杞菊地黄丸定性检查及含量测定.docx

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杞菊地黄丸定性检查及含量测定

杞菊地黄丸定性检查及含量测定

前言：

实验依据：

有熟地之腻补肾水,即有泽泻之宣泄肾浊以济之;有英肉之温涩肝经,即有丹皮之清泻肝以佐之;有山药收摄脾经,即有获菩之淡渗脾湿以和之。

药止六味,而大开大合,三阴并治,询补方之正鹊也”。

本方配伍具有“三补”、“三泻”的特点,但中熟地黄用量是山萸肉、山药两药之和,且三辛佣明显重于三泻。

枸杞和菊花增加了清肝明目的效果。

现对杞菊地黄丸中各味药材进行定性鉴别和含量测定。

关键词;杞菊地黄丸；定性鉴别；含量测定；

1.地黄（鲜跃全）

定性鉴别（TLC法）

实验仪器：

超声发生器、研钵、烧杯、微量移液管、、吹风机、研钵、烧杯、硅胶G薄层板、

实验材料：

杞菊地黄丸熟地黄泽泻茯苓枸杞子牡丹皮山茱萸山药细粉菊花

实验试剂：

乙酸乙酯、冰醋酸、10%硫酸、蒸馏水正丁醇、甲苯、冰醋酸、无水乙醇、10%硫酸、蒸馏水

试验方法

1.1供试品溶液的制备

1.1.1取杞菊地黄丸（浓缩丸）6g，研碎，加乙醇超声处理分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇使溶解，作为供试品溶液。

1.1.2供试品溶液的制备

称取颗粒剂2.2g，研磨成细粉，加甲醇40ml，超声振荡30min。

过滤。

滤液浓缩至干,加乙酸乙酯2ml溶解,得供试液。

1.2对照品的制备

另取毛蕊花糖苷对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

1.3对照药材的制备

称取熟地黄浸膏粉0.5g，按照供试品溶液制备方法，制得熟地黄药材的对照液。

1.4阴性对照液的制备

按处方比例，取除去熟地黄以外的其余药材，同供试品溶液制备方法分别制成阴性对照液。

称取泽泻0.75g、茯苓0.75g，30ml水加热回流提取1个小时，过滤，提取液浓缩至一定浓度；取枸杞子0.5g、牡丹皮0.75g,山茱萸1g和菊花0.5g，70%乙醇加热回流提取1个小时，过滤，浓缩成适当浓度；合并以上两种浓缩液，加山药细粉1g；加70%乙醇20mL，加热回流提取1个小时，滤过，蒸干，加适量水溶解，分别用10ml乙酸乙酯萃取两次，合并萃取液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为阴性对照溶液。

1.5薄层色谱法

1.5.1照薄层色谱法《中国药典》（2010年版）附录YIB试验，吸取上述溶液各5uL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯—乙酸乙醋—冰醋酸（（24:

8:

1）为展开剂展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。

1.5.2薄层色谱照薄层色谱法《中国药典》（2010年版）附录YIB试验，吸取上述溶液各5uL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水-甲醇（6∶3∶3∶2）为展开剂展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，显相同颜色的斑点且阴性对照液色谱在该位置上不显斑点。

2.山药（周开放）

【性味与归经】味甘，性平。

归脾、肺、肾经。

【功能与主治】补脾养胃，生津益肺，补肾涩精。

实验材料：

回流装置、冷凝装置、水浴锅、坩埚、烧杯、微量移液管、硅胶G薄层板、吹风机。

实验试剂：

乙酸乙酯、甲醇、浓氨试液、无水乙醇、10％磷钼酸。

试验方法

2.1供试品溶液的制备

取本品（杞菊地黄丸）粉末5g，加二氯甲烷30ml，加热回流2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加二氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。

2.2对照品的制备

另取山药对照药材5g，同法制成对照药材溶液。

对照药材加二氯甲烷同法制成对照药材溶液。

2.3阴性对照液的制备  

按处方比例，取除去山药以外的其余药材，同供试品溶液制备方法分别制成阴性对照液。

1.称取泽泻0.75g、茯苓0.75g和熟地黄2g，30ml水加热回流提取1个小时，过滤，提取液浓缩至一定浓度；

2.取枸杞子0.5g、山茱萸1g、牡丹皮0.75g和菊花0.5g，70%乙醇加热回流提取1个小时，过滤，浓缩成适当浓度；

3.合并以上两种浓缩液;加70%乙醇20 mL，加热回流提取1个小时，滤过，蒸干，加适量水溶解，分别用10ml乙酸乙酯萃取两次，合并萃取液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为阴性对照溶液。

2.5薄层色谱法试验

照薄层色谱法《中国药典》（2010年版）附录YIB试验，吸取上述溶液各5uL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液（9：

1：

0.5）为展开剂展开，取出，晾干，喷以10％磷钼酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点且阴性对照液色谱在该位置上不显斑点。

3.茯苓（刘保松）

实验器材：

50ml圆底烧瓶，冷凝管，蒸发皿，水浴锅，过滤装置，硅胶G薄层板，紫外检测仪，吹风机

实验材料：

茯苓对照药材、杞菊地黄丸

实验试剂：

乙醚，甲醇，甲苯，乙酸乙酯，甲酸，2%香草醛硫酸溶液，乙醇。

3.1供试品溶液制备

取杞菊地黄丸浓缩丸6g，研碎，加乙醚50ml（量筒），超声处理10分钟，滤过（滤纸，漏斗），滤液蒸干（蒸发皿，水浴锅），残渣加甲醇1ml使溶解（移液管），作为供试品溶液。

