细胞生物学实验手册1Word文档下载推荐.docx

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实验报告

15分

一、内容完整，对实验结果分析透彻A+15分

二、内容完整A12分

三、内容构成不完整B10分

四、凡抄袭他人和被抄袭发现者一律C5分

六实验结果与分析、七作业、八思考题

1、实验占期末总成绩30%，即30分；

取七个实验的平均成绩为实验最终成绩

2、分组名单：

分ABC三组，每组再分4小组

3、请假：

辅导员签字的假条+提前一天电话请假

（二）实验要点

实验一光学显微镜使用及显微摄影技术

一、实验目的

1、了解光学显微镜结构原理并熟练掌握其操作方法；

2、掌握显微摄影技术操作流程

3、了解部分细胞生物学中所使用的大型仪器设备的操作流程及用途。

二、实验原理

显微镜的放大效能是由其照明系统所使用光的波长和透镜系统的数值孔径决定，缩短使用的光波长或增加数值孔径可以提高分辨率。

可见光的光波振幅较窄，因此使用较短波长的紫外光作为光源系统，可以提高分辨率。

三、实验内容

1、双目显微镜的操作规范：

2、NIKON80i显微摄影系统的操作流程

3、胶片放大洗印技术流程

4、部分大型仪器设备介绍

荧光显微镜Fluorescencemicroscope

暗视野显微镜darkfieldmicroscope

相差显微镜

微分干涉差显微镜

倒置显微镜inversemicroscope

显微操作仪

透射电子显微镜TEM

四、作业

1、学生应在生物实验课程中学习哪种能力

2、希望在生物实验课程中学到哪些知识与技能

注：

以上两题任选一题，字数500字以上

五、思考题

1、暗视野显微镜的定义与应用

2、相差显微镜的定义与应用

实验二血涂片的制备及细胞大小的测量

一、实验目的：

1、掌握血涂片的制备技术

2、认识血液中红细胞和各类白细胞的形态

3、掌握目镜测微尺的使用方法

二、实验原理：

将血液样品制成单层细胞的涂片标本，经瑞氏－吉姆萨染液染色后，不同白细胞中的颗粒可以呈现不同的颜色。

碱性粒细胞的颗粒呈蓝紫色，酸性粒细胞的颗粒呈7橘红色，中性粒细胞的颗粒呈粉红色。

根据细胞中颗粒的颜色、大小及多少，再结合细胞的大小及细胞核的形态，就可以将白细胞进行分类计数。

三、实验步骤

（一）血涂片的制备

1、消毒与取血

消毒

先按摩取血部位,使血流通畅;

再用酒精消毒采血针和取血部位（如指尖）.

取血

待酒精干后,刺破皮肤,使血自然流出,勿挤.

2、推片

取一块边缘光滑的载片做推片.将其一端置于血滴前方,向后移动到接触血滴,使血液均匀分散在推片与载片的接触处.然后使推片与载片呈30°

～40°

角,向另一端平稳地推出,迅速在空气中摇,使之自然干燥.

3、染色

加瑞氏－吉姆萨A染液1－2滴，染色1分钟，再将瑞氏－吉姆萨B染液滴加于A液上面（滴加之量为A液的2－3倍），染色5－10分钟。

最后用蒸馏水把染液冲掉,用吸水纸吸干,自然干燥后,即可镜检观察

4、观察.

四、注意事项

玻片的清洗:

使用玻片时只能手持玻片边缘,切勿触及玻片表面,以保持玻片清洁,干燥,中性,无油腻.

细胞染色对氢离子浓度十分敏感,在染色过程中玻片必须化学清洁,配制瑞氏染液必须用优质甲醇,稀释染液必须用缓冲液,冲洗用水应近中性,否则各种细胞染色反应异常,致使细胞的识别困难,甚至造成错误.

染色时间与染液浓度,室温高低,细胞多少有关.染液越淡,室温越低,细胞越多,所需染色时间越长或应适当增加染液量,因此染色时间应视具体情况而定.特别是更换新染料时必须经试染,摸索最佳染色条件.

