细胞通透性实验报告Word文档下载推荐.docx
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因此，本实验选用红细胞作为细胞膜透性的实验材料，将其放人不同的介质溶液中，观察红细胞的变化。
三、实验用品
1.实验材料
鸡血（事先取好，加入Alsever液，混匀后制悬液，4℃保存）；
2.实验试剂
0.85%的氯化钠溶液（等渗溶液）；
0.0085%的氯化钠溶液（低渗溶液）
0.8mol/L的甲醇、0.8mol/L的丙三醇、6%的葡萄糖溶液、2%的Triton
X-100溶液（高渗溶液）；
3.实验器材
试管（此处用的是刻度离心管）六支、离心机、滴管、载玻片、盖玻片、显微镜等
四、实验步骤
1.取血
吸取预先处理好的鸡血溶液6mL，加入4mL的等渗0.85%的氯化钠溶液，混匀后放入离心机，1200rpm离心5min；
2.制细胞悬液
用滴管吸取上清液，加入与沉淀量相等的等渗NaCl溶液，混匀制成悬液。
（如果沉淀量少于1.2ml，则补充鸡血）
3.溶血现象观察
在离心管之中分别加入0.85%的氯化钠溶液、0.0085%的氯化钠溶液、0.8mol/L的甲醇、0.8mol/L的丙三醇、6%的葡萄糖溶液、2%的Triton
X-100溶液3mL，滴入两滴细胞悬液，立即混匀并计时，溶血现象发生后，记录溶血时间，并制片观察溶血情况：
0.0085%的氯化钠溶液、0.8mol/L的甲醇、2%的Triton
X-100溶液（高渗溶液）反应非常迅速，因此需立即观察；
0.8mol/L的丙三醇、6%的葡萄糖溶液反应程度不剧烈，所以，每间隔10分钟观察记录溶血情况，观察1h。
注意：
6%的葡萄糖溶液有强烈的诱导细胞融合的作用，因此，必须严格混匀之后进行观察。
五、实验结果判断
（一）判断指标
（1）不溶血:
液体分二层，上层浅黄色透明，下层红色不透明。
镜检红细胞完好。
（2）不完全溶血:
溶液混浊，上层变成红色，镜检有部分红细胞有缺口或破裂。
（3）完全溶血:
液体变红而且透明，镜检发现细胞全部成碎片。
（二）记录溶血时间:
试剂类型
是否溶血
时间
结果分析
0.85%NaCl+稀释鸡血
否
等渗溶液中不会发生破裂，作为对照。
0.0085%NaCl+稀释鸡血
是
30s
低渗溶液，细胞吸水涨破。
0.8mol/L甲醇+稀释鸡血
8s
高渗溶液，细胞通透性大，导致胞内渗透压升高，吸水涨破。
0.8mol/L丙三醇+稀释鸡血
9s
6%葡萄糖溶液+稀释鸡血
1h内未完全溶血
高渗溶液，细胞吸收缓慢，细胞逐渐吸水涨破。
2%Triton
X-100溶液+稀释鸡血
六、实验结果照片
1.
图10.85%NaCl溶液下的细胞形态（放大倍数10×
40）：
细胞轮廓明显清晰，细胞大小正常，细胞质透光正常。
0.85%NaCl溶液（对照组）
2.
图3加0.0085%NaCl溶液后的细胞形态（10×
溶血后，细胞破裂，留下一个模糊的血影（较暗视野观察）。
图2加入后30s，细胞悬液出现溶血现象：
（右为等渗对照，左为实验组）由深红色溶液变为，透明、颜色较浅的溶液。
0.0085%NaCl溶液
3.
图5加0.8mol/L甲醇溶液后细胞形态：
（10×
溶血之后，仍是细胞破裂，留下模糊的血影（在较暗视野下观察）。
图4加入后8s，细胞悬液发生溶血现象：
（右为等渗对照，左为实验组）由深红色溶液变为透明、颜色较浅的溶液。
0.8mol/L甲醇溶液
4.
