無水磷酸氫二鈉（Na2HPO4）、磷酸氫二鈉（Na2HPO4．12H2O）、硫酸鎂（MgSO4．7H2O）、檸檬酸鈉（Na3C6H5O7．2H2O）、乳糖（lactose）、蔗糖（sucrose）、葡萄糖（glucose）、葡萄糖（dextrose）、側金盞花糖醇（adonitol）、纖維雙糖（cellobiose）、阿拉伯膠糖（arabinose）、甘露糖醇（mannitol）、山梨酸糖醇（sorbitol）、膽汁鹽（bilesaltsNo.3）、中性紅（neutralred）、溴甲酚紫（bromocresolpurple）、亞甲藍（methyleneblue）、溴麝香草藍（bromothymolblue）、酚紅（phenolred）、離胺酸（L-lysine）、硫酸月桂酸鈉（sodiumlaurylsulfate）、黏液酸（mucicacid）、無水硫酸鎂（MgSO4）、尿素（urea）、草酸銨、碘化鉀、氰化鉀、碘、沙黃O（safraninO）、對－二甲胺基苯甲醛（P-dimethylaminobenzaldehyde）、α－萘酚（α-naphthol）、氫氧化鉀、肌酸（creatine）、95%乙醇、戊醇（amylalcohol）、異戊醇（isoamylalcohol）、鹽酸、硝酸鉀（KNO3）、醋酸鈉（CH3COONa）、液態石蠟、氫氧化鈉、硝基苯吡喃半乳糖（O-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside）、四甲基對位苯二胺鹽酸鹽（N,N,N’,N’-tetramethyl-p-phenylenediaminedihydrochloride）、對－胺基苯磺酸（salfanilicacid）、冰醋酸、萘基乙二胺鹽酸鹽〔N-（1-naphthyl）ethylenediaminedihydrochloride〕、硫酸銨亞鐵〔Fe（NH4）2（SO4）2．6H2O〕、硫代硫酸鈉（Na2S2O3）、聚己二烯酸80（polysorbate80）、硫酸銨〔（NH4）2SO4〕、丙二酸鈉（sodiummalonate）及鋅粉均採用化學試藥級；

洋菜（agar）、胰化蛋白（tryptose）、胰化酪蛋白（trypticase）、心肌浸出物（heartmuscleinfusion）、硫蛋白腖（thiotone）、聚蛋白腖（polypeptone）、酵母抽出物（yeastextract）、牛肉抽出物（beefextract）、蛋白腖（proteosepeptone）、胰化蛋白腖（tryptone）、牛腦浸出物（calfbraininfusion）、牛心浸出物（beefheartinfusion）、蛋白腖（proteosepeptone）及蛋白腖（peptone）均採用微生物級。

2.2.22.試劑：

2.2.22.1.30%氫氧化鈉溶液：

取氫氧化鈉30g，以蒸餾水溶解使成100mL。

2.2.22.2. 

1.0M磷酸二氫鈉溶液：

取磷酸二氫鈉6.9g，溶於蒸餾水45mL，徐徐注入30%氫氧化鈉溶液約3mL至pH值為7.0，再加蒸餾水使成50mL，貯存於4℃冰箱中備用。

2.2.22.3.磷位硝基苯吡喃半乳糖試劑（ONPGreagent）：

取鄰位硝基苯吡喃半乳糖80mL，溶於37℃蒸餾水15mL，加入1.0M磷酸二氫鈉溶液5mL，貯存於4℃冰箱中，使用時須加溫至37℃。

2.2.22.4.1N氫氧化鈉溶液：

取氫氧化鈉4g，以蒸餾水溶解使成100mL。

2.2.22.5.5N氫氧化鈉溶液：

取氫氧化鈉20g，以蒸餾水溶解使成100mL。

2.2.22.6.5N醋酸溶液：

取冰醋酸286ml，加水715ml。

2.2.22.7.50%葡萄糖溶液：

稱取葡萄糖5g，溶於蒸餾水10mL，以無菌濾膜過濾。

2.2.22.8.0.5%氰化鉀溶液：

取氰化鉀0.5g，溶於冷卻至5～8℃之蒸餾水100mL。

（氰化鉀劇毒，調製時均應冷卻至5～8℃，貯存期限以不超過2週為宜。

）

2.2.22.9. 