染液不可过少,以防蒸发干燥染料沉着于血片上难冲洗干净.冲洗时应用流水将染液冲去,不能先倒掉染液,以免染料沉着于血片上.

测微尺的使用

显微测微尺是用来测量细胞在显微镜下长度的工具,由目镜测微尺和镜台测微尺组成,两尺配合使用.

计算细胞、细胞核体积的公式：

圆形V=4/3πr3（r为半径）

椭圆形V=4/3πab2（a、b为长、短半径）

核质比N／D=Vn／（Vc—Vn）（Vn为核的体积，Vc是细胞质的体积）

五、作业题

v1、制备一张血涂片，观察并描述其中各类血细胞的形态特征

v2、任选20个红细胞，测量其直径，并计算出平均值

六、思考题

从外观来判断，一张好的血涂片有哪些特征？

实验三细胞凝集反应及细胞膜的渗透性

了解细胞膜的表面结构;

了解细胞膜的渗透性及各种物质进入细胞膜的速度

二、实验的原理

1.细胞凝集反应

细胞质膜是由蛋白质不同程度镶嵌在脂双层中所形成的动态流动结构，蛋白质和脂类分子又与寡糖链结合为糖蛋白和糖脂分子，糖蛋白和糖脂分子伸至细胞表面的分枝状寡糖链在质膜表面形成细胞外被（又称为糖萼）。

凝集素（1ectin）是一类含糖的（少数凝集素例外）并能与糖进行专一性结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。

凝集素促使细胞凝集主要是由于它能与细胞外被的糖分子相连接、在细胞间形成“桥”的结果，且加入与凝集素互补的糖分子可以抑制细胞间的凝集反应。

2.细胞膜的渗透性

细胞膜（cellmembrane）:

又称质膜.细胞表面的一层薄膜.厚度通常为7～8nm，由脂类和蛋白质组成，还有一类碳水化合物，我们知道糖类物质也属于碳水化合物的范围。

细胞膜把细胞包裹起来,使细胞能够保持相对的稳定性,维持正常的生命活动.它最重要的特性是半透性，或称选择渗透性，对进出入细胞的物质有很强的选择透过性，它可以选择性的让某些分子进入或排出细胞。

这是细胞膜最基本的一种功能.如果细胞丧失了这种功能,细胞就会死亡.

三、作业题

（1）．绘制简图，表示血细胞的凝集过程；

（2）．图示血细胞凝集的原理。

试管编号

是否溶血

时间

结果分析

1）5ml氯化钠+0.5ml稀释鸡血

2）5ml氯化铵+0.5ml稀释鸡血

3）5ml硝酸铵+0.5ml稀释鸡血

4）5ml草酸铵+0.5ml稀释鸡血

5）5ml葡萄糖+0.5ml稀释鸡血

6）5ml甘油+0.5ml稀释鸡血

7）5ml乙醇+0.5ml稀释鸡血

8）5ml丙酮+0.5ml稀释鸡血

四、思考题

加入凝集素的细胞会凝聚在一起，加入何种物质能抑制细胞凝集？

实验四叶绿体的分离与荧光观察

一、荧光显微镜的基本结构、原理、操作方法

二、荧光显微镜使用步骤

光学观察

1．开电源

2．按预置开关.

3．将ND8,ND32,NCB11减光片，色温片移入光路

4．推入光路转换杆，使光路充满双目镜筒

5．转动激发方式转换盘放空位处

6．将聚光镜升到最高位

7．全部开启视场光阑和视场光阑

（使用1-100X聚光镜时，将顶透镜置入光路）

8．将10X物镜置于光路中

9．放置标本并将要观察部分置于光路中

10．对标本调焦

11．调节视度和瞳孔距离.

12．聚光镜聚焦和对中.

13．转换到所需的物镜观察标本每次转换物镜时，都要调节视场光阑和孔径光阑（视场光阑:

调到刚好外切视场；

孔径光阑:

物镜数值孔径（N.A）的70%至80%）

14．观察完毕后，关闭电源.

