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A．大肠杆菌B．霉菌C．放线菌D．固氮细菌

（2）培养基的组成要素

培养基的作用是要满足微生物对____________和____________的需求。

营养条件：

一般以培养异养型细菌为例，由活细胞中的元素组成（包括：

____________和____________）来决定。

①基础物质：

各种培养基一般都含有____、____源（）、____源（）和________四种营养物质。

碳源：

如CO2、NaHCO3等无机碳源；

糖类、蛋白质、脂肪等有机碳源。

异养微生物只能利用______碳源。

单质碳____能作为碳源。

氮源：

如N2、NH3、NO3-、NH4+、蛋白质、氨基酸等。

只有______微生物才能利用N2

②特殊营养物质：

（牛肉膏，蛋白胨这类天然营养中常具有的）_______等

环境要求：

满足微生物生长还需要适宜的____、____的要求（根据微生物的需求提供____或____环境）

总结出制作培养基所需要材料，考虑的因素：

______________________________________________________

拓展思考：

如果是培养动物细胞、植物细胞呢？

【例2】下列可以作为自养微生物氮源的是

A．N2、尿素B．牛肉膏、蛋白胨C．尿素、酵母粉D．铵盐、硝酸盐

2、无菌技术

（1）消毒与灭菌的区别

消毒指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体______或______一部分对人体有害的微生物（不包括______和______）。

消毒方法常用______消毒法，还有化学药剂（如______、氯气、石炭酸等）消毒等。

灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体______所有的微生物（包括______和______）。

灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。

二、纯化、分离与计数

（1）纯化——大肠杆菌：

方法：

__________法、__________法。

（2）分离——分解尿素的细菌：

尿素属于______化合物，对大多数的微生物不能作为直接___源。

而此类微生物能分解尿素的原因是它们能合成______酶。

思考：

可制作含______的______培养基

分解维生素的微生物：

纤维素属于______化合物，对大多数的微生物不能作为直接___源。

而此类微生物的特点是：

___________________________________

可制作含______的______培养基或可以用______染色法，不能分解纤维素的细菌周围出现______色，能分解纤维素的细菌周围出现______。

这成为______培养基

（3）计数——____________法和显微镜直接计数——利用到血球计数板

专题3植物的组织培养技术——选修三补充

①植物组织培养的原理是，细胞的分裂与________。

②过程：

离体的-（-----）-→愈伤组织-（-----）→（人工种子）--------→。

______-（-----）-→愈伤组织-（-----）→--------→。

-（-----）-→胚状体-（-----）→--------→。

注意：

愈伤组织再分化成苗与形成胚状体的原因是：

______________________________________。

③植物组织培养必需满足的条件是

（操作环境、营养、特殊营养）。

特殊营养中的激素：

常用激素为___________和____________；

若要诱导愈伤组织的形成、根的分化、芽的分化需要改变培养基中的什么成分？

______________

专题5DNA和蛋白质技术

课题1DNA的粗提取与鉴定

一、实验原理

对于DNA的粗提取而言，就是要利用DNA与______、______和______等在______和______性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。

