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100kg
7.3
200kg
6.9
6.8
搅拌时间
2h
3h
1h
冻融次数和离心时温度
2次
20℃
15℃
3次
4次
冷冻速度
4℃/h
5℃/h
6℃/h
冷冻恢复温度至
18℃
硫酸铵加入质量
400g
4000g
8000g
沉降时间
6h
7h
8h
去离子水
质量
900g
65kg
800g
1100g
透析袋分子截流量
12kd
12ku
透析时间
12h
10h
11h
含量
58%
63%
55%
56%
7螺旋藻
一种螺旋藻蛋白及其提取方法
2.提取方法：
螺旋藻粉悬浊液反复冻融并机械破碎得螺旋藻细胞破碎液→用30%和50%硫酸铵分级盐析沉淀细胞破碎液得藻蓝蛋白粗提液1→加入PEG20000和NaCl沉淀出藻蓝蛋白粗提物→用磷酸盐缓冲液溶解粗提物得藻蓝蛋白粗提液2→粗提液2用PEG20000/Na2SO4双水系萃取，下相经透析除盐可得藻蓝蛋白精提液，冷冻干燥的藻蓝蛋白成品
3.规模：
步骤
特征
步骤1
螺旋藻悬浊液比例：
螺旋藻粉：
盐酸缓冲液=0.04g-0.05g：
1ml（0.01mol/L，pH：
7）
步骤2
冻融破碎三次：
4-10℃静置4-8h后-15--25℃冰冻，冰块绞碎，再次以以上温度反复冻融破碎直至三次，离心转速：
6000-9000rpm，时间20-30min
步骤3
硫酸铵分级沉析：
硫酸铵溶解至破碎液之30%饱和度，4-10℃静置12-15h，9000-12000rpm离心20-30min取上清，再加入硫酸铵之50%饱和度，4-10℃静置12-15h，9000-12000rpm离心20-30min取沉淀
步骤4
PEG20000-NaCl组分：
20%（w/v）PEG20000和0.8mol/L，4-10℃静置12-15h，离心速：
9000-12000rmp时间：
20-30min
步骤5
PEG20000/Na2SO4双水相体系：
10.5%（w/w）PEG20000，5.9%（w/w）Na2SO4和0.2mol/L，分配平衡1-2h，5000-7000rpm离心20-30min分相
步骤6
透析除盐：
将下相溶液置于透析袋透析30-40h，换5-7次透析袋
成品特征
羟自由基半清除率IC50=0.19mg/ml，DPPH半清除率IC50=0.296mg/ml，荧光强度与计量成比例，650nm有最大荧光发射峰
11节旋藻
一种节旋藻蛋白的分离纯化方法
藻粉1kg在PBS中充分浸泡，混匀后常温避光放置24-72h离心得上清液→上清液超滤浓缩，浓缩液加入甲壳胺使pH达到6.5-7.2，搅拌→搅拌的混合液离心取上清液，加水进行超滤浓缩，超滤置换钠离子得纯化浓缩液→浓缩液喷雾干燥，得药品级节旋藻蛋白
20升PBS,常温放置：
24h
15升PBS，常温放置：
30升PBS，常温放置：
72h
离心：
离心力20000g，20min
离心力18000g，30min
离心力22000g，20min
甲壳胺含量：
0.29%，pH：
6.9，搅拌20min
0.25%，pH:
6.5，搅拌15min
0.35%，pH:
7.2，搅拌30min
20000g，20min
18000g，30min
22000g，20min
超滤：
加入浓缩液3倍体积的去离子水，再浓缩至原体积
加入浓缩液2倍体积的去离子水，再浓缩至原体积
步骤7
喷雾干燥条件：
进风温度150℃，出风温度：
70℃
90℃
进风温度200℃，出风温度：
产品
藻蓝蛋白纯度大于3.0，藻蓝蛋白含量大于61.5%,别藻蓝蛋白含量小于3%，其他蛋白含量小于2%
22藻类
1.名称:
从藻类中分离制备食用级藻蓝蛋白的方法
低温下超声波辅助提取技术处理藻类10.0g，用蛋白提取缓冲溶液提取藻类蛋白，得粗提液→将粗提液pH调至酸性，静置，离心10min得上清液，调上清液pH至中性（将粗提液pH调至酸性，静置，膜过滤，得滤液）→喷雾干燥，得食用级藻蓝蛋白
用磷酸盐缓冲体系配置pH7.0浓度0.15mol/L缓冲液100ml
用醋酸盐缓冲体系配置pH6.0浓度0.05mol/L缓冲液10ml
用乳酸盐缓冲体系配置pH8.0浓度0.10mol/L缓冲液100ml
200w功率超声破碎5min，时间4s间隔2s
50w功率超声破碎30min，时间4s间隔2s
100w功率超声破碎20min，时间4s间隔2s
5℃低温离心
4℃低温离心
6℃低温离心
食用级磷酸溶液调pH至3.5-4.5，静置1h高速离心10min得上清液，沉淀加入1/4上清液体积的缓冲液离心后得上清液，与原上清液合并
食用级柠檬酸溶液调pH至5.5-6.0，静置1h，上清液用膜孔径0.45µ
m滤膜过滤
