沉降菌测试方法重点Word文档格式.docx

1、n培养皿总数Mi 1号培养皿菌落数M22号培养皿菌落数Mnn号培养皿菌落数用平均菌落数判断洁净空气中微生物。洁净室内平均菌落数必须低于所选定的评定标准，（100级w 1个；10000级w 3个；100000级w 10个）。若某洁净 室内平均菌落数超过标准，则必须对此区域先进行消毒，然后重新采样两次， 测试结果均须合格。人员进出洁净生产区的一般程序：人员进出无菌操作洁净生产区程序:无菌医疗器具洁净室环境要求及监测：监测项目技术指标监测方法监测频次100 级 10000 级 100000 级300000 级温度（C）18C 28 C1 次 /班相对湿度 %4565水平层流风速 m/s 0.4 JC

2、垂直层流1 次 /月 0.3换气次数 20 15 121次/月静压差 Pa不同级别洁净室及洁净室与非洁净室之间5洁净室与室外大气10沉降菌数 1 3 10GB/T16294-1996 1次/周无菌检查法试验步骤无菌检查在洁净度 100 级单向流空气区域内进行，其全过程应严格遵守无 菌操作，防止微生物污染。1、器具灭菌：培养皿若干个（报纸所好） 、试管、剪刀、镊子等装入盒中 置电热干燥箱内180C, 2小时。2、 硫乙醇酸盐流体培养基（细菌） ，根据试验实际用量取若干培养基和蒸 馏水，煮沸，摇匀，分装至适宜的容器中，瓶塞封口，灭菌。硫乙醇酸盐流体培养基置33C培养48小时，应无菌生长。改良马丁培

3、养基 （真菌），根据试验实际用量取若干培养基和蒸馏水， 煮沸，摇匀，分装，灭菌。改良马丁培养基置 24C培养72小时，应无菌生长。营养琼脂根据实际用量按一皿装15ml，分装几个皿来计算，灭菌。0.9%氯化钠分装至 7 支试管，封口，灭菌。3、 把金黄色葡萄球菌用接种环刮一下，放入 0.9%氯化钠试管中摇匀，作10倍系列稀释至10-7，然后从10-5、10-6、10-7试管各抽取1ml，分别放入标号5#、 6#、 7#培养皿里，倒入营养琼脂摇匀， （营养琼脂不能太烫，以不烫手为准）待 营养琼脂冷却后倒置放入33C培养箱中培养48小时，48小时中取出观察计数， 根据菌落数小于 100cfu 来决定

4、用几号。4、 操作时，应用适当的消毒液对供试品表面或外包装擦拭消毒后，以无菌 方法取内容物。取供试品 3 只接种于足以浸没供试品的适量培养基中。一只瓣 膜接种于硫乙醇酸盐流体培养基中，轻轻摇动，使瓣膜与培养基混合， 1 支试管 接种金黄色葡萄球菌对照用菌液 1ml,作阳性对照，1支作空白对照。另取2只 瓣膜接种于改良马丁培养基中， 2支试管作空白对照。 硫乙醇酸盐流体培养基置33C培养，改良马丁置24C培养阳性对照管培养48小时后应有菌生长。5、结果判断：在培养期间应逐日观察并记录是否有菌生长。培养 14天后， 若供试品管匀澄清，判供试品符合规定；若供试品管中任何一管显浑浊并有菌 生长，判供试

5、品不符合规定。细菌内毒素试验步骤：1、 准备工作：移液管：O.lmll支，1ml10支试管：10ml X 4支，试管架2个（大小）烧杯40ml2个，锥形瓶2个试验所用器皿需经处理除去可能存在的外源性内毒素，玻璃器皿置电热干 燥箱内180C干烤至少2小时。细菌内毒素检查水10mlx 4支细菌内毒素工作标准品1支，每安瓿含内毒素10EU鲎试剂0.1ml X 8支同一批号3支瓣膜浸提介质：细菌内毒素检查水浸提介质体积计算公式：V=L=8.6 （ml）8.6 X 3=25.8 （ml）把细菌内毒素检查水4支外表擦净打开，倒入烧杯中，用移液管取 25.8ml 倒入装3只瓣膜烧杯中，用锡纸封口，放进提前打

6、开升温至37C恒温培养箱中， 培养1.5小时。供试液贮存应不超过2小时。注：V-浸提介质体积，单位为毫升（ml）L-产品细菌内毒素限值，单位为细菌内毒素单位每毫升（ EV/ml）入-所用鲎试剂灵敏度标示值，单位为细菌内毒素单位每毫升（ EV/ml）2、 细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查水 1ml溶解，在旋涡混合器上混匀15分钟1用移液管取 0.1ml 工作标准品和 0.9ml 检查水在旋涡混匀器上混匀 30 秒 钟。2用移液管从第 1 管中取 0.5ml 混合液和 0.5ml 检查水在旋涡混匀器上混 匀 30 秒钟。（阳性对照溶液）3用移液管取 0.1ml 工作标准品和 0.9ml 供试液

7、在旋涡混匀器上混匀 30 秒 钟。4用移液管从第 3 管中取 0.5ml 混合液和 0.5ml 供试液在旋涡混匀器上混 匀 30 秒钟。（供试品阳性对照溶液）3、把 8 支鲎试剂外表擦净全部打开放进试管架中，每支各加入 0.1ml 细菌 内毒素检查水，在旋涡器上混匀，其中 2 支作供试品管， 2 支作阴性对照管， 2 支作阳性对照管， 2 支作供试品阳性对照管。每支供试品管加入 0.1ml 供试液；阴性对照管加入 0.1ml 检查用水；阴性 对照管加入 0.1ml 阳性对照溶液；供试品阳性对照管加入 0.1ml 供试品阳性对 照溶液。封闭管口，轻轻摇匀，垂直放入 37士 1C恒温器中孵育60士

