防治寄生虫疟原虫的论文共2篇Word文档格式.docx

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疟疾发病案例由2005年亿人次降到2009年亿人次；

死亡人数由2000年万例降到2009年的万例，其中非洲地区死亡人数虽然大幅下降，但是目前疟疾仍然是世界六大热带病和我国五大寄生虫病之一，是威胁人类健康的主要疾病，给疫区带来沉重的经济负担，阻碍社会的发展。

由于恶性疟发病凶险，愈后差，其病死率可高达50%，并且恶性疟原虫对多种抗疟药已存在耐药性，因此恶性疟已经成为一个严重的公共卫生问题。

　　自上世纪60年代以来，全球范围内恶性疟原虫对主要抗疟药物氯喹产生了抗药性，疟原虫的抗药性由单一性向多药抗性发展。

恶性疟原虫抗药株的不断出现已成为重大的公共卫生问题，给疟疾防治工作带来新的挑战，疟原虫抗药性研究迫在眉睫。

鉴于全球恶性疟原虫对传统的氯喹、乙胺嘧啶、甲氟喹等已产生耐药，由于具有抗药性疟原虫会很快遍布所有恶性疟流行地区，抗药强度会不断增加，原虫产生抗药性的速度远比新药研发的进度快得多，从保护青蒿素及其衍生物的角度考虑，世界卫生组织建议各国在青蒿素及其衍生物的基础上联合其他药物（ACTs）来治疗恶性疟，以延缓疟原虫对青蒿素和其他药物抗药性的产生。

　　1青蒿素类药物抗药性的现状

　　青蒿素及其衍生物是一类全新结构的抗疟药，自其问世以来即以高效、速效、低毒的抗疟活性得到世界公认，对氯喹耐药的恶性疟依然有效。

现在多重抗药的恶性疟原虫株已在东南亚和南美洲等地广泛流行，虽然疟原虫已对多种药物产生了抗药性，青蒿素类药物仍能够在几天内治愈超过90%的疟疾患者，目前被全世界公认为是一种很有效的抗疟新药，但是目前已有很多的研究提示青蒿素类药物的敏感性正逐渐下降，抗药性的产生是难以避免的。

世界卫生组织曾经警告说，如果失去了ACTs，人们将再也没有一个治疗疟疾的办法，或许至少要用十年的时间才能发现一种新的抗疟药。

　　迄今为止，还没有文献报道恶性疟原虫对青蒿素类药物出现普遍的耐药性，但有报道称用青蒿素类药物治疗病人时已经出现了敏感性下降，寄生虫清除时间出现延迟和几周后再燃等情况。

最近在柬埔寨西部的Pailin和泰国WangPha同时做了—项治疗无并发症的恶性疟患者的研究，分为青蒿琥酯单药组和青蒿琥酯联用甲氟喹组两组，单药治疗组青蒿琥酯的剂量为2mg/kg，d共7d，联用组青蒿琥酯4mg/kg，d共3d，以后给甲氟喹25mg/kg，分两次给药。

在柬埔寨的Pailin寄生虫清除时间为84h，泰国WangPha，为48h，在过去几十年的经验表明青蒿素类的药物可在两天时间内迅速清除血液寄生虫。

排除了再次感染，在两地单用青蒿琥酯治疗组几周内分别有30%和10%的患者出现了症状复发的情况，而联合治疗组分别有10%和5%的病人再燃。

Pailin和WangPha真正的失败率可能分别高达%和%。

2004年柬埔寨第1次报告用青蒿素治疗恶性疟出现耐药以来，许多在泰国一缅甸边境上出现的“新感染疟疾”病例，实际上很可能是再燃。

在缅甸南部还有另一项研究对青蒿琥酯治疗无并发症疟疾患者，治疗72h后进行寄生虫清除半衰期的分析，表明72h后有%仍可检测出原虫。

这是第一次报告青蒿素耐药性起源在缅甸境内，这些研究提供的证据表明在缅甸的恶性疟原虫很可能对青蒿素敏感性降低。

在泰国边境，甲氟喹，青蒿琥酯在体内的疗效逐步下降，有研究报告用青蒿琥酯治疗恶性疟病人，治疗第3d患者的外周血疟原虫阳性率2011年达到28%，而2000年同样用青蒿琥酯治疗病人，3d后患者外周血疟原虫阳性率为0%。

