dna粗提取和鉴定教学PPT课件下载推荐.ppt

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,当氯化钠的物质的量浓度为2molL时，DNA的溶解度最大，浓度为014molL时，DNA的溶解度最低。

利用这一原理，可以使DNA在盐溶液中溶解或析出,4、原理

（2）提纯-DNA在酒精溶液中的溶解性DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则可以溶于酒精。

利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步分离,

（2）提纯-DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性,蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响大多数蛋白质不能忍受6080C的高温，而DNA在80C以上才会变性洗涤剂能够瓦解细胞膜，去除脂质和蛋白质,但对DNA没有影响,5、DNA的鉴定

（1）DNA遇二苯胺（沸水浴）会被染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。

（2）甲基绿（蓝绿色）,

（一）实验材料的选取,

（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液,讨论：

为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？

2、植物细胞植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜,实例：

提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的和，进行充分的，过滤后收集研磨液,洗涤剂,食盐,搅拌和研磨,讨论：

如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？

（三）去除滤液中的杂质,为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理,讨论：

此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？

答：

可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质,为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质,（四）DNA的析出与鉴定,1、以血液为实验材料时，每100ml血液中需要加入3g，防止。

2、加入后，动作要，否则容易产生大量的，不利于后续步骤的操作。

加入和用搅拌时，动作要轻缓，以免加剧，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。

3、二苯胺试剂要，否则会影响鉴定的效果。

柠檬酸钠,血液凝固,洗涤剂,轻缓、柔和,泡沫,酒精,玻璃棒,DNA分子的断裂,现配现用,.案例一：

以鸡血为实验材料进行DNA的粗提取,三.实验案例,.鸡血细胞极易吸水胀破，而用动物肝脏细胞作实验材料常常需要匀浆和离心，对设备要求较高，操作繁琐，历时较长。

1.鸡血细胞做实验材料的原因,.鸡血细胞核的DNA含量丰富，材料易得。

2.实验原理,.DNA在NaCl溶液中的溶解度，是随着NaCl的浓度的变化而改变的。

当NaCl的物质的量浓度为0.14molL时,DNA的溶解度最低。

利用这一原理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。

.DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质可以溶于酒精溶液。

利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。

.DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。

3.实验材料和用具：

鸡血细胞液（510ml）；

体积分数为95%的冷酒精溶液（实验前置于冰箱内冷却24h）；

蒸馏水；

质量浓度为0g/ml的柠檬酸钠溶液；

物质量浓度分别为2mol/L和0015mol/L的氯化纳溶液；

二苯胺试剂。

铁架台；

铁环；

镊子；

三角架；

酒精灯；

石棉网；

载玻片；

玻璃棒；

滤纸；

滴管；

量筒（100ml，一个）；

烧杯；

（100ml，一个，50ml、500ml各二个）；

试管（20ml，二个）；

漏斗；

试管夹；

纱布。

5.方法步骤,将制备好的鸡血细胞液5mL10mL，注入到50mL烧杯中。

向烧杯中加入蒸馏水20mL，同时用玻璃棒充分搅拌5min，使血细胞加速破裂。

然后，用放有纱布的漏斗将血细胞液过滤至500mL。

取其滤液。

.提取鸡血细胞的细胞核物质,4.课前准备鸡血细胞液,取质量浓度为01g/ml的柠檬酸纳溶液100ml，置于500ml烧杯中。

注入新鲜的鸡血（约180ml），同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸纳溶液充分混合，以免凝血。

将烧杯中的血液置于冰箱内，静置一天，使血细胞自行沉淀。

（也可以将血液倒入离心管内，用1000r/min（转每分）的离心机离心2min，血细胞沉淀于离心管底部。

实验时。

用吸管除去离心管上部的澄清液，就可以得到鸡血细胞液。

）,.过程,.柠檬酸钠作用,防止血液凝固。

.作用机理,柠檬酸钠能与血浆中的Ca2+发生反应，生成柠檬酸钙络合物，血浆中游离的Ca2+大大减少，血液就不会凝固。

鸡血细胞破碎以后释放出的DNA，容易被玻璃容器吸附，所以在提取过程中为了减少DNA的损失，最好使用塑料的容器盛放鸡血细胞液。

.注意事项,5.方法步骤,将制备好的鸡血细胞液5mL10mL，注入到50mL烧杯中。

.提取鸡血细胞的细胞核物质,讨论：

让细胞内浓度大于周围溶液的浓度，细胞会吸水以至胀破,1.为什么要加入蒸馏水？

加入蒸馏水后细胞会有什么变化？

2.用玻璃棒搅拌有什么意义？

用玻璃棒搅拌可以加速血细胞和细胞核的破裂。

注意应沿一个方向快速搅拌，但也不能太快太猛，防止打碎DNA,3.滤去的是什么物质？

得到的是什么？

过滤将滤去的是细胞膜和核膜等物质；

得到的是与蛋白质等物质结合在一起的DNA,.溶解细胞核内的DNA,将氯化钠的物质的量浓度为2mol的溶40mL加入到滤液中，并用玻璃棒沿一个方向搅拌1min，使其混合均匀，这时DNA在溶液中呈溶解状态。

沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水，同时用玻璃棒不停地轻轻搅拌，这时烧杯中有丝状物出现，注意观察丝状物呈什么颜色。

