完整word版植物生物技术考试重点Word格式文档下载.docx
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仅能满足微生物野生型菌株生长需要的培养基
4、什么是转基因沉默?
5、什么是逆转录酶?
6、植物组织培养?
将植物的离体器官(如根、茎、叶、花、果实、种子等)、组织(如花药、胚珠、形成层、皮层、胚乳等)、细胞(如体细胞、生殖细胞花粉等)以及去除细胞壁的原生质体,甚至幼小的植株,在人工控制的无菌环境下,应用人工培养基创造适宜的培养条件,使其生长、分化并成长为完整植株的过程。
也称为离体培养或试管培养。
7、愈伤组织的形成的过程?
8、愈伤组织的定义和特点?
愈伤组织(Callus):
离体的植物器官、组织或细胞,在培养一段时间以后,通过细胞分裂,形成一种高度液泡化、无定形状态、由薄壁细胞组成的排列疏松的组织。
细胞分裂快,结构疏松,颜色浅而透明
9、阐述外植体的成苗途径。
10、植物组织培养常用的培养基及各自的特点?
据其营养水平分:
基本培养基、完全培养基
据其态相分:
固体培养基、液体培养基
据其作用分:
诱导培养基、增殖培养基、生根培养基
据培养物的培养过程分:
初代培养基、继代培养基
组织培养中常用的培养基主要有:
MS、White、N6、B5、Heller、Nitsch、Miller、KM-8P
培养基种类
固体培养基:
加凝固剂(多为琼脂)的培养基;
液体培养基:
不加凝固剂的培养基。
初代培养基:
用来第一次接种从植物体上分离下来的外植体的培养基。
继代培养基:
用来接种继初代培养之后的培养物的培养基。
基本培养基:
只含有机和无机成分,但不包括糖、激素和复杂有机添加物等。
完全培养基:
基本培养基的基础上,根据试验的不同需要,附加一些物质,如植物生长调节物质和其它复杂有机附加物等。
2、培养基的特点
MS培养基--大量元素。
特点:
无机盐的浓度高,具有高含量的氮、钾,尤其硝酸盐的用量很大,同时还含有一定数量的铵盐,这使得它营养丰富,不需要添加更多的有机附加物,就能满足植物组织对矿质营养的要求,有加速愈伤组织和培养物生长的作用,当培养物久不转移时仍可维持其生存。
White(WH)培养基。
无机盐浓度较低。
它的使用也很广泛,无论是生根培养还是胚胎培养或一般组织培养都有很好的效果。
N6培养基。
KNO3和(NH4)2SO4含量高,不含钼。
目前在国内已广泛应用于小麦、水稻及其他植物的花粉和花药培养和组织培养。
B5培养基。
含有较低的铵盐,较高的硝酸盐和盐酸硫胺素。
铵盐可能对不少培养物的生长有抑制作用,但它适合于有些植物如双子叶植物特别是木本植物的生长。
KM-8P培养基。
特点是有机成分较复杂,它包括了几乎所有的单糖和维生素、呼吸代谢中的主要有机酸。
主要用于原生质体培养。
固体培养基和液体培养基:
使用简便,一般用于组织、愈伤组织、短枝、茎尖等材料的培养。
特别适合植物的快速繁殖。
缺点:
一块外植体只能部分接触培养基,不能浸没在培养基中,结果培养物上下部因接受养分不匀而形成差异,不易使细胞群体保持一致。
液体培养基(不加琼脂):
提供比较均匀的营养,而且细胞的增殖速度快,一般用于细胞,原生质体的培养,也可用于愈伤组织的培养,胚状体等材料的继代培养。
11、植物组织培养室需要控制的条件。
温度:
大多数植物组织培养温度在23~27℃之间。
低于15℃时培养,植物组织会表现生长停止,高于35℃时对植物生长不利。
