瘦肉精盐酸克伦特罗的理化性质及其主要危害_精品文档Word文档格式.doc

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不溶于乙醚，加热到172℃才能分解，盐酸克伦特罗的化学结构稳定，在体内不会被破坏分解，能耐受100℃高温，126℃油煎5min才能破坏减半，常规烹调对盐酸克伦特罗残留起不到破坏作用。

1.2盐酸克伦特罗的主要危害

对人的危害：

人食用超过盐酸克伦特罗残留限量的肉及其制品后，会发生急性中毒通常表现为肌肉振颤、心慌、战栗、头疼、恶心、呕吐等症状，特别是原有心律失常的病例会引起心室早搏，ST段与T波幅压低，还可引起代谢紊乱，产生酮体，对糖尿病病人可发生酮中毒或酸中毒，对心律失常、高血压、青光眼、糖尿病、甲状腺功能亢进、前列腺肥大等疾病的患者更容易产生急性中毒症状，严重的可导致死亡，因食用猪肉中残留有盐酸克伦特罗的急性中毒病人，临床症状以交感神经系、统兴奋性增高为主要表现，并在患者血尿中检出较高含量的盐酸克伦特罗。

人食用残留有盐酸克伦特罗的畜产品后表现为肌肉兴奋性增强，有的人中毒后表现为肌肉震颤，重症者腓肠肌痉挛；

同时引起心肌收缩加强，心率加快；

对高血压患者危害更大，盐酸克伦特罗分解脂肪成游离脂肪酸进入血液，使血管壁弹性降低，引起血压升高，微循环血管膨胀，压迫刺激周围的神经，引起头痛头晕；

引起人内脏横纹肌和平滑肌+兴奋性增强，表现为呕吐和腹泻。

盐酸克伦特罗中毒的患者群中，对患心、脑血管疾病、糖尿病、甲状腺机能亢进、青光眼、前列腺肥大者可造成威胁生命的恶果。

孕妇中毒又可导致癌变、胎儿致畸的严重危害性。

对动物的危害:

虽然盐酸克伦特罗的毒性并不很强，小鼠、豚鼠静脉注射的半数致死量分别是每公斤体重27.6mg和12.6mg，但是由于它的半衰期长，在体内代谢慢，极易蓄积残留于动物体内。

在动物肝脏中盐酸克伦特罗平均浓度可达45mg/kg，因而极有可能通过食物链使人体中毒而对健康构成威胁。

盐酸克伦特罗的短期毒性以心肌损伤为主要特征，染毒的小鼠心肌纤维排列紊乱，部分肌纤维断裂，心血管扩张和血管周隙增大。

心肌细胞横纹模糊，颗粒变性等盐酸克伦特罗可使大鼠血清中超氧化物歧化酶（SOD）活力显著降低，丙二醛含量明显升高，破坏机体氧化与抗氧化的动态平衡，并对胸腺和脾脏等免疫器官产生不同程度的病理损伤。

第2章盐酸克伦特罗主要检测方法的研究进展

2.1高效液相色谱法（HPLC）

β-肾上腺素能激动剂分子可与C18或C8固定相分子相互作用，所以反相柱常应用于HPLC技术中检测β-激动剂类物质。

HPLC适合测定热不稳定和强极性的β-激动剂及其代谢产物，而且可以与柱前提取、纯化及柱后荧光衍生化反应和质谱（MS）等系统联用，容易实现分析过程的自动化。

运用反相高效液相色谱法测定猪肝中的盐酸克伦特罗，在243nm的检测波长下，用waters-alliance高效液相色谱系统进行检测[1]，流动相为甲醇和磷酸二氢钠水溶液（35+65），最后再根据保留时间RT值初步定性，扫描光谱进一步确证，根据试样峰高或峰面积与标准峰高或峰面积比较进行定量。

当试样取样量为2.0g时，该法的最低检出浓度为0.25mg/kg。

将样品匀浆后用盐酸溶液超声加热提取，再用异丙醇、乙酸乙醋（40∶60）萃取，有机相浓缩后，用弱阳离子交换柱进行分离用乙醉-氨（98∶2）溶液洗脱，洗脱液以流动相（甲醇和0.01mol/LKCl溶液以45：