食用级HCl溶液调pH至4.5-5.5，静置1.5h高速离心10min得上清液，沉淀加入缓冲溶液充分溶解，再次离心得上清液，与原上清液合并，调至中性
干燥粉藻蓝蛋白纯度A620/A280>
0.70，回收率大于45%
43螺旋藻
一种食用级藻蓝蛋白及其制备方法
螺旋藻粉破壁→加入弱酸盐缓冲液浸提→将浸提液固液分离，得上清液→过滤上清液，得粗提液→纯化粗提液，得浓缩液→浓缩液喷雾干燥，得食用级藻蓝蛋白
藻粉：
5公斤，4℃等量磷酸盐缓冲液，湿混时间3min，16目尼龙网摇摆颗粒机，研磨温度小于4℃
10公斤，4℃等量磷酸盐缓冲液，湿混时间3min，16目尼龙网摇摆颗粒机研磨，温度小于4℃
15公斤，4℃等量磷酸盐缓冲液，湿混时间3min，5目尼龙网摇摆颗粒机，研磨温度小于4℃
25升0.01-0.05M，pH6.0-7.0磷酸缓冲液，冷柜浸提8h以上
50升0.01-0.05M，pH6.0-7.0磷酸缓冲液，冷柜浸提8h以上
75升0.01-0.05M，pH6.0-7.0磷酸缓冲液，冷柜浸提8h以上
5000转/min卧式离心，8000转/min管式离心
8000转/min卧式离心，12000转/min管式离心
6000转/min卧式离心，10000转/min管式离心
200目袋式过滤，0.22微米平板过滤
500目袋式过滤，0.45微米平板过滤
截留分子量300KD、100KD中空纤维超滤器，压力0.1Mpa，流量：
20升/h
截留分子量200KD、50KD中空纤维超滤器，压力0.1Mpa，流量：
截留分子量300KD、100KD中空纤维超滤器，压力0.02Mpa，流量：
喷雾干燥机进风温度220℃，出风温度：
喷雾干燥机进风温度180℃，出风温度：
60℃
纯度大于1.0，食品级，藻蓝蛋白>
50%,别藻蓝蛋白>
10%,藻红蛋白>
2%,其他蛋白﹤2%
54紫菜
一种紫菜中食用级藻胆蛋白的制备方法
紫菜磨碎至粉末（颗粒大小3-5mm）,加入缓冲液,再加入纤维素酶和果胶酶酶解→间断均质5-10min,离心取上清液→加入硫酸铵,保留25%-60%硫酸铵饱和度之间的盐析物→盐析物用超滤脱盐,离心去藻胆蛋白变形物，冷冻干燥得藻胆蛋白（藻红蛋白和藻胆蛋白）
紫菜50g,固液比=1:
20,pH6.8
紫菜500g,固液比=1:
15,pH7.0
间断均质5min，4℃静置过夜。
4℃，8000rpm，中速，15min，取上清液
间断均质20min，4℃静置过夜。
4℃，10000rpm，中速，10min，取上清液
加硫酸铵至饱和度25%，离心：
10000rpm，中速，15min，得上清液再加硫酸铵至饱和度60%，离心：
12000rpm，中速，15min取沉淀
12000rpm，中速，18min，得上清液再加硫酸铵至饱和度60%，离心：
15000rpm，中速，15min取沉淀
超滤膜分子截留量14000
71螺旋藻
一种藻胆蛋白提取物的制备和应用
螺旋藻粉在-20℃-4℃用反复冻融法破碎螺旋藻细胞壁得粗提物，离心取上清→用质量分数50-60%硫酸铵沉淀粗提液得蛋白质粗提物→采用双水向萃取纯化蛋白质粗提物，后超渗除盐，得藻蓝蛋白提取物溶液→将其对S180肉瘤小鼠进行不同剂量给药
10g藻粉，150ml水搅拌，9000rpm离心10min
加入约44g硫酸铵，4℃静置4h，9000rpm离心10min得沉淀
30ml纯水溶解，1.2kg双水相体系（4%PEG，15%KCl，10%pH7.0磷酸二氢钾-磷酸氢二钾水溶液），充分振荡后40℃静置2h取上相。
用30KDa的滤膜
证明有良好的肿瘤抑制效果，并且对脾脏和胸腺没有明显的毒性。
74螺旋藻
一种重金属污染螺旋藻的处理方法
用反复冻融、超声破碎等传统方法获受污螺旋藻藻蓝蛋白粗提液（上清液），用改进硫酸铵分级盐析技术和离子交换层析柱纯化获高纯度藻蓝蛋白→用海藻酸钠固化破壁后剩余藻渣与粉碎花生壳（100：
1）混合物，获螺旋藻渣生物吸附剂，用于污染水体的清洁处理
10000g离心30min，上清用20%硫酸铵固体盐析沉淀，搅拌30min，10000g离心10min，上清加硫酸钠固体大50%饱和度，搅拌10min静置2h，10000g离心10min，沉淀用0.1M冰醋酸溶液pH4.8溶解，体积不超200ml，离心10000g，10min上清脱盐，用0.001M硫酸铵缓冲液稀释到100ml，加硫酸铵之饱和度25%，缓慢搅拌30min，10000g离心10min，上清加硫酸铵至饱和度40%，静置2h，10000g离心10min，沉淀用不超20ml（0.001M，pH7.0）溶解后快速脱盐，磷酸缓冲液预平衡，从0-0.25M的NaCl洗
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