恶性疟原虫于青蒿素类药物治疗3d后血液中仍然可以观察到较多寄生虫，这就是“延迟疟原虫转阴时间”。

还有研究表明，经过在泰国青蒿素治疗后第2d、第3d可见疟原虫的比例约30%和15%，第28d有2%可见疟原虫。

柬埔寨西部的Pailin，患者经青蒿琥酯单药治疗或甲氟喹，青蒿琥酯治疗2d后外周血涂片见寄生虫的比例高达73%，治疗3d后患者外周血涂片见到疟原虫的比例为55%。

疟原虫清除时间延长在越南也有报道，但相关研究仍在继续，有待于进一步监测及证实。

　　恶性疟原虫对青蒿素类药物出现敏感性降低的现象在亚洲比较突出，而在非洲则不同。

在西非马里共和国（R6publiqueduMali）的研究指出，在这项青蒿素耐药性的研究患者外周血中疟原虫转阴时间的中位数为32h，远低于柬埔寨西部报告时间。

可能的原因为马里2004年以后才广泛使用青蒿素类药物，而柬埔寨使用这类药物超过30年，在马里疟疾病人得到青蒿素及衍生物治疗的比例远低于柬埔寨西部，另外马里大量恶性疟疾病例主要为输入性病例，病人不会自行用药，这些因素可能使得马里的疟原虫未对青蒿素类药物长沙耐药。

　　2009年杨恒林等采用WHO推荐的体外微量法做了缅甸拉咱地区恶性疟原虫对青蒿琥酯等7种药物体外半数抑制量（ID5。

）测定，发现缅甸拉咱地区恶性疟原虫对青蒿琥酯的ID5。

为/L比1993年作者在该地区做的IC50上升倍，提示青蒿琥酯对恶性的敏感性呈下降趋势。

另一项研究用双氢青蒿素脉喹片（每片含双氢青蒿素40mg，磷酸脉喹320mg）2d4次疗法治疗缅甸拉咱市恶性疟原虫感染阳性者91例，64例全程随访者中，尚有4例（%）于服药后第3d外周血中疟原虫未转阴，但因这4例病人腋温小于°

C仍判为临床治疗有效，这4例患者服药后随访外周血无性体原虫转阴时间为，比研究者在云南观察的最长无性体原虫转阴时间（63h）长，这可能与当地恶性疟原虫对脉喹和青蒿素类敏感性下降有关，推测当地部分恶性疟原虫可能对双氢青蒿素脉喹片敏感性下降。

　　2青蒿素类药物抗药性可能的机理

　　耐多种抗疟药的恶性疟原虫是全球疟疾控制的—个主要障碍。

虽然青蒿素类药物抗性关联基因研究被人们进行很多探索，但是到现在为止仍然没有明确的结论。

恶性疟原虫耐抗疟药乙胺嘧啶、磺胺、氯陆与特定的汐外和一P/cri基因突变相关。

然而，有相当大的争议为新兴突变的耐青蒿素类抗疟药衍生药物标记。

一些观察表明青蒿素抑制恶性疟原虫胞浆网织钙依赖性ATP酶（sarco/endoplasmiccalcium-dependentATPase6，P/AT-，有资料表明，青蒿素类药物可以抑制在非洲爪蟾卵细胞内表达P/a的酶活性，如果在该酶的第三跨膜区引入L263E这一突变，则解除了青蒿素类药物对该酶的抑制。

jamb〇u等，报道了位于沿巴西北部边境的圭亚那从恶性疟患者体内分离出的虫株对蒿甲醚的IC5D值有所升高，通过测序，他们发现P一/a的第769位的丝氨酸突变为天冬酰胺，提示P一/a基因的突变可能会使疟原虫对青蒿素的敏感性降低。

虽然这种突变的意义还未确定，这些观察可能表明S769N突变可能是一个药物抗性标记。

值得注意的是，大部分的P/a突变是具有地域局限的。

现仍需要进一步的研究，找出能够可靠预测的青蒿素耐药性的分子标记。

目前，对这个观点持否定态度的有所增加。

　　2010年美国的一个学者提出，ACT（artemisi-nincombinationtherapy）疗效的下降，和P/TO影响恶性寄生虫疟原虫红内期连续培养的因素

　　体外培养疟原虫的工作始于本世纪初。

最早从事这项工作的是Bass和Johns，1912年他们报道了在加有葡萄糖的全血内观察到恶性疟原虫可以从环状体发育到裂殖体。

接着人们试图建立疟原虫红内期的连续培养，但一直到60年后，这一努力才获得成功。

两个独立的研究组分别报道了恶性疟原虫在体外连续培养成功，其中特别是Trager和Jen?

