沉降菌测试方法重点Word文档格式.docx
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n—培养皿总数
Mi—1号培养皿菌落数
M2—2号培养皿菌落数
Mn—n号培养皿菌落数
用平均菌落数判断洁净空气中微生物。
洁净室内平均菌落数必须低于所选
定的评定标准，（100级w1个；
10000级w3个；
100000级w10个）。
若某洁净室内平均菌落数超过标准，则必须对此区域先进行消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。
人员进出洁净生产区的一般程序：
人员进出无菌操作洁净生产区程序:
无菌医疗器具洁净室环境要求及监测：
监测项目
技术指标
监测方法
监测频次
100级10000级100000级
300000级
温度（C）
18C—28C
1次/班
相对湿度%
45~65
水平层流
风速m/s
>
0.4————
JC
垂直层流
1次/月
0.3
换气次数
——>
20>
15
12
1
次/月
静压差Pa
不同级别洁净室及洁净室与非洁净室之间》
5
洁净室与室外大气》10
沉降菌数
<
1<
3<
10
GB/T16294-19961
次/周
无菌检查法试验步骤
无菌检查在洁净度100级单向流空气区域内进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染。
1、器具灭菌：
培养皿若干个（报纸所好）、试管、剪刀、镊子等装入盒中置电热干燥箱内180C,2小时。
2、硫乙醇酸盐流体培养基（细菌），根据试验实际用量取若干培养基和蒸馏水，煮沸，摇匀，分装至适宜的容器中，瓶塞封口，灭菌。
硫乙醇酸盐流体
培养基置33C培养48小时，应无菌生长。
改良马丁培养基（真菌），根据试验实际用量取若干培养基和蒸馏水，煮沸，
摇匀，分装，灭菌。
改良马丁培养基置24C培养72小时，应无菌生长。
营养琼脂根据实际用量按一皿装15ml，分装几个皿来计算，灭菌。
0.9%氯化钠分装至7支试管，封口，灭菌。
3、把金黄色葡萄球菌用接种环刮一下，放入0.9%氯化钠试管中摇匀，作
10倍系列稀释至10-7，然后从10-5、10-6、10-7试管各抽取1ml，分别放入标号5#、6#、7#培养皿里，倒入营养琼脂摇匀，（营养琼脂不能太烫，以不烫手为准）待营养琼脂冷却后倒置放入33C培养箱中培养48小时，48小时中取出观察计数，根据菌落数小于100cfu来决定用几号。
4、操作时，应用适当的消毒液对供试品表面或外包装擦拭消毒后，以无菌方法取内容物。
取供试品3只接种于足以浸没供试品的适量培养基中。
一只瓣膜接种于硫乙醇酸盐流体培养基中，轻轻摇动，使瓣膜与培养基混合，1支试管接种金黄色葡萄球菌对照用菌液1ml,作阳性对照，1支作空白对照。
另取2只瓣膜接种于改良马丁培养基中，2支试管作空白对照。
硫乙醇酸盐流体培养基置
33C培养，改良马丁置24C培养阳性对照管培养48小时后应有菌生长。
5、结果判断：
在培养期间应逐日观察并记录是否有菌生长。
培养14天后，若供试品管匀澄清，判供试品符合规定；
若供试品管中任何一管显浑浊并有菌生长，判供试品不符合规定。
细菌内毒素试验步骤：
1、准备工作：
移液管：
O.lmll支，1ml10支
试管：
10mlX4支，试管架2个（大小）
烧杯40ml2个，锥形瓶2个
试验所用器皿需经处理除去可能存在的外源性内毒素，玻璃器皿置电热干燥箱内180C干烤至少2小时。
细菌内毒素检查水10mlx4支
细菌内毒素工作标准品1支，每安瓿含内毒素10EU
鲎试剂0.1mlX8支
同一批号3支瓣膜
浸提介质：
细菌内毒素检查水
浸提介质体积计算公式：
V=L=8.6（ml）
8.6X3=25.8（ml）
把细菌内毒素检查水4支外表擦净打开，倒入烧杯中，用移液管取25.8ml倒入装3只瓣膜烧杯中，用锡纸封口，放进提前打开升温至37C恒温培养箱中，培养1.5小时。
供试液贮存应不超过2小时。
注：
V-浸提介质体积，单位为毫升（ml）
L-产品细菌内毒素限值，单位为细菌内毒素单位每毫升（EV/ml）
入-所用鲎试剂灵敏度标示值，单位为细菌内毒素单位每毫升（EV/ml）
2、细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查水1ml溶解，在旋涡混合器上
混匀15分钟
1用移液管取0.1ml工作标准品和0.9ml检查水在旋涡混匀器上混匀30秒钟。
2用移液管从第1管中取0.5ml混合液和0.5ml检查水在旋涡混匀器上混匀30秒钟。
（阳性对照溶液）
3用移液管取0.1ml工作标准品和0.9ml供试液在旋涡混匀器上混匀30秒钟。