柯瓦克氏試劑（Kovacs’reagent）：

取對－二甲胺基苯甲醛5g，溶於戊醇或異戊醇75mL，再徐徐加入鹽酸，混合均勻後應呈黃色，並須保存於4℃冰箱中。

2.2.22.10.歐普氏試劑（VogesProskauerreagent，VPreagent）：

　　溶液A：

取α－萘酚5g，溶於無水乙醇100mL。

　　溶液B：

取氫氧化鉀40g，溶於蒸餾水使成100mL。

2.2.22.11.氧化酶試驗試劑（Oxidasetestreagent）：

取四甲基對位苯二胺鹽酸鹽1g，溶於蒸餾水100mL，貯存於褐色瓶，置於4℃冰箱中，使用期限以不超過一星期為宜。

2.2.22.12.亞硝酸鹽試驗試劑（Nitritetestreagents）：

　　試劑A：

取對－胺基苯磺酸1g，溶於5N醋酸溶液125mL。

　　試劑B：

取萘基乙二胺鹽酸鹽0.25g，溶於5N醋酸溶液200mL。

2.2.22.13.0.85%生理食鹽水：

取氯化鈉8.5g溶於蒸餾水1000mL，分裝於稀釋用容器中，經121℃滅菌15分鐘。

2.2.22.14.0.5%生理食鹽水：

取氯化鈉5.0g溶於蒸餾水1000mL，分裝於稀釋用容器中，經121℃滅菌15分鐘。

2.2.22.15.甲基紅指示劑（Methylredindicator）：

取甲基紅0.1g，溶於95%乙醇300mL，再加蒸餾水使成500mL。

2.2.22.16.稀釋液之配製：

2.2.22.16.1.磷酸鹽緩衝液（Butterfield'

sphosphate-buffereddilutionwater,BPBW）：

取磷酸二氫鉀34g，溶於蒸餾水500mL，以1N氫氧化鈉溶液調整pH值為7.2，再加蒸餾水使成1000mL，以121℃滅菌15分鐘，貯存於冰箱中，作為原液。

使用時，取原液1.25mL，加入蒸餾水1000mL，分裝於稀釋用容器中，以121℃滅菌15分鐘。

2.2.22.16.2.磷酸鹽緩衝生理食鹽水（Phosphatebufferedsaline,PBS）：

取氯化鈉7.65g、無水磷酸氫二鈉0.724g及磷酸二氫鉀0.21g，溶於蒸餾水500mL，以1N氫氧化鈉溶液調整pH值為7.4，再加蒸餾水使成1000mL，以121℃滅菌15分鐘。

2.2.23.革蘭氏染色液（Gramstainsolution）：

2.2.23.1.哈克氏（Hucker'

s）結晶紫液（初染劑）：

取結晶紫2g，溶於95%乙醇20mL。

取草酸銨0.8g，溶於蒸餾水80mL。

　　將溶液A與溶液B混合，靜置24小時後以濾紙過濾，取濾液作為初染劑。

2.2.23.2.革蘭氏碘液（媒染劑）：

　　取碘化鉀2g及碘1g，置於研缽中，研磨5～10秒，加蒸餾水1mL研磨，次加蒸餾水5mL研磨，再加蒸餾水10mL，研磨至碘化鉀和碘完全溶於蒸餾水中，將此溶液注入褐色瓶中，再以適量蒸餾水洗滌研缽及杵後，以此洗液併入，使溶液達300mL。

2.2.23.3.哈克氏複染液（複染劑）：

　　取沙黃O2.5g，溶於95%乙醇100mL，供作複染原液。

使用時，取原液10mL，加入蒸餾水90mL，作為複染液。

　　註1：

革蘭氏染色液因放久可能失效，購買成品時，要注意其保存期限；

自行配製者，應檢查其染色效果。

2.2.24.抗血清：

2.2.24.1.病原性大腸桿菌多價本體莢膜抗血清（Poly-Valent”OK”typeantisera）：

OK1、OK2、OK3、OK4、OK5。

2.2.24.2.病原性大腸桿菌單價本體莢膜抗血清（Monovalent“OK”typeantisera）。

2.2.24.3.病原性大腸桿菌單價本體抗血清（Monovalent“O”typeantisera）。

2.2.25.培養基：

2.2.25.1.磷酸胰化蛋白腖培養液（Tryptonephosphatebroth,TP）

2.2.25.2.腦心浸出培養液（Brainheartinfusionbroth,BHI）

2.2.25.3.伊紅亞甲藍（洋菜）培養基（Levine’seosinmethyleneblueagar,L-EMB）

2.2.25.4.馬康奇（洋菜）培養基（MacConkeyagar）

2.2.25.5.硫酸月桂酸胰化蛋白培養液（Lauryl