细胞与遗传学基础试验指导Word格式文档下载.docx
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(二)进入实验室要穿好白大衣。
(三)进实验室后要按学号对号入座,不能随意更换座位。
要保持肃静。
(四)要严肃认真地进行实验。
实验期间不得进行任何与实验无关的活动。
(五)实验中各种用品使用后应放回原处。
示教标本应按顺序观察,不能任意移动标本,以免妨碍他人观察。
(六)要爱护仪器、标本和器械,如有损坏,应及时报告老师,以便修理或更换。
损坏仪器、器械和标本者应按规定进行赔偿。
(七)要注意节约实验材料、药品和水、电等资源。
(八)保持实验室内清洁整齐。
实验废物及纸屑应放到指定地点,不得随意乱丢。
实验结束后要认真清理各自的实验台面,将器械清洗后点清数目并摆放整齐。
值日生负责清扫实验室,清扫结束后要关好水、电、门窗等,经教师允许方可离开实验室。
附:
实验课绘图要求学生每人准备一支HB铅笔、直尺和橡皮。
四、实验教学的内容
实验顺序
实验内容
实验一
普通光学显微镜的结构和使用
实验二
动物细胞的基本形态观察和显微测量
实验三
细胞组分的化学反应
实验四
线粒体的活体染色
实验五
液泡系的活体染色
实验六
细胞膜通透性的观察
实验七
细胞计数
实验八
细胞超微结构电镜照片的识别
实验九
细胞分裂
实验十
细胞的原代和传代培养
实验十一
细胞融合
第一次实验:
第二次实验:
第三次实验:
第四次实验:
细胞的原代和传代培养录像
常用实验动物的了解和解剖器械的使用
一、常用实验动物
常用的实验动物有蟾蜍、小白鼠、大白鼠、豚鼠、猫、兔和狗等。
在医学实验中,常常根据不同的实验目的而选用不同的动物进行实验研究。
例如,蟾蜍可以用于观察离体心脏搏动情况的实验,小白鼠常用于样本很大的实验(如药物的半数致死量的测定等),猫常用于测定脑内电位的实验,而狗是局解手术中常用的实验动物。
在我们细胞生物学实验中,除应用培养细胞外,最常用的动物是蟾蜍和小白鼠,下面对其特点及基本处置做一简单的介绍。
蟾蜍
蟾蜍是两栖类动物,由于其取材方便,常用于各种实验。
其细胞较哺乳类动物的细胞大得多,因此常用于观察细胞形态的实验。
1.雌雄鉴别
通常雄性蟾蜍较雌性的为小,且在其前肢的l~3趾基部有被称为婚垫的黑疣。
2.捉拿及处死方法:
常用捣髓法处死蟾蜍,即用解剖针捣毁其脑组织和脊髓。
具体方法是,左手握住蟾蜍的身体和四肢,使其腹部贴着掌心,食指压住蟾蜍头部前端使其尽量腹屈。
在头与躯干之间可触及一凹陷(即枕骨大孔所在处),右手持解剖针直插入此凹陷约l~2mm,随即将针尖转向头侧插入颅腔捣毁脑组织。
然后将解剖针抽回并转向尾侧刺入脊椎管内捣毁其脊髓。
如此直至其四肢松软,呼吸消失为止。
小白鼠
小白鼠是哺乳动物,是最为常用的实验动物。
1.捉拿方法:
将小白鼠放在鼠笼盖铁网上,用右手持其尾巴向后拉,小鼠则会尽力向前蹬。
用左手的拇指和食指抓住其头顶部皮肤,然后用左手小指与手掌之间夹住其尾巴。
2.处死方法:
处死应以安乐死为原则,即使之无痛苦而迅速死亡。
常用的方法有颈椎脱位法,断头法和二氧化碳吸入法等。
断头法需用特殊的断头器,二氧化碳吸入法则将小鼠放入盛有二氧化碳的容器内即可。
颈椎脱位法的具体方法是:
左手拇指和食指按住小白鼠的头部,左手捉住其尾巴迅速向后猛拉,使其颈椎脱位而立即死亡。
3.给药方法:
