THP-1-细胞培养文档格式.docx

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THP-1是人外周血的单核细胞系，最初来源于急性单核细胞性白血病患者。

属于悬浮细胞，适合用于转染或感染实验。

其表面抗原HLA型为：

A2，A9，B5，DRw1，DRw2。

工具/原料

·

培养基：

RPMI-1640（Invitrogen#11875-093）

胎牛血清：

FetalBovineSerum（FBS,GIBCO#10099-141）

二甲亚砜：

DMSO（SIGMAD2650）

双抗P/S（Penicillin/Streptomycin）（GIBCO#15140-122）

方法/步骤

1.1

细胞培养：

THP-1细胞培养于含有10%FBS+1%P/S的RPMI-1640培养基中，培养环境为37℃，5%CO2。

可以每隔3-4天加一些新鲜的培养基，或直接传代。

2.2

细胞传代：

当细胞密度达到约8x10^5cells/ml左右时，即可进行传代。

由于是悬浮细胞，可直接将细胞吸出，离心之后传代。

传代最少浓度不应少于1x10^5cells/ml。

3.3

细胞冻存：

取差不多1x10^7个细胞，用1ml含有10%DMSO的FBS重悬，转入冻存管，于-80℃冰箱过夜。

第二天移入液氮中长期保存。

END

注意事项

细胞养不好，可能的原因有，THP-1细胞特别依赖细胞浓度，ATCC上105到106每ML，是一个很高的密度，细胞少了就不太容易养好。

细胞株的来源很重要，如直接来源于ATCC（AmericanTypeCultureCollection美国模式菌种保藏中心）生命力要强于国内细胞库的。

注意细胞的密度一定要高，介于5×

105——106/ML之间，增值的快。

细胞数量太少，不适合THP-1生长，一般状态不好的THP-1在培养了3天后数量仍然不多，继续培养一天或者两天，培养基严重泛黄，细胞数会增加。

这一点不同于同是单核细胞系的U937细胞。

THP-1细胞适合在细胞Ph环境偏酸性环境生长，对培养基变化非常敏感，所以尽量使用相同Ph的1640。

传代后切忌常移出培养箱观察，否则会影响细胞生长，状态变差，一般首先表现为细胞内颗粒变多。

一般THP-1生长相当快，对于状态已经不好的情况，建议传代后3～4天再观察，一般4天时间培养基已明显泛黄，细胞数量巨增;

1）THP-1细胞喜欢酸性条件，你不要老是换培养基。

越酸的条件，细胞密度越大，细胞就长得越好;

2）不要频繁换液，一般2-3次换液离心一次（只是补充培养基）3）使用1640（ATCC推荐），注意加碳酸氢钠2.5g就可以了，宁酸勿碱;

4）注意冻存的时候密度大些，推荐用血清冻存。

复苏比较慢，建议开始用小瓶，不要用一次性的。