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第二章药物的鉴别实验

一般鉴别实验：

是依据某一类药物的化学结构或理化性质的特征，通过化学反应来鉴别药物的真伪。

（只能证实是某一类药物，而不能证实是哪一种药物）

1有机氟化物的鉴别

经氧瓶燃烧法破坏，被碱性溶液吸收成无机氟化物，与茜素氟蓝、硝酸亚铈在PH4.3溶液中形成蓝紫色络合物。

2有机酸盐

水杨酸盐与三氯化铁生成配位化合物，中性红色，弱酸紫色。

加稀盐酸，析出白色水杨酸沉淀；

分离，沉淀在醋酸铵试液中溶解。

酒石酸盐加氨制硝酸银试液数滴，水浴加热，试管内壁成银镜。

3芳伯氨基反应

加稀盐酸煮沸，加等体积的亚硝酸钠和脲溶液数滴，振摇1分钟，滴加碱性B-萘酚试液数滴，生成由粉色到猩红色沉淀。

4托烷生物碱类

发烟硝酸5滴，水浴蒸干，得黄色残渣，放冷，加乙醇2-3滴湿润，加固体氢氧化钾一粒，显深紫色。

5无机金属盐

焰色反应钠盐鲜黄色钾盐紫色钙离子砖红色钡离子黄绿色绿色玻璃中透视蓝色

铵盐加过量的氢氧化钠试液后，加热，即分解，发生氨臭；

遇到润湿的红色石蕊试纸，变蓝，并能使硝酸亚汞试液润湿的滤纸显黑色。

6无机酸根

氯化物法一：

用稀硝酸酸化后，滴加硝酸银，生成白色凝乳状沉淀；

分离，沉淀加氨试液溶解，再加稀硝酸酸化后，沉淀再次生成。

法二：

加与供试品等量的二氧化锰，混匀，加硫酸润湿，缓慢加热，即产生氯气，能使润湿的碘化钾试纸变蓝。

硫酸盐法一：

加氯化钡试液，产生白色沉淀；

分离，沉淀在硝酸或盐酸中均不溶解。

加醋酸铅试液，产生白色沉淀，分离；

沉淀在醋酸铵试液或氢氧化钠试液中溶解。

法三：

加盐酸，不生成白色沉淀（与硫代硫酸盐区别）

硝酸盐法一：

加与供试品等量的硫酸，小心混合，冷却后，沿管壁加硫酸亚铁试液，分层，接界面显棕色。

加硫酸与铜丝，加热，发出红棕色的蒸气。

滴加高锰酸钾试液，紫色不褪去（与亚硝酸盐区别）

专属鉴别实验：

是根据每一种药物化学结构的差异及其所引起的物理化学特性不同，选用某些特有的灵敏的定性反应，来鉴别药物的真伪。

区别：

一般鉴别试验是以某些类别药物的共同化学结构为依据，根据其相同的物理化学性质进行药物真伪的鉴别，以区别不同类别的药物。

而专属鉴别试验，则是在一般鉴别试验的基础上，利用各种药物的化学结构差异，来鉴别药物，以区别同类药物或具有相同化学结构部分的各个药物单体，达到最终确证药物真伪的目的。