小自鼠的给药途径有经口给药、腹腔内注射、尾静脉注射、皮下注射、皮内注射和肌肉注射等。
我们常用的是腹腔注射。
具体方法是:
左手捉住小鼠(如前所述),在其腹正中线稍外侧(避开膀胱和血管)用酒精消毒后,首先将注射针头向头部方向刺入皮下,进针1~2mm后,再以45°
角刺穿腹部肌肉而进入腹腔(刺穿腹肌时有一落空感)。
针头刺入腹腔后切勿左右摆动,以免损伤肠管或肝脏。
注意每次注入的液体量应为0.1~0.2ml/10克体重。
二、常用手术器械及操作方法:
1.解剖针:
用于挑、刺等。
常用来捣髓处死蟾蜍,持法如执笔法。
2.解剖刀(即外科手术刀):
用于各种皮肤切口和组织切除等。
持法有执弓法与执笔法两种。
前者用于较大力量切开较长距离的坚韧的组织,如大动物的皮肤切口等;
后者则用于小力量的短距离切开,或分离皮肤和肌肉等。
3.大剪刀:
用于剪毛、皮肤、皮下组织和肌肉等。
持法如图。
4.眼科剪刀:
用于剪断神经、血管、筋膜等细软组织。
5.眼科镊子:
用于提取神经、血管和筋膜等细软组织。
6.钝头镊子:
用于提取脏器、组织等。
7.有钩镊子:
用于提取皮肤切口等。
常用手术器械
执刀方法
执镊姿势
执剪姿势
实验一普通光学显微镜的结构和使用
实验目的:
1.熟悉普通光学显微镜的主要构造及其性能。
2.掌握低倍镜及高倍镜的使用方法。
3.初步掌握油镜的使用方法。
实验用品:
1.普通光学显微镜、二甲苯、香柏油、擦镜纸。
2.羊毛装片、蛙血涂片、神经细胞标本。
实验内容:
一、光学显微镜的类型
光学显微镜,简称显微镜或光镜,是利用光线照明使微小物体形成放大影像的仪器。
400多年来,经不断改进,显微镜的结构和性能逐步完善,形成了品种繁多、型号各异的光学显微镜系列(图1—1)。
除了广泛使用的普通光镜外,还有相差显微镜、暗视野显微镜、荧光显微镜和倒置显微镜等具有特殊功能或用途的光镜。
形形色色的光学显微镜虽然外形和结构差异较大,但其基本构造和工作原理是相似的。
二、光学显微镜的结构
1.机械系统
(1)镜筒是安装在光镜最上方或镜臂前方的圆筒状结构或方形结构,其上端装有目镜,下端与物镜转换器相连(图1—2)。
(2)物镜转换器又称旋转盘,是安装在镜筒下方的一圆盘状结构,可以按顺时针或逆时针方向旋转,其上均匀分布有3~4个圆孔,用以装载不同放大倍数的物镜。
转动旋转盘可使不同的物镜到达工作位置(即与光路合轴),此时能听到“咔”的一声。
(3)镜臂是支持镜筒和镜台的弯曲状结构,是取用显微镜时握持的部位。
图1-2普通光学显微镜的结构示意图
(4)调焦器也称调焦螺旋,是调节焦距的装置,位于镜柱的下端,左右对称各一套。
分粗调螺旋(大螺旋)和细调螺旋(小螺旋)两种。
粗调螺旋可使载物台以较快速度或较大幅度升降,能迅速调节好焦距,使物像呈现在视野中,适于低倍镜观察时的调焦。
细调螺旋只能使载物台缓慢或较小幅度地升降,升或降的幅度不易被肉眼观察到,适用于高倍镜和油镜焦距的精细调节;
也常用于观察标本的不同层次,一般在粗调螺旋调焦的基础上使用。
有些类型的光镜,在左侧粗调螺旋的内侧有一窄环,称为粗调松紧调节轮,其功能是调节粗调螺旋的松紧度。
另外,在右侧粗调螺旋的内侧有一粗调限位凸柄,当用粗调螺旋调准焦距后向上推紧该柄,可使粗调螺旋限位,此时镜台不能继续上升,但细调螺旋仍可调节。
(5)载物台也称镜台,是位于物镜转换器下方的方形平台,用于放置被观察的玻片标本。