1．DNA的溶解性

DNA能充分溶解在一定浓度的______中，蛋白质等其他成分不能。

图

DNA不溶于_____溶液，但是细胞中的某些蛋白质能，可以将_____与_____进一步的分离。

2．DNA的鉴定

在_____条件下，DNA遇_____会被染成_____色，因此_____可以作为鉴定DNA的试剂。

3、DNA对酶、高温、洗涤剂的耐受性

二、实验设计

1．实验材料的选取

凡是含有______的生物材料都可以考虑，____________等材料成功的可能性更大。

2．破碎细胞，获取含DNA的滤液

动物细胞：

①为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？

为什么不用猪血细胞？

为防止血液凝固要加什么药品？

_____________________________________________________________________________________

植物细胞：

②加入洗涤剂作用是什么？

_____________________________________________________________________________________。

3．去除滤液中的杂质

方案一的原理是DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同；

方案二的原理是蛋白酶分解蛋白质，不分解DNA；

方案三的原理是蛋白质和DNA的变性温度不同。

①如何反复地溶解与析出DNA，去除杂质？

答：

DNA溶解度最低时的NaCL溶液浓度为_____。

图示：

除去杂质的过程是：

溶解DNA——_____出_____的杂质——滤液析出DNA——再_____出_____的杂质

4．DNA的析出与鉴定

将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相等、____的____溶液，（原因：

________________________）静置2～3min，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取的DNA。

用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水分。

取两支20ml的试管，各加入物质的量浓度为________的NaCl溶液中，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。

然后，向两支试管中各加入4ml的____试剂。

混合均匀后，将试管置于____中加热5min，待试管冷却后，比较两支试管溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否变蓝。

5、传统实验方式总结：

课题2多聚酶链式反应扩增DNA片段

[导学诱思]

1．PCR原理——PCR技术扩增DNA时，过程与细胞内___________过程相类似

填写下列表格

参与组分

PCR技术（反应需要在一定的_____溶液中）

细胞中DNA复制

模板

打开DNA双链

合成子链的原料

催化合成DNA子链

（酶的特点）

引物

（引物的作用）

2．PCR的反应过程

PCR一般要经历循环，每次循环可以分为（作用：

_________________________________________）

（作用：

______________________________________）

____________________________________）

[典例解析]]

一个由15N标记的DNA分子，放在没有标记的环境中培养，利用PCR循环5次后标记的DNA分子总数比例（）

A1/10B1/5C1/16D1/25

课题3血红蛋白的提取和分离

一、实验原理（略）

1．________法（法）：

（1）原理：

分子量的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程，流动；

分子量的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程，流动。

（2）凝胶材料：

多孔性，多糖类化合物，如糖、脂糖。

2．缓冲溶液

由_____和相应的__________盐组成（如H2CO3－NaHCO3，NaH2PO4/Na2HPO4等），调节酸和盐的用量，可配制不同pH的缓冲液。

（2）缓冲液作用：

抵制外界酸、碱对溶液pH的干扰而保持_____稳定。

3．凝胶电泳法：

不同蛋白质的带电性质、电量、形状和大小不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动_____和运动_____不同。

二、实验操作：

样品处理（离心—盐水洗—蒸馏水）、粗分离（离心—透析）

纯化（______法）、纯度鉴定（______法）

选修三知识梳理

（1）基因工程

①DNA重组技术的基本工具、（与聚合酶对比）、，

常用运载体的种类：

________________________。

②基因工程基本操作程序步骤：

1、（从已有物种_______、_______、PCR技术）

2、________________________（基因表达载体的组成______＋______＋______＋______）

3、____（常用方法：

植物—动物—微生物——）

4、。

（思考：

如何进行目的基因的检测与鉴定？

）

a.（未转录时）_____________________________________________________________________

b。

（转录后）______________________________________________________________________

c.（翻译后）_____________________________________________________________________

d.（性状表达后）______________________________________________________________________

③基因工程的应用：

植物：

_________、动物：

_________、微生物：

________、人：

________

④蛋白质工程和基因工程最大的区别。

蛋白质工程过程：

把图补充完整，记忆方式。

基因（DNA）——mRNA——AA序列——pr三维结构——生物功能应用：

______

（2）细胞工程

技术：

植物组织培养（略）

植物体细胞杂交

1、去壁的方法：

2、_______的融合方法：

物理—______化学—______

理论基础：

__________

3、杂种细胞的类型有：

_______________，所以必须经过____

4、植物体细胞杂交完成的标志：

5、意义

6、不同细胞全能性表达的难易程度：

（植物细胞、动物细胞、分化程度的高低、受精卵、性细胞、体细胞）

动物细胞培养（概念大意：

分散成_____