一、化学鉴别法

1.呈色反应鉴别法

1.酚羟基的三氯化铁呈色反应

2.芳伯氨基的重氮化-偶合反应

3.托烷生物碱类的Vitali反应

4.肾上腺皮质激素类的四氮唑反应

5.含羰基结构的苯肼反应

6.氨基苷及氨基糖苷类的茚三酮反应

7.氨基醇结构的双缩脲反应

2.沉淀生成反应鉴别法

1.丙二酰脲类的硝酸银反应

2.氯化物的银盐沉淀反应

3.含氮杂环类的生物碱沉淀剂

3.荧光反应鉴别法

硫酸奎宁的稀硫酸溶液显蓝色荧光

4.气体生成反应鉴别法

1.酰胺类药物经强碱加热产生氨气（巴比妥类药物）

2.含硫的药物经强酸处理后加热产生硫化氢气体（盐酸雷尼替丁）

4.使试剂褪色的鉴别法

司可巴比妥钠的碘试液反应

二、光谱鉴别法

1.测定最大吸收波长，或同时测定最小吸收波长；

2.规定一定浓度的供试液在最大吸收波长处的吸光度；

3.规定吸收波长和吸收系数法；

4.规定吸收波长和吸收度比值法；

5.经化学处理后，测定其反应产物的吸收光谱特征。

三、色谱鉴别法

TLC薄层色谱

第三章药物的杂质检查

药物杂质的来源：

1生产过程中引入的杂志2贮藏过程中引入的杂质

药物杂质的分类：

1按来源分为一般杂质和特殊杂质

一般杂质：

是指在自然界中分布较广泛，在多种药物的生产和贮藏过程中容易引入的杂质。

特殊杂质：

是指在特定药物的生产和贮藏过程中引入的杂质，也常称为有关物质，这类杂质随药物的不同而不同。

2按毒性分为毒性杂质（重金属和砷盐）和信号杂质（信号杂质一般无毒，但其含量可反映出药物的纯度、生产工艺水平以及生产过程中的问题。

）

杂质限量：

是指药物中所含杂质的最大允许量。

杂质限量的控制方法：

限量检查法采用对照法灵敏度法比较法

定量测定法

杂质的常用检查方法：

色谱方法

1薄层色谱法TLC

（1）杂质对照品法：

适用于已知杂质并能制备杂质对照品的情况。

（2）供试品溶液的自身稀释对照法：

适用于杂质的结构不确定；

或者虽然杂质结构已知，但是没有杂质对照品的情况。

（3）两法并用法：

当药物中存在多个杂质时，若已知杂质有对照品，则采用杂质对照品法检查；

共存的未知杂质或没有对照品的杂质，则可同时采用供试品溶液的自身稀释对照法检查。

（4）对照药物法：

当无适合的杂质对照品，或者是供试品显示的杂质斑点颜色与主成分斑点颜色有差异，难以判断限量时，可采用与供试品相同的药物作为对照。

2高效液相色谱法

（1）外标法：

适用于有杂质对照品，而且进样量能够精确控制的情况。

（2）加校正因子的主成分自身对照法：

仅适用于已知杂质的控制。

（3）不加校正因子的主成分自身对照法：

仅适用于没有杂质对照品的情况。

3气相色谱法药物中挥发性杂质的检查

4毛细管电泳法多肽，酶类药物中杂质的检查。

药物中一般杂质的检查：

一、氯化物检查法

1.原理：

药物中的微量氯化物在硝酸酸性条件下与硝酸银反应，生产氯化银胶体微粒而显白色浑浊，与一定量的标准氯化钠溶液在相同条件下产生的氯化银浑浊程度进行比浊。

2.方法：

供试品→加水溶解→加稀硝酸→加水稀释

加入硝酸银试液，比浊

适量标准氯化钠溶液→加稀硝酸→加水稀释

3.注意事项：

加硝酸可避免弱酸银盐的干扰，且可加速氯化银沉淀的生成并产生较好的乳浊；

供试品若带有颜色，可采用内消色法消除干扰（供试品＋硝酸银后过滤＋标准氯化钠作为对照）

二、铁盐检查法

铁盐在盐酸酸性溶液中与硫氰酸盐作用生成红色可溶性的硫氰酸铁配离子，与一定量标准铁溶液用同法处理后进行比色。

供试品→加水溶解→加稀盐酸和过硫酸铵→加水稀释

适量标准铁溶液→加稀盐酸和过硫酸铵→加水稀释

分别加过量硫氰酸铵溶液，加水定量后比色

在盐酸酸性条件下，可防止三价铁离子的水解；

加入过硫酸铵氧化剂既可将供试品中的二价铁氧化为三价铁，又可以防止由于光线使硫氰酸铁还原或分解褪色；

加入过量的硫氰酸铵，不仅可以增加生成配位离子的稳定性，提高反应灵敏度，还能消除其他阴离子与铁盐形成配位化合物而引起的干扰。

三、重金属检查法