图7加入TritonX-100后细胞的状态（10×
溶血后，细胞膜遭到破坏，细胞内容物流出，留下模糊血影（暗视野下观察）。
图6加入后9s，细胞悬液发生溶血现象：
由于细胞不完全破裂，所以透明度相对较差，细胞液浑浊。
TritonX-100溶液
5.0.8mol/mL的丙三醇溶液
宏观变化：
图9加入丙三醇溶液之后60min，细胞悬液明显变得较为澄清。
（左为等渗对照组，右为实验组）
图8加入丙三醇溶液0min，细胞悬液未发生太大的颜色变化。
（左为等渗对照，右为实验组）
镜检观察结果：
图11丙三醇加入后10min时的显微状态（10×
视野之中，细胞仍然为完全状态，轮廓清晰，不发生溶血。
溶血率=0%
图10丙三醇加入后0min的显微状态（10×
视野中细胞全部为完全状态，细胞轮廓清晰，不发生细胞破裂。
溶血率=0%
图15丙三醇加入后50min后的显微状态（10×
视野之中更多的细胞边缘不规则化，细胞破裂的速度明显加快，形成更大数量的血影。
溶血率=10%
图13丙三醇加入后30min后的显微状态（10×
视野之中，油滴数目开始减少，细胞边缘开始出现不规则不圆滑的断裂，这标志着丙三醇已经开始进入细胞。
溶血率=1.3%
图12丙三醇加入后20min后的显微状态（10×
视野之中，开始出现很多丙三醇油滴，连接在细胞膜表面，开始有少部分细胞发生破裂，形成轮廓模糊的血影。
溶血率=0.5%
图14丙三醇加入后40min后的显微状态（10×
视野之中更多的细胞边缘不规则化，丙三醇已经逐步进入细胞。
同时，破裂细胞数量也在增加。
溶血率=3.1%
图16丙三醇加入之后60min的显微状态（10×
视野中，细胞破裂速度更加迅速，出现了大量轮廓模糊的血影，但溶液仍未完全溶血，预计完全溶血时间＞1h。
溶血率=50%
6.
图17加入葡萄糖溶液0min，细胞悬液颜色变化不明显。
图18加入葡萄糖溶液60min，细胞悬液颜色较为澄清。
6%葡萄糖溶液
图20加入葡萄糖溶液之后10min的显微状态（10×
细胞全部轮廓清晰，没有破裂现象，但部分细胞发生融合，因此一定要混合均匀，避免融合现象影响观察。
图19加入葡萄糖溶液后0min的显微状态（10×
由于葡萄糖溶液具有降低细胞表面表面张力的作用，因此会诱导细胞融合，所以视野中有细胞融合成团。
镜检结果：
图22加入葡萄糖溶液之后30min的显微状态（10×
更多的细胞发生破碎，标志大部分细胞的渗透压已经高于环境：
溶血率=10.0%
图21加入葡萄糖溶液之后20min的显微状态（10×
细胞开始出现破碎，内容物流出的现象，形成部分血影。
溶血率=7.5%
图24加入葡萄糖溶液之后50min的显微状态（10×
视野中，细胞溶血现象更加明显，在此段中，速度相对最快。
溶血率=30.0%
图23加入葡萄糖溶液之后40min的显微状态（10×
视野中，部分细胞边缘扭曲变形，细胞破裂的速度加快，出现更多的血影。
溶血率=13.3%
图25加入葡萄糖溶液之后60min的显微状态（10×
视野中，细胞悬液同样没有完全溶血，部分细胞仍然状态完整，轮廓清晰，预计完全溶血时间＞1h。
溶血率=40.5%
七、实验思考与总结
1.实验中有六组实验，其中四组完成速度较快，结果记录较为方便，而剩余两组：
丙三醇和葡萄糖溶液的实验之中，实验周期较长且实验记录较多，因此可以进行组内分工，分为两组更加高效的完成实验；
2.由于Triton-x试剂和甲醇溶液对于细胞反应的较为迅速，所以，完全溶血状态很难稳定准确的观察到，所以应该在滴加血细胞溶液之前，做好准备计时，加入后迅速混匀观察；
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