4用移液管从第3管中取0.5ml混合液和0.5ml供试液在旋涡混匀器上混匀30秒钟。
（供试品阳性对照溶液）
3、把8支鲎试剂外表擦净全部打开放进试管架中，每支各加入0.1ml细菌内毒素检查水，在旋涡器上混匀，其中2支作供试品管，2支作阴性对照管，2支作阳性对照管，2支作供试品阳性对照管。
每支供试品管加入0.1ml供试液；
阴性对照管加入0.1ml检查用水；
阴性对照管加入0.1ml阳性对照溶液；
供试品阳性对照管加入0.1ml供试品阳性对照溶液。
封闭管口，轻轻摇匀，垂直放入37士1C恒温器中孵育60士2分钟，然后取出观察结果，试管在孵育期间应避免任何振动。
4、结果判断：
将试管从水浴箱中轻轻取出，缓缓倒转180若管内形成凝胶，并且凝胶不变形，不从管壁滑脱者为阳性（＋），未形成凝胶或形成凝胶不坚实，变形并从管壁滑脱者为阴性（－）。
阴性对照管均为阴性，阳性对照管，供试品阳性对照管均为阳性，试验有效，否则无效。
若阴性对照管为阳性，表明鲎试剂或检查水或实验器具受污染；
若阳性对照管为阴性，表明鲎试剂或标准内毒素已失效，或鲎试剂灵敏度及标准内毒素效价标示不准确或标准内毒素稀释有误。
供试品阳性对照管为阴性，表明反应体系内有抑制反应干扰因素存在。
一、氯化物
1、配制标准溶液：
0.1mol/L硝酸银溶液。
称取1.6987g分析纯硝酸银，定溶至100ml容量瓶中，转入棕色试剂瓶中，避光保存，贴标签。
2、取样，量取50ml样品水平行样（2份）倒入试管中，力口5滴硝酸，再加入1ml硝酸银。
均不得发生浑浊。
二、硫酸盐
1、配制标准溶液：
称取5±
0.5g氯化钡（分析纯），定溶至100ml容量瓶，倒入试剂瓶，贴标签。
（如果浑浊，把蒸馏水烧开，放凉再用）
2、分析：
取样50ml平行样（2份）倒入试管中，加2ml氯化钡溶液，不得发生浑浊。
三、钙盐
称取分析纯草酸铵3.5g，定溶至100ml容量瓶，贴标签。
2、分析：
取样50ml平等样2份，倒入试管中，加2ml草酸铵溶液，均不得发生浑浊。
四、二氧化碳
称取分析纯氢氧化钙0.3g，定溶至100ml容量瓶，用橡皮塞塞紧，用力振摇，放置1小时，用时取清液。
取样25ml平等样（2份）倒入带盖的试管中，加25ml氢氧化钙溶液，放置1小时，振摇，1小时内不得发生浑浊。
五、易氧化物
①高锰酸钾溶液：
取3.3克高锰酸钾，加水1050ml，煮沸15分钟，加水到1000ml,密塞后静置2天以上，用微孔玻璃漏斗过滤，摇匀，标定其浓度。
②稀硫酸：
取分析纯硫酸（98%57ml，（注意烧杯里放蒸馏水，沿杯壁缓慢倒入硫酸57ml，定溶至1000ml，放凉再用）
2、标定：
取在105C干燥至恒重的基准草酸钠约0.2克，精密称定，加新沸过冷水250ml与硫酸10ml搅拌使溶解，自滴定管中迅速加入本液约25ml,待褪色后，加热到65C，继续滴定至溶液显微红色并保持30秒钟不褪；
当滴定终了时，溶液温度应不低于55C,每1ml高锰酸钾滴定液（0.02mol/L）相当于6.70mg草酸钠，根据本液消耗量与草酸钠取用量，算出本液浓度，即得。
贮藏：
置玻璃塞棕色玻璃瓶中，密闭保存。
3、分析：
取样100ml平行样（2份）加稀硫酸10ml，煮沸后，加高锰酸钾滴定液（0.02M）0.10ml，再煮沸10分钟，粉红色不得完全消失。
六、氨
1、配制标准溶液
①纳氏试剂：
称取60g氢氧化钾，溶于约250ml无氨水，冷却至室温。
另外称取20g碘化钾溶于100ml无氨水，边搅拌边逐步加入二氯化汞结晶粉末（约10克），至出现朱红色沉淀不易溶解时，改为滴加饱和二氯化汞溶液，保持搅拌，到出现少量朱红色沉淀不易溶解时，停止滴加饱和二氯化汞溶液，然后把该溶液缓慢注入上述已冷却的氢氧化钾溶液中，边注入边搅拌，并用无氨水稀释至400ml,然后静置过夜。
最后将该溶液上清液至聚乙烯塑料瓶中，常温避光保存。
②氯化铵溶液：
称取分析纯氯化铵0.0315g，定溶至1000ml（0.0032g
100ml）容量瓶中，转入试剂瓶中保存，贴标签。
取样50ml，加纳氏试剂2ml，放置15分钟。
如果显色，加氯化铵溶液1.5ml，加无氨水48ml，加纳氏试剂2ml，对照颜色不得更深。
（氨含量0.00003%）
七、重金属
1、配制标准溶液
1醋酸盐缓冲溶液：
（PH=3.5）称取分析纯醋酸铵25g,加蒸馏水25ml溶解后，加盐酸液［7mol/L（称取0.0255g至100ml定溶至100ml）］38ml，再用盐酸液［2mol/L（称取0.0073g至100ml定溶）］准确调节PN值3.5（电位计指示）用水稀释至100ml，倒入试剂瓶待用。
2硫
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