第一法硫代乙酰胺法：

适用于溶于水，稀酸或与水互溶的有机溶剂，并且不含有可与金属离子强配位基团的药物。

硫代乙酰胺在弱酸性PH=3.5条件下水解，产生硫化氢，与重金属离子生成黄色到棕黑色的硫化物混悬液，与一定量标准铅溶液经同法处理后所呈颜色比较。

甲管（标准管）：

准铅溶液→加入醋酸盐缓冲液（PH3.5）→加水稀释定容

乙管（供试品管）：

供试品溶液稀释定容

丙管（标准加样管）：

供试品→加水溶解→标准铅溶液→加入醋酸盐缓冲液（PH3.5）→加水稀释定容

分别加入硫代乙酰胺试液比色

结果：

当丙管颜色不浅于甲管使，乙管的颜色与甲管比，不得更深。

加硝酸防止铅盐水解，便于保存；

供试品若带有颜色，用外消色法消除影响（在加硫代乙酰胺试液前，在甲管滴加少量稀焦糖溶液或其他带颜色无干扰的溶液，使之与乙管，丙管保持颜色一致。

）；

供试品若用强酸溶解，在加硫代乙酰胺试液前应先加氨水至溶液对酚酞指示液显中性，在加醋酸缓冲液调节酸度。

第二法炽灼后的硫代乙酰胺法：

适用于难溶于水，稀酸或与水互溶有机溶剂的有机药物，以及含有可与金属离子强配位基团的芳环，杂环药物。

重金属可能会与含有强配位键的芳环、杂环药物形成牢固的价键作用，影响直接溶样检查；

或者提供试品不溶解，可能包裹重金属。

这时，需要将供试品炽灼破坏为重金属的氧化物残渣，并加硝酸进一步破坏，蒸干。

加盐酸转化为易溶于水的氯化物，再按第一法进行检查。

供试品炽灼破坏后，加硝酸进一步破坏，蒸干，加盐酸转化为易溶于水的氯化物，再按第一法检查。

温度越高，重金属损失越多；

加硝酸加热处理后，必须蒸干，除尽氧化氮，否则亚硝酸可氧化硫化氢析出硫，影响比色。

第三法硫化钠法：

本法适用于溶于碱性水溶液而难溶于稀酸或在稀酸中即生成沉淀的药物。

原理：

在碱性介质中，以硫化钠为沉淀剂，使铅离子生成硫化铅微粒的混悬剂，与一定量标准铅溶液经同法处理后所呈颜色比较，判断供试品中重金属是否符合限量规定。

四、砷盐检查法

砷盐为毒性杂质，须严格控制其限量

古蔡氏法

金属锌与酸作用产生新生态的氢，与药物中微量砷盐反应生成具挥发性的砷化氢，遇溴化汞试纸，产生黄色至棕色的砷斑，可用于砷盐的检查。

标准砷斑的制备标准砷溶液→加盐酸，水→加碘化钾试液，酸性氯化亚锡试液→加入锌粒→水溶45min

样品砷斑的制备：

供试品溶液→加盐酸，水→加碘化钾试液，酸性氯化亚锡试液→加入锌粒→水溶45min

比较砷斑颜色

碘化钾及氯化亚锡的催化作用：

1.加入碘化钾及氯化亚锡将五价砷还原为三价砷；

2.产生的锌离子能形成稳定的配位离子，有利于生成砷化氢的反应不断进行；

3.氯化亚锡可与锌作用，在锌粒表面形成锌锡齐，起去极化作用，从而使氢气均匀而连续的发生；

4.氯化亚锡与碘化钾可抑制锑化氢的生成；

醋酸铅棉花吸收硫化氢气体；

含硫药物的预处理：

供试品若为硫化物，亚硫酸盐，硫代硫酸盐等，在酸性溶液中生成硫化氢或二氧化硫气体，干扰砷斑检查。

预先加硝酸湿法消化处理，使硫化物氧化成硫酸盐，可消除干扰。

五、干燥失重测定法

1.常压恒温干燥法：

本法适用于受热较稳定的药物105℃

2.减压干燥法与恒温减压干燥法：

本法适用于熔点低或受热分解的供试品

减压干燥器恒温减压干燥箱

3.干燥剂干燥法：

本法适用于受热分解或易升华的供试品。

常用干燥剂：

变色硅胶五氧化二磷硫酸

六、水分测定法

1.费休氏法原理：

碘氧化二氧化硫为三氧化硫时，需要一定量的水分参与反应，根据定量反应关系和消耗碘的重量，可计算出参与反应的水分含量。

无水吡啶和无水甲醇既参与反应又发挥溶剂的作用；

反应完毕后多余的游离碘呈现红棕色，即可确定为终点。

2.费休氏试液的配制：

碘+二氧化硫+无水吡啶+无水甲醇

七、炽灼残渣检查法

炽灼残渣是指有机药物或挥发性无机药物，在硫酸存在的条件下，进行炭化和炽灼后，所残留的非挥发性的硫酸盐灰分。

通常用于有机药物中非挥发无机杂质的检查与控制。

1.方法：

取供试品，置已炽灼至恒重的坩埚中，加硫酸使润湿，缓缓低温加热至炭化