55的比例配合）定容后，用美国Agilent1100高效液相色谱仪系列进行检测，检测限达0.5μg/kg。

运用高效液相色谱法测定猪组织中盐酸克伦特罗残留量[2]，采用了DianonsilC18200×

4.6mm的色谱柱，流动相为0.01mol/LNaH2PO4：

甲醇（67∶33），二极管阵列检测器，检测波长为243nm采用外标法，以保留时间定性，并以盐酸克伦特罗的特征紫外吸收光谱对照样品的扫描光谱进行确认，然后根据样品峰面积计算盐酸克伦特罗含量。

还有人先用C18二氧化硅硅胶柱净化，用HPLC分离，再结合HPLC/ELISA检测、确证。

目前，中国已将HPLC法作为检测盐酸克伦特罗残留的半确证性方法，最低检测限范围为1~15ng/g，其优点是检测精确度高，而且假阳性率低；

缺点是检测过程繁琐、检测时间长，需贵重仪器、难于操作、费用昂贵。

近年来，液质联用技术也被用来检测瘦肉精，这种方法的准确度较高，检测灵敏度也高。

2.2气相色谱-质谱法（GC-MS）

GC-MS法能在多种残留物同时存在的情况下对某种特定的残留物进行定性、定量分析，而且具有较高的灵敏度。

用GC-MS法检测牛毛中盐酸克伦特罗的残留[3]，最低检测限为5ng/g。

GC-MS法与HPLC法相比，检测灵敏度更高，假阳性率更低。

GC-MS法的缺点同HPLC相似。

2.3免疫分析法（IA）

免疫分析法都有固定的试剂盒，因此检测结果便于把握。

检测灵敏度高。

检测限可达到0.5ng/ml甚至更低。

而且样品前处理简单或不需要前处理，成本低，一次可以检测数百份饲料样品或十余份肝脏、肉品及尿样等。

有放射免疫分析法（RIA）和酶联免疫吸附测定法（ELISA）。

但此类方法的缺点是仍不能实现现场检测，假阳性率高。

2.3.1酶联免疫分析

目前，检测盐酸克伦特罗较高效的免疫分析技术是酶联免疫吸附测定法（ELISA）[4]。

该方法检测下限一般为1.0μg/L（尿样）、0.5μg/kg（组织）。

使用该法，酶联免疫吸附测定法检测限尿液为0.3～1.0ng/mL，组织为0.2～1.0ng/mg。

国内外有许多检测试剂盒，但质量不一。

酶联免疫吸附测定法作为盐酸克伦特罗残留量的筛选方法具有操作简便、准确、投资小、成本低速度快、灵敏度高、仪器设备简单等优点，适合对活体动物作大批量样品的快速分析；

缺点是仍不能实现现场检测且该法检测结果假阳性率较高，尤其当样品中含有抗生素或磺胺类药物时，会使假阳性率进一步提高。

2.3.2放射免疫分析技术

用于β-2肾上腺素能激动剂的放射免疫测定程序和动物组织中盐酸克伦特罗的药理学研究。

建立更为特异的放射免疫方法，其中抗盐酸克伦特罗的抗体对其他β-2肾上腺素能激动剂的交叉反应小于10%，最低检测限可达到0.5ng/g。

目前国外已生产出测定盐酸克伦特罗的试剂盒产品，还建立了类似放射免疫分析法的放射受体分析法，这是用受体代替抗体结合盐酸克伦特罗，检测限可达到2.4ng/g。

放射免疫分析技术虽然具有特异性强、灵敏度高、操作简便、快速、易标准化、技术成熟等优点。

但仪器价格昂贵和必须使用放射性同位素作为标记物，存在着辐射防护及防止污染的问题，且试剂盒使用时间短，而且每次操作都要做标准曲线，可测量范围相对较窄，难以实现操作及测量的自动化等。

2.3.3滴金免疫技术

原理通过盐酸克伦特罗CL（或莱克多巴胺RAC）与CL-BSA（盐酸克伦特罗-牛血清白蛋白）偶联物（或RAC-BSA）竞争结合抗CL（或RAC单克隆抗体-胶体金复合物，使试纸上反应线颜色变化，以判定样品中C或RAC）的含量。

当检样中CL（或RAC）浓度低于最低检测水平时，胶体金中的抗CL（或RAC）单抗-胶体金复合物与T线上的CL-BSA偶联物（或RAC-BSA）结合，T线呈色与C线相近：