继续加入蒸馏水，溶液中出现的粘稠物会越来越多。

当粘稠物不再增加时停止加入蒸馏水（这时溶液中氯化钠的物质的量浓度相当于0.14molL）,.析出含DNA的粘稠物,5.方法步骤,将制备好的鸡血细胞液5mL10mL，注入到50mL烧杯中。

当粘稠物不再增加时停止加入蒸馏水（这时溶液中氯化钠的物质的量浓度相当于0.14molL）,.析出含DNA的粘稠物,讨论：

加入蒸馏水的目的？

降低NaCl溶液浓度到使DNA溶解度最低点，使DNA从NaCl溶液中析出,将溶液中的DNA与其他杂质分离，这一步骤是实验成败的关键。

实验中应该缓慢贴壁加入蒸馏水，并轻轻地沿一个方向不停地均匀搅拌，以利于DNA分子的附着和缠绕.,注意事项：

.滤取含DNA的粘稠物,用放有多层纱布的漏斗，过滤步骤3中的溶液至500mL的烧杯中，含DNA的粘稠物被留在纱布上,.将DNA的粘稠物再溶解,取1个50mL烧杯，向烧杯内注入氯化钠的物质的量浓度为2molL的溶液20mL。

用钝头镊子将纱布上的粘稠物夹至氯化钠溶液中，用玻璃择不停地搅拌，使粘稠物尽可能多地溶解于溶液中,.过滤含有DNA的氯化钠溶液,取1个100mL烧杯，用放有两层纱布的漏斗过滤步骤5中的溶液。

取其滤液，DNA溶于滤液中,.提取含杂质较少的DNA,在上述滤过的溶液中，加入冷却的、酒精的体积分数为95的溶液50mL（使用冷却的酒精，对DNA的凝集效果较佳），并用玻璃棒搅拌，溶液中会出现含杂质较少的丝状物。

用玻璃棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。

这种丝状物的主要成分就是DNA,取两支20mL的试管，各加入氯化钠的物质的量浓度为0015molL的溶液5mL，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。

然后，向两支试管中各加入4mlL的二苯胺试剂。

混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min，待试管冷却后，观察并且比较两支试管中溶液颜色的变化,.DNA的鉴定,讨论：

有丝状物的试管变成蓝色，另一试管还是原来颜色。

2.这一鉴定结果说明什么问题？

1.比较两个试管中溶液的颜色有什么不同？

提取出的丝状物是DNA。

3.DNA的直径约为2010-10m，实验中出现的丝状物的粗细是否表示1个DNA分子直径的大小？

DNA分子直径只有2nm。

丝状物是多个DNA子聚在一起形成的。

DNA粗提取,柠檬离下一水滤二钠三水四滤粘五钠六水七酒析八胺沸浴鉴为蓝,DNA析出与鉴定过程中，会出现白色丝状物，用玻璃棒搅拌时为什么要沿一个方向轻轻搅拌DA、为了省力B、加快蛋白质的析出C、为了加大DNA的溶解度D、防止DNA结构被破坏在DNA析出与鉴定过程中加入酒精的目的是CA、溶解DNAB、除去DNA中所有杂质C、析出DNAD、稀释溶液降低浓度,在DNA粗提取过程中，先后两次向烧杯中加入蒸馏水的作用分别是BA稀释血液；

冲洗样品B使血细胞破裂；

降低NaCl浓度使DNA析出C使血细胞破裂；

增大DNA溶解量D使血细胞破裂；

提取含杂质较少的DNA,关于DNA粗提取与鉴定实验的有关说法正确的是BA充分溶解DNA的盐溶液是0.14mol/L的NaCl溶液B实验中提取较纯净的DNA利用了DNA不溶于酒精的特点C对最后提取出DNA用二苯胺试剂鉴定时需用酒精灯直接加热D实验操作过程中先后两次加入蒸馏水的作用相同,关于DNA在NaCl溶液中的溶解度，下面的叙述哪一个是正确的（）DA随着NaCl溶液浓度的增大，DNA在NaCl溶液中的溶解度也增大B随着NaCl溶液浓度的减小，DNA在NaCl溶液中的溶解度也减小CDNA在NaCl溶液中的溶解度与NaCl溶液的浓度无关D当NaCl溶液的浓度为0.14M时，DNA的溶解度最低,下列关于DNA粗提取与鉴定的说法正确的是DA洗涤剂能瓦解细胞膜，同时也能控制DNA在NaCl溶液中的溶解度B在探究洗涤剂对植物细胞DNA提取的影响实验中，需要控制的变量是洗涤剂和植物细胞C常温下，DNA遇二苯胺被染成蓝色D将滤液放在6075的恒温水浴箱中保温1015分钟能去除滤液中的杂质，其原理是利用了DNA和蛋白质对高温耐受性的不同,下列有关“DNA粗提取与鉴定”实验原理的叙述正确的是（B）ADNA在NaCl溶液中的溶解度，随NaCl溶液浓度的降低而减小B利用DNA不溶于酒精的性质，可除去细胞中溶于酒精的物质而得到较纯的DNACDNA是大分子有机物，不溶于水而溶于所有有机溶剂D在沸水中，DNA遇二苯胺会出现紫色反应,下列DNA粗提取的实验操作中，经离心或过滤后取上清液或滤液的有（）A在新鲜鸡血中加入适量的柠檬酸钠，混合均