不同植物培养的适温不同。
月季是25~27℃、番茄是28℃。
温度不仅影响植物组织培养育苗的生长速度,也影响其分化增殖以及器官建成等发育进程。
如烟草芽的形成以28℃为最好,在12℃以下,33℃以上形成率皆最低。
光照:
主要表现在光照强度、时间长短、光照质量等。
有的材料培养需要光,有的则不需光;
不同的植物所需的光照强度也不一样。
一般1000-5000Lx/12-16h/天。
湿度:
湿度影响包括培养容器内湿度和环境湿度。
容器内湿度水平主要受培养基水分含量和封口材料的影响。
封口材料直接影响容器内湿度情况。
封闭性差的材料易导致培养基干燥;
封闭性高的封口材料易引起透气性不好。
湿度过低会使培养基丧失大量水分,导致培养基各种成分浓度的改变和渗透压的升高,进而影响组织培养的正常进行。
湿度过高时,易引起棉塞长霉,造成污染。
气体环境:
氧气是组织培养中必需的因素,瓶盖封闭时要考虑通气问题,可用附有滤气膜的封口材料。
通气最好的是棉塞封闭瓶口,但棉塞易使培养基干燥,夏季易引起污染。
固体培养基可加进活性炭来增加通气度,以利于发根。
培养室要经常换气,改善室内的通气状况。
液体振荡培养时,要考虑振荡的次数、振幅等,同时要考虑容器的类型、培养基等。
12、植物组织培养最常用的C源、常用的激素及其作用和浓度?
蔗糖2%~5%作为植物生长发育所需的营养物质和调节培养基中的渗透压
生长素诱导细胞分裂和根的分化
细胞分裂素促进细胞分裂和由愈伤组织形成器官,分化不定芽
赤霉素刺激在培养中形成的不定胚发育成小植株
油菜素内酯促进伸长提高植物內源生长素
乙烯促进RNA和蛋白质合成和使细胞膜透性增加
脱落酸抑制外植体形成体细胞胚状体
13、植物组织培养中培养基配制过程中应注意的环节?
培养基的配制:
准备工作、母液的配置和保存、培养基配置、培养基的灭菌
配制母液时要用蒸馏水或重蒸馏水。
药品应选取等级较高的化学纯或分析纯。
各种药品要充分溶解再依次混合.配制时注意一些离子之间易发生沉淀(如Ca2+和S042-)。
铁盐容易发生沉淀,需单独配制。
培养基的配制注意事项:
1、溶解特征:
大量元素易沉淀;
2、标签(浓度、日期)
3、保存期:
发现沉淀不能用。
培养基的配制步骤:
1、将配制好的母液按顺序排列,
2、列表计算各母液用量
3、先取适量的蒸馏水放入容器,再依次加入母液
4、加入肌醇和蔗糖,定容后调pH
5、加入琼脂,煮开至完全溶解
6、分装到组培容器
7、封口,贴标签
14、植物组织培养的理论依据?
植物细胞全能性
组织培养的生理依据:
激素(植物生长调节剂)调控
15、植物组织培养技术在目前农业生产上的应用?
1育种上的应用:
单倍体育种:
快速纯化个体,缩短育种年限,提高育种效率等作用。
远缘杂交:
克服杂交不亲和性,用于植物的远缘杂交;
体细胞杂交;
胚珠培养。
体细胞变异的应用:
果树苗木等。
单细胞突变体的筛选:
抗性育种。
2种子繁育与生产:
快速繁育:
兰花、香蕉、甘蔗、咖啡等。
获得脱毒植株,提高种性:
病毒可通过维管束传递,茎尖细胞分裂很旺,几乎没有病毒,如土豆。
人工种子:
不受气候影响,苜蓿、芹菜、胡萝卜等。
3植物产品的工厂化生产:
喜树的喜树碱(抗癌),人参皂苷,香料植物的香油精。
4种质资源的保存:
对于难于产生种子,种子不易保存,或珍稀的植物。
番薯的块根保存很难,可以取其茎尖进行组织培养,进行保存。
16、简述植物组织无菌培养的一般步骤?