当检样中CL（或RAC）浓度大于5ng/mL时，抗CL（或RAC）单抗-胶体金复合物与CL（或RAC）结合T线显色比C线浅或完全看不到线，且CL（或RAC）浓度越高T线显色越浅从而作出判定。

滴金免疫技术具有简便易行、快速、试剂安全、特异性高、可单份测定、不需要特殊仪器和设备等优点，且金标试剂比酶试剂更稳定，冷冻干燥后可长期保存，便于常规应用。

2.3.4时间分辨荧光免疫分析技术

时间分辨荧光免疫分析技术（TRFIA）是一种新型的超微量的非放射性标记免疫分析技术，它以镧系元素为标记物。

时间分辨荧光免疫分析技术集酶标记免疫分析和放射免疫分析等优点于一身，且克服了酶标记物的不稳定性、化学发光仅能一次发光且易受环境干扰和电化学发光的非直接标记等缺点，降低了非特异性信号，达到了极高的信噪比，大大地超过了放射性同位素所能达到的灵敏度，且还具有标记物制备方便、储存时间长、无放射性污染、检测重复性好、操作流程短、标准曲线范围宽、不受样品自然荧光干扰、应用范围广泛等优点。

因此，越来越受到人们的关注。

目前，国内外应用于盐酸克伦特罗检测的时间分辨荧光免疫分析技术的报道还较少，随着技术的越来越成熟，其应用将更广泛。

如果研制成检测盐酸克伦特罗的时间分辨荧光免疫分析技术试纸条，将可对盐酸克伦特罗的残留进行现场检测。

2.4生物传感技术（Biosensor，BS）

将生物技术与微电子技术相结合，利用生物体内抗原、抗体专一性结合而导致电化学变化设计成免疫生物传感器。

将CL（或RAC）抗体微型化膜固定于换能器（工作电极）表面，测定时在待测样品溶液中加入已知浓度的酶标激素,CL（或RAC）与标记抗原竞争性地结合电极上的抗体，使经洗涤后的电极与底物溶液接触，标记酶催化底物发生相应的化学变化，转变为电信号输出，输出显示和数据处理系统将信息进行数据处理和输出，直接显示测得CL（或RAC）的含量。

国外已有用生物传感器技术检测CLB残留的资料报道,如PizzarielloAndrea应用分子印迹聚合膜（MIP）作为分子识别系统，选择固相基质复合电极（SBMCE）作为换能器，微分脉冲电压电流表（DPV）作为输出显示装置检测牛肝脏中CLB残留，结果此方法特异性强，与其他同类物质交叉反应低，缺点是反应时间较长，灵敏度还有待于提高。

目前酶免疫传感器的灵敏度达0.01μg/kg，而且可在几分钟之内完成检测全过程。

目前研制成功的检测盐酸克伦特罗的酶免疫传感器，检测限为0.3μg/kg，可在10min内完成检测全过程，且传感器体积小（15cm×

7cm×

2cm），便于携带和实现现场检测。

生物传感器具有选择性好、响应速度快、样品用量少、操作简易、价格低廉、定量准确，且其结构简单、体积小、携带和使用方便、可以实现连续的在线检测和反复使用等优点。

2.5毛细管电泳免疫分析-激光诱导荧光检测（CEIA-LIF）

CEIA-LIF是我国学者最近研究的一种快速、灵敏、特异性很强的检测盐酸克伦特罗的新方法。

该法采用CLB与牛血清蛋白（BSA）偶联并用荧光素标记[5]，离线毛细管电泳分离和在线毛细管电泳法来检测。

在最佳条件下，离线和在线毛细管免疫电泳法的检测限分别为0.7ng/ml和0.2ng/ml，相对标准差（RSD）分别为0.88~1.2%和0.56~2.8%，回收率分别为88~93.7%和90~102%。

建立的CEIA-LIF新方法对CLB的检测准确可靠、快速（从选择直到检测的完成仅需8分钟左右）自动化水平高，提高了选择的准确性，避免了人为操作的误差和检测的灵敏度，试剂消耗量小，检测成本低。

2.6相对比较

综上所述，酶联免疫吸附测定法、放射免疫分析技术、毛细管区带电泳法、色谱法都不能实现现场快速检测，而且检测设备和检测费用昂贵，生物传感器技术、滴金免疫技术和时间分辨荧光免疫分析技术