荧光观察

1．执行“光学观察”中的步骤1至11。

2．降低聚光镜或移开聚光镜并在它位置装上遮光管。

3．关闭显微镜电源开关。

4．关闭光闸和阻断落射照明光组。

5．将要使用的激发法相应荧光块移入光路。

6．完全打开落射照明装置的视场光阑和孔径光阑

7．打开落射照明装置光源的电源开关照后打开光闸，对中照明灯

8．将10X物镜置入光路。

9．放入标本并将要观察部分移入光路中。

10．对标本调焦。

11．将落射荧光装置的视场光阑对中心。

.

12．转换到需要的物镜并观察标本。

*用落射荧光装置的ND减光片调解亮度。

*调节视场光阑使其刚好外切视场。

*用孔径光阑调节图像亮度，使用孔径光阑之前，先完成它的对中。

*使用油浸物镜时，在标本和物镜间滴入浸油。

13．回复到明场显微术

*关闭落射照明装置的光闸并阻断落射荧光光线。

*旋转激发法转换盘将无荧光滤光块的位置移入光路

*如果没有装上聚光镜装上聚光镜，然后进行聚光镜的对中和调焦（参阅明场显微术12节）

*打开显微镜电源开关转到透射光源

14．完成观察后关掉所有电源开关

三、叶绿素的自发荧光和叶绿体的间接荧光原理

某些物质在一定短波长的光（如紫外光）的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时，就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光（如可见光），这种光就称为荧光。

若停止供能，荧光现象立即停止。

有些生物体内的物质受激发光照射后，可直接发出荧光（称为自发荧光），如叶绿素的火红色荧光。

有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光（称为间接荧光），如叶绿体吸附吖啶橙后可发橘红色荧光本实验利用荧光显微镜对发荧光的叶绿体进行观察。

吖啶橙（AcridineOrange，AO）是一种荧光色素，其激发滤光片波长488nm。

阻断滤光片波长515nm。

它与细胞中DNA和RNA结合量存在差别，可发出不同颜色的荧光（即着色特异性），这是由于DNA是个高度聚合物，吸收荧光物质的位置较少，发绿色荧光，而RNA聚合度低，能和荧光物质结合的位置多，故发红色荧光。

四、作业题

1、绘制荧光观察结果，标明所观察到的生物大分子（DNA、RNA等）位置、形状及颜色，并分析原因。

2、概述滤镜系统的选用原则。

1、分离细胞组分时，为什么要加入0.35mol/L氯化钠？

实验五DNA的Feulgen染色

一、Feulgen反应的原理

二、操作方法

Carnoy液固定12h

↓

温浴至60℃的1mol/LHCl溶液中水解8min

蒸馏水冲洗3次（使水解停止）

Schiff试剂中染色30min

用漂洗液洗3~5次（以洗去多余的非特异性色素及扩散的染料）

蒸馏水洗3次

压片

镜检

1、绘图表示Feulgen反应的染色结果，标明组分及颜色

1、总结Feulgen反应染色结果的影响因素。

2、在稀盐酸水解后，为什么要用亚硫酸水进行洗片？

实验六石蜡切片技术

一、石蜡切片操作基本过程

石蜡切片的制作过程主要包括：

取材，固定，脱水，透明，透蜡，包埋，切片，贴片，染色，透明，封藏等步骤。

1．取材

材料的好坏直接影响到切片的质量，无论取哪一种动植物材料，以下几点是必须注意的。

（1）植物材料选择时须尽可能不损伤植物体或所需要的部分；

动物材料取用时常对动物施以麻醉，常用的麻醉剂有氯仿和乙醚，或将动物杀死后迅速取出所需要的组织。

（2）取材必须新鲜，这一点对于从事细胞生物学研究尤为重要，应该尽可能割取生活着的组织块，并随即投入固定液。

（3）切取材料时刀要锐利，避免因挤压细胞使其受到损伤。

（4）切取的材料应该小而薄，便于固定剂迅速渗入内部。

一般厚度不超过2mm，大小不超过5×

5mm2。

2．固定

固定剂的作用对象主要是蛋白质，至于其他成分如脂肪和糖