sen的方法对于人疟的研究有着划时代的意义，使各国科学工作者有机会从事临床上最重要的疟原虫的研究工作，同时也为研究疟疾的生物化学、寄生虫学、免疫学和化学治疗奠定了基础。

　　虽然在60年代已能进行鸟疟的红外期的连续培养，但晡乳动物红外期培养一直到1981年才获得成功》对伯氏疟方面的这些研究目前也已应用于人类间日疟原虫的红外期培养，疟原虫孢子增殖各期均能在体外发育，成熟的有感染性的配子体也可从体外培养得到。

但完整的连续的孢子增殖阶段的体外培养至今尚未成功，红内期无性体的体外培养。

　　一、体外培养疟原虫

　　红内期的研究在1976年前仅限于人和一些动物疟原虫的短期保存，尚不能连续培养。

早期的探索虽然应用的原则如稀释和连续流灌等方法和以后成功的方法相似，伹有很多不同。

　　Trager和Jensen认为下述条件为恶性疟原虫培养成功所必需，一个人红细胞薄层（例如，10%红细胞悬浮液1ml置于?

面积内所形成的薄层），一层3mm厚的RP-MI-1640培养液（每升培养液内含100mJ与红细胞相应的血清），2～5%，和5～10%的混合气体，间断或缓慢连续地更新培养液及随疟原虫率的增加补充新鲜正常红细胞。

　　这些条件可以由许多途径来获得，最简单的是用Petri培养皿在蜡烛缸内培养。

但使用这一方法每天至少要人工换液1次，原虫率超过5%时甚至需要多次。

Osisanya等指出如果培养液内葡萄糖浓度增加1倍，混合气体比例为5%CO，和5%0，，使用TES缓冲液，则换液次数可以减少?

Trager的连续流灌培养法可以获得连续的较稳定的原虫率。

这种方法使培养液在固定的红细胞薄层上流动，培养液贮存瓶一周换一次即可。

目前已进一步改进设计出一些复杂程度不等的半自动设备，这些培养系统内PH值可以恒定，并可以自动清除废物及提供新鲜培养液。

　　悬浮培养法连续培养可以提高原虫率，相应减少劳力。

Butcher和Zoly等声称用悬浮培养法获得的最终原虫率比静止法髙。

他们认为这是由于悬浮法培养时红细胞重复感染减少及原虫感gle或Hanks盐溶液的199培养液进行了比较，发现对于培养恶性疟原虫来说RPMI164比两种199培养液好，与Ham氏F-12液的效果相等。

　　疟原虫体外培养时PH值保持在~间很重要。

恶性疟原虫培养的成功需要有一恒定的pH环境，这一pH值是疟原虫代谢产生大量乳酸所引起的整个和局部PH改变的总和。

两个成功培养例子中，采用的疟原虫密度都较低，只有早先不成功的1/4-1/2，这就明显减少了培养时的乳酸盐产物。

此外，使用了一种两性离子缓冲液HEPES，可以对CO，/NaHCO，缓冲系起辅助作用。

HEPES和TES都是良好的缓冲剂，因为在37°

C时它们的Pk，分别为和，与疟原虫生长的最适PH十分接近。

两性离子缓冲剂还有一个优点，即在疟原虫生长需要较高，浓度环境下可以保持培养物的PH值稳定。

　　三、气体相

　　气体相的组成对于疟原虫的发育也是一个关键。

2-5匁CO，浓度对连续培养中疟原虫生长无显着影响，但浓度过髙对培养有抑制作用。

这可能是直接影响了正常PH范围的维持，因为RPMI1640培养液内有一组CO，/NaHCO，缓冲系。

其他哺乳动物疟原虫在代谢过程中有结合，现象，所以恶性疟原虫也可能利用CO，进行代谢。

　　5～10%，浓度适合于疟原虫连续培养，但高浓度的氧（相当于空气中的氧浓度〉却有抑制作用，虽然这种作用有时需要几天后才能观察到。

氧对于疟原虫代谢的作用还不清楚，似乎低氧张力有利于培养过程中低氧化还原势的维持。

各种维持低氧化还原势剂对于短期培养的作用是很不相同的。

然而有趣的是Haynes和他的助手所用的改良的199培养液中却含有2种还原剂2-巯基乙醇和维生素E。

但疟原虫在完全无氧环境中连续培养没有成功过。

　　为了使PH值相对恒定及保持低氧化还原势，培养皿内气相与液相间需要有足够的交换。

所以气体在培养