8、 2分钟，然 后取出观察结果，试管在孵育期间应避免任何振动。4、结果判断：将试管从水浴箱中轻轻取出， 缓缓倒转 180若管内形成凝胶， 并且凝胶不变形， 不从管壁滑脱者为阳性 （），未形成凝胶或形成凝胶不坚实， 变形并从管壁滑脱者为阴性（） 。阴性对照管均为阴性，阳性对照管，供试品 阳性对照管均为阳性，试验有效，否则无效。若阴性对照管为阳性，表明鲎试 剂或检查水或实验器具受污染；若阳性对照管为阴性，表明鲎试剂或标准内毒 素已失效，或鲎试剂灵敏度及标准内毒素效价标示不准确或标准内毒素稀释有 误。供试品阳性对照管为阴性，表明反应体系内有抑制反应干扰因素存在。一、氯化物1、配制标准溶液： 0.1mo

9、l/L 硝酸银溶液。称取 1.6987g 分析纯硝酸银，定溶至 100ml 容量瓶中，转入棕色试剂瓶 中，避光保存，贴标签。2、取样，量取50ml样品水平行样（2份）倒入试管中，力口 5滴硝酸，再加 入 1ml 硝酸银。均不得发生浑浊。二、 硫酸盐1、 配制标准溶液：称取 50.5g 氯化钡（分析纯），定溶至 100ml 容量瓶， 倒入试剂瓶，贴标签。 （如果浑浊，把蒸馏水烧开，放凉再用）2、 分析：取样 50ml 平行样（ 2 份）倒入试管中，加 2ml 氯化钡溶液，不得 发生浑浊。三、 钙盐 称取分析纯草酸铵 3.5g ，定溶至 100ml 容量瓶，贴标签。2、分析：取样 50ml 平等样

10、 2 份，倒入试管中，加 2ml 草酸铵溶液，均不 得发生浑浊。四、二氧化碳称取分析纯氢氧化钙 0.3g ，定溶至 100ml 容量瓶，用橡皮塞塞紧，用力 振摇，放置 1 小时，用时取清液。取样 25ml 平等样（ 2 份）倒入带盖的试管中，加 25ml 氢氧化钙 溶液，放置 1 小时，振摇， 1小时内不得发生浑浊。五、易氧化物高锰酸钾溶液：取 3.3克高锰酸钾，加水1050ml，煮 沸15分钟，加水到1000ml,密塞后静置2天以上，用微孔玻璃漏斗过滤，摇匀， 标定其浓度。稀硫酸：取分析纯硫酸（98% 57ml，（注意烧杯里放蒸馏水，沿杯壁缓 慢倒入硫酸57ml，定溶至1000ml，放凉再用

11、）2、 标定：取在105C干燥至恒重的基准草酸钠约 0.2克，精密称定，加新 沸过冷水250ml与硫酸10ml搅拌使溶解，自滴定管中迅速加入本液约25ml,待 褪色后，加热到65C，继续滴定至溶液显微红色并保持 30秒钟不褪；当滴定终 了时，溶液温度应不低于 55C,每1ml高锰酸钾滴定液（0.02mol/L ）相当于 6.70mg 草酸钠，根据本液消耗量与草酸钠取用量，算出本液浓度，即得。贮藏：置玻璃塞棕色玻璃瓶中，密闭保存。3、 分析：取样100ml平行样（2份）加稀硫酸10ml，煮沸后，加高锰酸钾 滴定液（ 0.02M）0.10ml ，再煮沸 10 分钟，粉红色不得完全消失。六、氨1、配

12、制标准溶液纳氏试剂：称取60g氢氧化钾，溶于约250ml无氨水，冷却至室温。另 外称取20g碘化钾溶于100ml无氨水，边搅拌边逐步加入二氯化汞结晶粉末 （约 10 克），至出现朱红色沉淀不易溶解时， 改为滴加饱和二氯化汞溶液， 保持搅拌， 到出现少量朱红色沉淀不易溶解时，停止滴加饱和二氯化汞溶液，然后把该溶 液缓慢注入上述已冷却的氢氧化钾溶液中，边注入边搅拌，并用无氨水稀释至 400ml,然后静置过夜。最后将该溶液上清液至聚乙烯塑料瓶中， 常温避光保存。氯化铵溶液：称取分析纯氯化铵 0.0315g，定溶至1000ml （0.0032g100ml ）容量瓶中，转入试剂瓶中保存，贴标签。取样50ml，加纳氏试剂2ml，放置15分钟。如果显色，加氯化 铵溶液1.5ml，加无氨水48ml，加纳氏试剂2ml，对照颜色不得更深。（氨含量 0.00003%）七、重金属1 、配制标准溶液1醋酸盐缓冲溶液：（PH=3.5）称取分析纯醋酸铵25g,加蒸馏水25ml溶解 后，加盐酸液7mol/L（称取0.0255g至100ml定溶至100ml）38ml，再用盐酸液 2mol/L（称取0.0073g至100ml定溶）准确调节PN值3.5 （电位计指示）用水 稀释至100ml，倒入试剂瓶待用。2硫