高中生物高三生物二轮复习考案课件配套课时训练12第十二单元3639讲Word文件下载.docx

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EcoRⅠ、PvuⅠ为相应的限制酶切割位点,括号内的数据是该切点与复制原点的距离,单位为kb（1kb＝1000个碱基对长度）。

请回答下列问题。

（1）用图中的目的基因与质粒构建基因表达载体时,应该选择质粒________,选择的限制酶是________。

（2）如果选择的质粒与目的基因重组成功,并且在受体细胞中能正常表达,则所形成的重组质粒用EcoRⅠ完全酶切,并进行电泳观察,可出现的片段长度有________或________。

（3）将基因表达载体导入大肠杆菌时,可将大肠杆菌先用________处理。

导入大肠杆菌后,为了筛选出含目的基因的大肠杆菌,在普通琼脂培养基中还需加入________,形成的菌落颜色为________。

（4）如果要检测导入目的基因的大肠杆菌是否合成相应的蛋白质,可以采用________法。

2.某一质粒载体如图所示,外源DNA插入到Ampr或Tetr中会导致相应的基因失活（Ampr表示氨苄青霉素抗性基因,Tetr表示四环素抗性基因）。

有人将此质粒载体用BamHⅠ酶切后,与用BamHⅠ酶切获得的目的基因混合,加入DNA连接酶进行连接反应,用得到的混合物直接转化大肠杆菌,结果大肠杆菌有的未被转化,有的被转化。

被转化的大肠杆菌有三种,分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌。

回答下列问题。

（1）质粒载体作为基因工程的工具,应具备的基本条件有_____________________________（答出两点即可）。

而作为基因表达载体,除满足上述基本条件外,还需具有启动子和终止子。

（2）如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选,在上述四种大肠杆菌细胞中,未被转化的和仅含有环状目的基因的细胞是不能区分的,其原因是________________________________；

并且____________________和____________________的细胞也是不能区分的,其原因是__________________________。

在上述筛选的基础上,若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落,还需使用含有______________的固体培养基。

（3）基因工程中,某些噬菌体经改造后可以作为载体,其DNA复制所需的原料来自于________________________________________________________________________。

3.赖氨酸是人体八大必需氨基酸之一,能促进人体发育、增强免疫功能,并有提高中枢神经组织功能的作用。

某农科所科技人员欲通过将玉米某种蛋白酶改造成“M酶”,从而大大提高玉米种子中赖氨酸的含量,以期待培育出高赖氨酸玉米新品种。

（1）科技人员先从“提升玉米种子中赖氨酸含量”这一功能出发,预期构建出________的结构,再推测出相对应目的基因的________序列,最终合成出“M酶”基因。

（2）科技人员获得“M酶”基因后,常利用________技术在体外将其大量扩增,此过程需要一种特殊的酶是________________________。

（3）“M酶”基因只有插入_____________________________________________,

才能确保“M酶”基因在玉米细胞中得以稳定遗传。

科技人员将“M酶”基因导入玉米细胞中需要借助________________的运输。

（4）依据________________原理,可将含有“M酶”基因的玉米细胞培育成转“M酶”基因的玉米植株。

为了确保育种成功,科技人员需要通过__________________________,从个体水平加以鉴定。

4.编码蛋白甲的DNA序列（序列甲）由A、B、C、D、E五个片段组成,编码蛋白乙和丙的序列由序列甲的部分片段组成,如图1所示。

（1）现要通过基因工程的方法获得蛋白乙,若在启动子的下游直接接上编码蛋白乙的DNA序列（TTCGCTTCT……CAGGAAGGA）,则所构建的表达载体转入宿主细胞后不能翻译出蛋白乙,原因是__________________________________________________________。

（2）某同学在用PCR技术获取DNA片段B或D的过程中,在PCR反应体系中加入了DNA聚合酶、引物等,还加入了序列甲作为______________________,加入了__________________作为合成DNA的原料。

（3）现通过基因工程方法获得了甲、乙、丙三种蛋白,要鉴定这三种蛋白是否具有刺激T淋巴细胞增殖的作用,某同学做了如下实验：

将一定量的含T淋巴细胞的培养液平均分成四组,其中三组分别加入等量的蛋白甲、乙、丙,另一组作为对照,培养并定期检测T淋巴细胞浓度,结果见图2。

①由图2可知：

当细胞浓度达到a时,添加蛋白乙的培养液中T淋巴细胞浓度不再增加,此时若要使T淋巴细胞继续增殖,可采用的方法是______________。

细胞培养过程中,培养箱中通常要维持一定的CO2浓度,CO2的作用是______________。

②仅根据图1、图2可知,上述甲、乙、丙三种蛋白中,若缺少______（填“A”“B”“C”“D”或“E”）片段所编码的肽段,则会降低其刺激T淋巴细胞增殖的效果。

5.（2018江苏南京模拟,33）为研究肝癌致病机理,科研工作者利用下图所示的差异杂交法和基因工程获取相关癌基因以作进一步研究。

请据图回答问题。

（1）图1中,A过程需要用________酶,D过程需要回收____________（填“未杂交”或“杂交分子”）的含32P的cDNA单链,继而通过人工合成,获得__________,并用其构建基因文库。

