PCR实验室Word格式.docx
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为避免交叉污染，进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行，即只能从试剂贮存和准备区-标本制备区-扩增反应混合物配制和扩增区—扩增产物分析区。
各实验区之间的试剂及样品传递应通过传递窗进行。
PCR实验室平面布置示意图如图1所示。
图1PCR实验室平面布置示意图
PCR实验室并没有严格的净化要求，但是为避免各个实验区域间交叉污染的可能性，宜采用全送全排的气流组织形式。
同时，要严格控制送、排风的比例以保证各实验区的压力要求。
3.1试剂贮存和准备区
该实验区主要进行的操作为贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。
试剂和用于标本制作的材料应直接运送至该区，不
得经过其他区域。
试剂原材料必须贮存在本区内，并在本区内制备成所需的贮存试剂。
对与气流压力的控制，本区并没有严格的要求。
3.2标本制备区
该区域主要进行的操作为临床标本的保存、核酸（RNA、DNA）提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定RNA时cDNA的合成。
本区的压力梯度要求为：
相对于邻近区域为正压，以避免从邻近
区进入本区的气溶胶污染。
另外，由于在加样操作中可能会发生气溶胶所致的污染，所以应避免在本区内不必要的走动。
3.3扩增反应混合物配制和扩增区
该区域主要进行的操作为DNA或cDNA扩增。
此外，已制备的DNA模板和合成的cDNA（来自样本制备区）的加入和主反应混合液（来自试剂贮存和制备区）制备成反应混合液等也可在本区内进行。
在巢式PCR测定中，通常在第一轮扩增后必须打开反应管，因此巢式扩增有较高的污染危险性，第二次加样必须在本区内进行。
相对于邻近区域为负压，以避免气溶胶从本区漏出。
为避免气溶胶所致的污染，应尽量减少在本区内的不必要的走动。
个别操作如加样等应在超净台内进行。
3.4扩增产物分析区
该区域主要进行的操作为扩增片段的测定。
如使用全自动封闭分析仪器检测，此区域可不设。
本区是最主要的扩增产物污染来源，因此对本区的压力梯度的要求为：
相对于邻近区域为负压，以避免扩增产物从本区扩散至其它区域。
PCR实验室设计的核心问题是如何避免污染。
在实际工作中，常见的有以下几种污染类型：
扩增产物的污染；
天然基因组DNA的污
染；
试剂的污染以及标本间的污染。
由于一旦发生污染，实验就必须停止，直到找到污染源为止，而且实验结果必须作废，需重新进行实验。
所以发生污染后再围绕实验室来寻找污染源不但耗时而且繁琐，浪费人力物力。
因此要避免污染，首先应是预防，而不是排除。
4.1工作区域的严格划分
（1）各个实验区域设置合理；
（2）各个实验区域要有明显的标记（如醒目的门牌或不同的地面颜色等），以避免各个不同实验区域设备物品、试剂等发生混淆。
4.2合理的系统设置
（1）合理的空调通风系统设置，尽量采用全送全排的空调系统；
（2）严格的气流压力控制，保证不同的实验区内不同的压力要求'
4.3规范的操作
（1）临床基因扩增检验实验室的技术人员必须进行上岗培训，经培训合格后才能从事临床基因扩增检验的工作；
（2）在实验操作过程中，操作者必须戴手套，并经常更换。
此外,操作中使用一次性帽子也是一个有效地防止污染的措施；
（3）清洁工作及时、正确。
实验工作结束后，必须立即对本区进
行清洁。
除常规的消毒液体对表面进行擦拭消毒或紫外线灯的照射消
毒外，对一些实验设备还应进行高压消毒处理
4.4严格的管理
（1）严格控制进出实验室的人员。
与实验无关的人员不得随意进出实验室，有条件的情况下要设置独立的通道和进出整个实验区的门；
（2）在各个实验区域使用带有明显区别标志的工作服（如不同颜色），当工作人员离开时不得将本区的工作服带至其它区域；
（3）尽量减少在实验区内不必要的走动以减少交叉污染的可能性。
（4）扩增产物分析区是最主要的扩增产物污染来源，废液不能在
实验室中倾倒，必须经消毒液浸泡消毒后在远离实验室的地方弃掉，用过的吸头等一次性材料也应经消毒液浸泡消毒后统一处理，如焚烧
等；
（5）扩增产物分析区可能会用到某些可致基因突变和有毒物质，应特别注意实验人员的安全防护。
4.5完备的实验室配套设施
完备的实验室配套设施是保证实验工作的必要条件，应根据各个
实验室实验内容的不同配备相应的设备和仪器，如超净工作台、离心
机、加样器等
一、围护结构
序号
材料名称
型号规格
单位
数量
单价
总价
1
彩钢板隔断
板厚0.5mm，120KG
m2
300
2
U型铝型材
根
50
3
阴角圆弧铝
80
4
阴角圆弧铝底座
5
阴角铝三通
个
6
阳角圆弧铝
7
阳角铝三通
14
8
门料
铝合金，双密封
22
9
窗料
铝合金
10
入孔料
11
门堵
对
20
12
门锁
净化门专用
把
13
门合页
不锈钢
30
门密封条
米
130
15
观察窗玻璃
6mm
16
五金耗材
二通风部分
加压送风机箱
初中效段、混合段、加压段
套
回风机箱
加压排风
通风管（送风）
400x500
m
300x400
250x320
200x200
200x220
通风管（排风）
M
通风管（回风）
橡塑保温板
15mm厚
卷
橡塑保温板胶
KG
软接头
工业帆布
防水百叶
400x400
回风百叶
350x500
17
回风风量调节阀1
18
回风风量调节阀2
19
送风风量调节阀
21
压差表
-60~+60
23
三、电器部分
配电箱
10回路
净化日光灯
2x36W
杀菌灯
1x36W
双联单控开关
16A
五孔插座
BV导线线
6m2
4m2
2.5m
600
穿线管
90
穿线盒
40
烘手机
四、净化设备
加压送风机
4300—6820m3
台
排风风机
1568—3010m3
空调机组
制冷量7.5KW5p
组
送风静音箱
GFK630
GFK610
GFK484
GFK320
咼效过滤器
630x630
610x610
484x484
320x320
散流罩
736x736
716x716
588x588
448x448
初效过滤器
2500m3
中效过滤器
2200m3
传递窗
500x500x500
项
五、地面部分
PVC地板
2mm
水泥自流平
专用自流平
界面剂底层
1mm
PVC地板胶
专用胶水
六、配套设施
不锈钢操作台
2000x700x800
不锈钢水槽
感应水龙头
跟衣柜
小计六
运输费
上下水改造
税金
万级负压
分析区
扩增区
生物安全柜
I
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