最新AB7500荧光定量PCR仪使用维护校准标准操作规程.docx

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最新AB7500荧光定量PCR仪使用维护校准标准操作规程

AB7500荧光定量PCR仪使用、维护、校准标准操作规程

文件名称

AB7500荧光定量PCR仪使用、维护、校准标准操作规程

使用维护标准操作规程

颁发部门

制订人：

复核人：

批准人：

质保部

制订日期：

复核日期：

批准日期：

执行日期

版本

1.0

编号

SOP04006

制作份数

_____份

发送部门

修订记录

修订人

修订原因

修订内容

版本

修订日期

1.目的：

确保荧光定量PCR仪能够正确和正常的使用，保证扩增及结果分析的标准化、标准化。

2.范围：

适用于AB7500荧光定量PCR仪的使用及维护。

3.定义：

无

4.职责：

荧光定量PCR仪使用人员负责本规程的实施。

质保部对本规定的有效执行承当监督检查责任。

5.内容：

5.1室内温度控制在15～30℃，相对湿度45～75%。

5.2仪器操作

5.2.1依次翻开电脑显示器和电脑主机的电源开关，进入Windows界面。

5.2.2接着翻开AB7500仪器电源开关，预热10分钟。

5.2.3点击7500Softwarev2.3图标，翻开软件。

5.2.4按压仪器托盘上的按压位，待托盘弹出后，将所需检测的8联PCR反响管或者96孔PCR反响板放入检测孔位，记下放置位置。

检测8联PCR反响管用**反响孔模块，检测96孔PCR反响板用**反响孔模块。

〔检测8联PCR反响管需放入盖紧管盖的空8联PCR反响管配平，检测96孔PCR反响板无需配平〕

5.2.5再次按压托盘使其滑入仪器。

5.2.6新建扩增参数模板：

例如新建一个UG-63-62的模板，扩增参数是95°，10′；〔95°，10″；63°，45″〕×5cycles；〔95°，10″；62°，35″〕×40cycles，在62°时收集荧光信号〔HEX、FAM信号〕，20μl反响体系。

5.2.6.1在Setup-PlateSetup-DefineTargetsandSamples中，将TargetName下的Target1改成FAM；点击AddNewTarget，将新增的Target1改成HEX，点击Reportee下拉菜单，选择VIC。

5.2.6.2在Setup-RunMethod-GraphicalView中的ReactionVolumePerWell后面输入20

5.2.8在Setup-PlateSetup-AssignTargetsandSamples中选择8联管摆放的位置，全部勾选Sample1；UGT1A1*6勾选HEX，UGT1A1*28勾选FAM。

5.2.9在Run-AmplificationPlot中点击STARTRUN，命名为20220221-1〔当日日期+当日上机次数，例:

2022年1月1日第1次上机编号为20220221-1〕，保存在默认文件夹中，开始运行。

5.2.10结果分析

5.2.10.1PCR反响结束后自动保存结果，对扩增曲线进行分析。

5.2.10.2也可根据分析后图像调节Baseline的Start值、End值以〔用户可根据实际情况自行调整，Start值可以在3～15、End值可设在5～20〕，Threshold值〔Rn〕推荐设定为5000～15000，点击Analyze进行分析，然后到Plate窗口下记录每个反响的Ct值。

5.2.11实验结束后取出反响管〔切勿翻开管盖〕，顺序关闭AB7500软件、定量PCR仪电源，关闭电脑。

5.3仪器维护

5.3.1每周维护

5.3.1.1检查计算机磁盘空间。

如需要，将实验文件归档或备份。

•至少每周检查一次计算机磁盘空间。

•如果硬盘的可用空间缺乏其总容量的20%，应将较陈旧的数据传输到备份存储设备上保存。

5.3.1.2关闭控制7500Instrument的计算机，30秒后再次开启计算机。

5.3.1.3用无绒布块〔不脱毛〕蘸取75%酒精清洁7500Instrument的外表。

〔注：

切勿使用有机溶剂清洁7500Instrument。

〕

5.3.1.4使用75%酒精浸泡反响管托架〔晾干后放回仪器内〕。

5.3.2每月维护

5.3.2.1执行背景校准。

〔可执行一次背景校准以检查是否存在污染物〕

5.3.2.2运行磁盘清理和磁盘碎片整理。

•至少每月一次。

•当Windows®操作系统显示消息提示执行碎片整理时。

•切勿同时运行磁盘管理实用工具和7500Real-TimePCRSoftware。

5.3.3每半年〔6个月〕维护

5.3.3.1检查灯具状态。

①在7500Software中，选择Instrument→LampStatus/Replacement以确定卤素灯的状态。

显示LampStatus/Replacement对话框：

•Condition–表示以下其中一种状况：

–Good–灯具工作良好，不需要更换。

单击Close。

–Failed–必须更换灯具。

单击Close，然后按照5.3.4.3步骤更换卤素灯。

–ChangeSoon–灯具使用超过2000小时；生产商建议将其更换。

单击Close，然后决定是否更换灯具。

如果断定更换，请按照5.3.4.3步骤更换卤素灯。

•Usage（Hours）–灯具已照明的总小时数。

•LampCurrent–灯具的输出电流，以安培为单位（A）。

低电流意味着灯具可能将要失效。

•DateLastReplaced–上次更换灯具的日期。

②在执行一次运行之前或期间，7500Software可能显示以下警告：

消息

描述

Warning–Cannotdetectsufficientcurrentfromlamp.Eitherlampisnotinstalledproperlyorneedstobereplaced.