（2）从图1构建的基因文库中获取的目的基因,一般还需进行人工改造后才能用于基因表达载体的构建,改造内容除了在基因两端添加限制酶的识别序列外,还需添加____________,以便其随载体导入到受体细胞后,能正常调控表达过程。

（3）图2为改造后的目的基因。

图3为两种质粒,其中Ampr为氨苄青霉素抗性基因,Tetr为四环素抗性基因,lacZ为蓝色显色基因,其表达产物可使底物X－Gal呈蓝色。

EcoRⅠ（0.7kb）、NotⅠ（1.2kb）等为限制酶及其切割位点与复制原点之间的距离（1kb＝1000个碱基对）。

①图3中能作为载体的最理想的质粒是________（填“X”或“Y”）,用选定的质粒与图2的目的基因构建基因表达载体时,应选用的限制酶是____________。

为筛选出成功导入目的基因的受体细胞,培养基中应适量添加____________。

②若用EcoRⅠ完全酶切上述①中获得的重组质粒,并进行电泳观察,可出现四种长度不同的片段,其长度分别为1.7kb、5.3kb、____________。

6.多聚半乳糖醛酸酶（PG）能降解果胶使细胞壁破损,成熟的番茄果实中,PG合成显著增加,能使果实变红变软,但不利于保鲜。

利用基因工程减少PG基因的表达,可延长果实保质期。

科学家将PG基因反向接到Ti质粒上,导入番茄细胞中,得到转基因番茄,具体操作流程如图所示。

据图回答下列问题。

（1）提取目的基因

①若已获取PG的mRNA,可通过______获取PG基因。

②在该基因上游加结构A可确保基因的反向转录,结构A上应具有________结合位点。

③重组质粒转移到大肠杆菌中的目的是____________________________________。

（2）用含目的基因的农杆菌感染番茄原生质体后,可用含有________的培养基进行筛选。

培养24～48h后取样,在质量分数为25%的蔗糖溶液中,观察细胞________________现象来鉴别细胞壁是否再生。

（3）由于导入的目的基因能转录出反义RNA,且能与______________互补结合,因此可抑制PG基因的正常表达。

若转基因番茄的保质期比非转基因番茄__________________,则可确定转基因番茄培育成功。

（4）获得的转基因番茄产生的种子不一定保留目的基因,科研人员常采用____________方法使子代保持转基因番茄的优良性状。

第37讲　细胞工程

1.（2019届黑龙江哈尔滨第六中学期中,54）在畜牧生产中,人们利用细胞工程技术取得了显著成绩,请回答以下问题。

（1）克隆高产奶牛：

从供体高产奶牛体内获得体细胞后,对其进行的初次培养称为________；

用于核移植的供体细胞一般选用传代10代以内的细胞,原因是________________；

将供体细胞注入体外培养到________________期的去核卵母细胞内,通过电刺激使两细胞融合,构建重组胚胎,之后将胚胎移入代孕母牛体内,从而获得与________（填“供体奶牛”或“受体奶牛”）遗传物质基本相同的犊牛。

（2）自体移植的供受体为同一个体,最大的优点是________________,但移植器官种类受限。

利用细胞工程技术的治疗性克隆,进行重组细胞培养时除了保证无菌、无毒环境,还需丰富的营养,通常会在培养液中加入________________等天然成分。

（3）生产单克隆抗体的基础技术是______________。

单克隆抗体的优点是________________。

2.植物叶肉细胞原生质体的分离和培养的主要过程可用下面所示图解简单表示：

（1）培育胚状体利用了________________这一项生物技术,胚状体再继续培养,则可培育出完整的植株,这体现了______________________。

培养基中除了含有一定的营养外,还必须含有____________________等植物激素,还需要对培养基进行严格的________________处理。

（2）如果愈伤组织是三七叶肉细胞培养产生的,若为了获得三七的细胞产物,则只需要培养到________________；

若为了获得三七的人工种子,则需要培养到________________。

如果愈伤组织是棉花叶肉细胞培养产生的,通过基因工程要获取抗虫棉,目的基因导入棉花愈伤组织细胞常用的方法是____________________法。

（3）从叶片的叶肉细胞到获得胚状体的过程中,必须要经过________________。

①无丝分裂　②有丝分裂　③减数分裂　④原代培养　⑤传代培养　⑥植物体细胞杂交　⑦细胞融合　⑧脱分化　⑨再分化

3.科学家利用植物体细胞杂交技术成功获得了番茄—马铃薯杂种植株,为了便于杂种细胞的筛选和鉴定,科学家利用红色荧光和绿色荧光分别标记番茄和马铃薯的原生质体膜上的蛋白质,其培育过程如图所示。

（1）植物体细胞杂交依据的生物学原理有__________________________。

（2）过程①常用的酶是_____________________________________,

细胞融合完成的标志是________________。

（3）植物原生质体融合过程常利用化学试剂________诱导融合,在鉴定杂种原生质体时可用显微镜观察,根据细胞膜表面的荧光的不同可观察到________种不同的原生质体,当观察到________________时可判断该原生质体是由番茄原生质