外植体表面消毒:
将外植体置于有螺丝盖的玻璃瓶中,注入含有几滴活化剂的浓度适当的消毒液,使材料完全浸没在消毒液中,盖上盖,把玻璃瓶置入超净工作台。
消毒期间摇动2-3次,使消毒液充分接触植物组织。
消毒处理后,打开瓶盖,倒出消毒液,注入适量的无菌蒸馏水,再盖上盖,摇动数次,将水倒掉如此重复3~4次。
将材料取出,置于一个已经灭菌的培养皿中。
器械消毒:
将所要使用的器械(如解剖刀、镊子、剪刀等)置入95%乙醇中,取出后于酒精灯火焰上灼烧,待冷却后即可使用。
所有操作器械需使用一次,消毒一次。
用这些消过毒的将已经过表面消毒的材料切取或剥取适当的外植体。
o将培养容器的盖或塞子打开,将外植体接种到培养基上,如果使用的是玻璃培养容器,把瓶口置酒精灯火馅上烘烤数秒钟,然后迅速用瓶盖或瓶塞封严。
17、与整体植物相比,植物离体组织有哪些特点?
整体植物不同的器官具有明显的分工,只要有水和无机盐就可以完成整个生命过程。
离体组织与植株没有了物质、能量和信息的交流,从而:
1、生长发育不受植株的控制,可以脱离原来的发育路线;
2、得不到生长发育所需要的培养,从自养变成异样。
3、所需要的营养与活体组织所需要的营养具有很大的差别。
能量来源(碳源);
有机成分、激素等。
18、简述激素在植物组织离体培养过程中的作用?
19、常用的PCR技术有哪些?
20、PCR反应的条件?
21、PCR反应中关键的试剂有哪些?
22、什么是离体授粉?
23、柯斯质粒?
24、载体的种类以及载体应具备的特性?
25、质粒载体构建的基本原则,以及质粒载体的一般生物学特性?
26、噬菌体的特征?
什么是溶菌周期,什么是溶源周期?
27、同源基因的共抑制效应?
28、基因克隆操作中常用的工具酶种类?
29、基因克隆的本质以及基因克隆主要包括哪些内容?
30、简述植物基因组文库构建的一般步骤以及构建原则?
31、什么是转基因育种?
转基因育种有哪些特点?
32、理想的植物受体系统应符合的条件
33、根据你的理解详细说明农杆菌介导的转基因技术(包括土壤农杆菌Ti质粒转化系统和发根农杆菌Ri质粒转化系统)有哪些优点?
34、以水稻为例详细介绍农杆菌介导的转基因技术的具体操过程?
35、外源基因整合到植物染色体上的主要的分子鉴定方法?
36、转基因检测可以从哪些方面进行检测,具体的检测原理是什么?
植物基因工程理论上的三大发现:
DNA为遗传信息的携带者。
DNA的双螺旋模型和半保留不不连续复制机制。
中心法则和操纵子模型。
植物基因工程技术上的三大发明:
DNA体外切割与连接技术。
基因工程载体的使用。
DNA分析技术:
电泳、测序、杂交技术。
基因工程的定义:
用人工的方法,从不同生物中提取外源基因及载体DNA,经过体外切割、拼接和重组,然后采取某种方法,把重组后的带有外源基因的载体DNA引入植物细胞,并使其在植物细胞内进行复制和表达,以达到预期改变受体植物细胞遗传特性的目的。
它的核心是重组DNA技术。
也称:
遗传工程,基因操作,基因克隆,分子克隆。
基因工程的生产应用:
克服远缘杂交(有性杂交)的困难。
1、使基因在动物、植物,微生物不同生物系统中传递。
2、快速、定向的获取人类所需要的生物新类型。
细胞工程的定义:
利用细胞培养、细胞融合等细胞生物学方法对细胞进行改造,使细胞按人类需要生产有用的产品,或者遗传物质,从而培育新的生物类型。
包括:
细胞杂交技术、单克隆抗体、细胞