在运行开始时，灯具电流低于可接受水平。

在按照5.3.4.3步骤更换卤素灯具之前，无法继续该运行。

Warning–Cannotdetectsufficientcurrentfromlamp.Eitherlampisnotinstalledproperlyorneedstobereplaced.

7500Software停止了该次运行，因为在运行中灯具电流下降到可接受水平之下。

在按照5.3.4.3步骤更换卤素灯具之前，无法继续该运行。

在消息框中单击OK，检查仪器日志，然后更换灯具。

Warning-Thelampusagehasexceeded2000hr.Werecommendreplacingthelampsoontoensureoptimalassayperformance.

在运行开始时，灯具使用时间超过2000小时。

单击CancelRun，然后更换灯具，或者单击ContinueRun。

重新运行ROI、背景、光学和染料校准。

5.3.3.2执行目标区〔ROI〕校正。

5.3.3.3执行背景校准。

5.3.3.4执行光学校准。

5.3.3.5执行染料校准。

5.3.3.6执行RNaseP仪器验证试验。

5.3.4其它维护任务〔需要时执行〕

5.3.4.1样本块污染去除。

执行以下程序，去除7500Instrument样本块的荧光污染。

荧光污染是导致背景运行失败的常见原因，在此情况下，一个或多个反响孔会持续表现出异常的高信号。

注意！

切勿移去设备上的盖板。

7500Instrument中没有用户可平安维修的组件。

如果疑心存在问题，请联系生产商效劳代表。

①全程戴上一次性无粉手套操作。

②找到样本块中受污染的反响孔〔参阅5.4.2.13“如何确定污染〞〕。

③从7500Real-TimePCRInstrument中取出反响板和托盘支架。

a.按压托盘门，将其翻开。

b.取出反响板和托盘支架。

c.关闭托盘门。

以一定角度向托盘右侧施加压力。

④手动降低样本块：

a.在7500Software中，选择Instrument→InstrumentMaintenanceManager。

b.在InstrumentMaintenanceManager的ROI选项卡中，单击StartManualCalibration。

c.在ROIInspector对话框中，单击MoveBlock。

d.当ROIInspector对话框显示“BlockDown〞时，单击Done。

⑤关闭7500Real-TimePCRInstrument，然后拔下其电源电缆。

允许仪器冷却15分钟。

⑥翻开7500Real-TimePCRInstrument的检查门。

a.将薄型螺丝刀插入检查门边缘处的键销孔内，然后推动以解开门栓。

b.翻开仪器前门。

⑦抬起门栓，然后将受热的护盖门推到仪器的反面。

⑧使用少量的双蒸水，清洁样本块中被污染的反响孔：

a.用移液管吸取少量双蒸水并滴入每个受污染的反响孔中。

b.抽吸并滴入反响孔中的双蒸水数次，以冲洗反响孔。

c.将用过的双蒸水水吸入废液瓶中。

d.使用棉花拭子，擦试每个被污染的反响孔的内壁。

e.使用无绒布料，吸出剩余的双蒸水。

⑨7500Real-TimePCRInstrument将受热的护盖门拉到仪器的正面。

抬起门栓，然后将受热的护盖门紧固到交叉杆。

⑩翻开7500Real-TimePCRInstrument的检查门。

⑪插上电源插头并开启7500Instrument。

⑫通过执行背景校准运行确认已消除污染〔参阅5.4.2“背景校准〞〕。

⑬如果污染仍然存在，重复步骤②至⑦，然后使用95%乙醇溶液清洁样本块中受污染的反响孔：

a.用移液管吸取少量95%乙醇溶液并滴入每个受污染的反响孔中。

b.抽吸并滴入反响孔中的溶液数次，以冲洗反响孔。

c.将用过的乙醇溶液吸入废液瓶中。

重要！

使用漂白剂溶液或乙醇溶液清洁反响孔之后，应始终使用双蒸水冲洗反响孔。

⑭重复步骤⑧至⑫，以冲洗样本块的反响孔，并验证已去除掉污染物。

⑮如果污染仍然存在，重复步骤②至⑦，然后使用10%漂白剂溶液清洁样本块中受污染的反响孔：

a.用移液管吸取少量10%漂白剂溶液并滴入每个受污染的反响孔中。

b.抽吸并滴入反响孔中的溶液数次，以冲洗反响孔。

c.将用过的漂白剂溶液吸入废液瓶中。

重要！

使用漂白剂溶液或乙醇溶液清洁反响孔之后，应始终使用去离子水冲洗反响孔。

⑯重复步骤⑧至⑫，以冲洗样本块的反响孔，并验证已去除掉污染物。

如果仍有污染，请与生产商技术支持联系。

⑰确保受热盖门完全关闭并上闩。

如果没有，那么7500Software显示错误消息。

5.3.4.2移动PCR仪。

〔更换或移动光学器件的任何部件后，必须执行ROI校准、背景校准、光学校准、染料校准以及RNaseP仪器验证。

〕

5.3.4.3更换卤素灯。

①全程戴上一次性无粉手套操作。

②关闭7500Instrument，然后拔下其电源电缆。

允许仪器冷却15分钟。

a.注意！

灼热。

7500Instrument和灯具灼热！

灯具在使用中会变得非常灼热。

在处理灯具之前，应允许灯具冷却15分钟，并戴上无粉防护手套。

b.重要！

为防止灼伤及缩短新灯具的使用寿命，处理灯具时请戴上一次性无粉手套。

c.注意！

7500Instrument按设计仅可使用12V、75