载物台的中央有圆形的通光孔,来自下方的光线经此孔照射到标本上。
在载物台上装有标本移动器,也称推进器或推进尺,其上安装的弹簧夹用于固定玻片标本,载物台的左下方的两个螺旋可以移动推进器,可使玻片标本在水平面上前后左右移动,用来寻找目标。
(6)镜柱是连接镜臂与镜座的短柱,其上有调焦器。
(7)镜座位于最底部,是整台显微镜的基座,用于支持和稳定镜体。
在镜座内装有照明光源。
2.光学系统
光学系统包括目镜和物镜。
(1)目镜又称接目镜,安装在镜筒的上端,起着将物镜所放大的物像进一步放大的作用。
每个目镜一般由两个透镜组成,在上下两个透镜(即接目透镜和会聚透镜)之间安装有能决定视野大小的金属光阑——视场光阑,此光阑的位置即是物镜所放大实像的位置。
因此,可将一小段细金属丝或头发粘附在光阑上作为指针,用以指示视野中的某一部分供他人观察。
另外,还可在光阑的面上安装目镜测微尺。
每台显微镜通常配置2~3个不同放大倍数的目镜,如“5×
”、“10×
”和“15×
”(数字表示放大倍数)目镜,可根据不同需要选择使用,最常使用的是“10×
”目镜。
(2)物镜也称接物镜,安装在物镜转换器上。
每台光镜一般有3~4个不同放大倍数的物镜,每个物镜由数片凸透镜组合而成,是显微镜最主要的光学部件,决定着光镜分辨力的高低。
常用物镜的放大倍数有“10×
”、“40×
”和“100×
”等几种。
一般将“10×
”物镜称为低倍镜(而将“5×
”及以下的叫做放大镜),将“40×
”或“45×
”物镜称为高倍镜,将“100×
”物镜称为油镜(这种镜头在使用时其顶端需浸在香柏油中)。
在每个物镜的侧壁通常都标有能反映其主要性能的参数(图1—3),主要有放大倍数和数值孔径(如10/0.25、40/0.65、100/1.25)、该物镜所要求的镜筒长度和标本上的盖玻片厚度(160/0.17,单位为mm);
另外,在油镜上还常标有“油”或“oil”字样。
玻片上表面
物镜头与玻片标本之间的介质一般为空气。
由于玻璃与空气的折光率不同,光线通过载玻片和空气进入物镜,部分光线产生折射而损失掉,导致进入物镜的光线减少,分辨率降低。
而油镜用香柏油或石蜡油作为介质,香柏油或石蜡油折射率与玻璃近似(玻璃、香柏油和石蜡油的折射率分别为1.52、1.51和1.46,空气为1),可减少光线的折射,增加视野亮度,提高分辨率。
物镜分辨率还和数值孔径有关,其数值越大,分辨率越高。
不同物镜有不同的工作距离,所谓工作距离是指显微镜处于工作状态(焦距调好、物像清晰)时,物镜最下端与玻片上表面之间的距离(图1—3)。
物镜的放大倍数与其工作距离成反比。
当低倍镜被调节到工作距离后,可直接转换高倍镜,只需旋动细调螺旋,便可见到清晰的物像,这种情况称为同高调焦。
不同放大倍数的物镜可从长短上加以区分,一般来说,低倍镜最短,油镜最长,而高倍镜的长度介于两者之间。
显微镜的放大倍数是目镜的放大倍数和物镜的放大倍数的乘积。
3.照明系统
(1)聚光器位于载物台通光孔的下方,由2~3个透镜组合而成,其主要功能是将光线集中到所要观察的标本上,增加视野的亮度。
在聚光器的左下方,有一调节螺旋,可使其上升或下降,从而调节光线的强弱。
升高聚光器可使聚光作用增强,反之则聚光作用减弱。
(2)光圈也称彩虹光阑或孔径光阑,位于聚光器的下端,是能够控制进入聚光镜光束大小的可变圆环结构。
它由十几张金属薄片组合排列而成,