3.2对照品药材制备

取茯苓对照药材1g，同法制成对照药材溶液。

3.3阴性对照溶液制备

按处方比例，取除去茯苓以外的其余药材，同供试品溶液制备方法制成缺茯苓阴性对照液。

3.4薄层色谱法试验

照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯一乙酸乙酯一甲酸（（20：

5：

0.5）为展开剂（移液管），展开，取出，晾干，喷以2%香草醛硫酸溶液一乙醇（4：

1）混合溶液，在105℃加热至斑点显色清晰（吹风机）。

供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。

或者照薄层色谱法（中国药典20015年版中国药典）试验，吸取上述溶液各5uL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯一乙酸乙酯一冰醋酸（（24:

8:

1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。

供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

4.泽泻（王金龙）

实验器材：

氧化铝柱，水浴锅，蒸发皿，过滤装置，硅胶H薄层板，紫外检测仪，吹风机

实验材料：

泽泻对照药材、杞菊地黄丸

实验试剂：

乙酸乙酯，23-乙酰泽泻醇B对照品，环己烷，乙酸乙酯，5%硅钨酸乙醇。

4.1供试品溶液制备

取杞菊地黄丸浓缩丸6g，研碎，加乙酸乙酯20m1（量筒），超声处理30分钟，滤过（滤纸，漏斗），滤液加于氧化铝柱（200-300目，5g，内径为lcm，干法装柱）上，用乙酸乙酯10ml洗脱（移液管），收集洗脱液，蒸干，残渣加乙酸乙酯lml（移液管）使溶解，作为供试品溶液。

4.2对照品药材制备

取泽泻对照药材1g，同法制成对照药材溶液。

4.3对照品溶液制备

另取23-乙酰泽泻醇B对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。

4.4阴性对照溶液制备

按处方比例，取除去泽泻以外的其余药材，同供试品溶液制备方法制成缺泽泻阴性对照液。

称取泽泻0.75g、熟地黄2g，30ml水加热回流提取1个小时，过滤，提取液浓缩至一定浓度；取枸杞子0.5g、山茱萸1g、牡丹皮0.75g和菊花0.5g，70%乙醇加热回流提取1个小时，过滤，浓缩成适当浓度；合并以上两种浓缩液，加山药细粉1g；加70%乙醇20mL，加热回流提取1个小时，滤过，蒸干，加适量水溶解，分别用10ml乙酸乙酯萃取两次，合并萃取液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为阴性对照溶液。

4.5薄层色谱法试验

照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶H薄层板上，以环己烷一乙酸乙酯（1:

1）为展开剂（移液管），展开，取出，晾干，喷以5%硅钨酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰（吹风机）。

供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

或者照薄层色谱法（中国药典20015年版中国药典）试验，吸取上述溶液各5uL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯一乙酸乙酯一冰醋酸（（24:

8:

1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。

供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

5.丹皮（雷铭宇）

仪器：

加热回流装置、薄层板、紫外光灯

材料：

乙酸乙酯、蒸馏水、甲醇、牡丹皮对照药材、乙醚、丙酮、丹皮酚对照品、环己烷、盐酸、三氯化铁、乙醇

定性鉴别（TLC法）

5.1供试品溶液的制备

取本品15g（天平），研碎，加水100ml，加热回流30分钟，放冷，离心，取上清液，用乙酸乙酯50ml（50ml量筒）振摇提取，分取乙酸乙酯液，蒸干（水浴锅），残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。

5.2对照药材溶液提取

取牡丹皮对照药材1g（天平），研碎，加乙醚40ml，加热回流1小时，滤过，滤液挥去乙醚，残渣加丙酮lml（量筒）使溶解，作为供试品溶液。

5.3对照品溶液的制备

取丹皮酚对照品，加丙酮制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液。

5.4阴性对照溶液的制备

取处方中除丹皮外的其余药味，称取泽泻0.75g、茯苓0.75g、熟地黄2g和山茱萸1g，30ml水加热回流提取1个小时，过滤，提取液浓缩至一定浓度（水浴锅）；取枸杞子0.5g和菊花0.5g，70%乙醇加热回流提取1个小时，过滤，浓缩成适当浓度；合并以上两种浓缩液，加山药细粉1g；加70%乙醇20mL，加热回流提取1个小时，滤过，蒸干，加适量水溶解，分别用10ml乙酸乙酯萃取两次，合并萃取液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为阴性对照溶液。

5.5.1薄层条件

照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述三种溶液各

10ul分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条状，以环己烷-乙酸乙酯（3：

1）为展开剂（层析缸），展开，取出，晾干，喷以盐酸酸性5%三氯化铁乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。

供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的条斑。

5.5.2薄层板

硅胶Ｇ薄层板20ｃｍ×20ｃｍ×0.4ｃｍ,105℃,活化30ｍｉｎ备用;展开剂:

-环乙烷-乙酸已酯-冰醋酸（10∶1∶0.1）;斑点观察:

置紫外灯下（λ=254ｎｍ）检识定位

5.6丹皮酚的含量测定

5.6.1材料与方法

紫外分光光度计、型电热恒温鼓风干燥箱、紫外分析仪剂均为99.9%无水乙醇、水为二次蒸馏水

5.6.1.2材料

牡丹皮、丹皮酚对照品

5.6.1.3对照品标准溶液的制备

精确称取丹皮酚对照品0.005g置于50ml烧杯中，以无水乙醇溶解’转至100ml容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，摇匀，得到50ug/ml的丹皮酚对照品溶液

5.6.1.4结果与分析

5.6.1.4.1测定波长的选择

以无水乙醇为对照品，在274nm出测的最大波长

5.6.1.4.2线性关系考察

分别吸取对照品溶液0.5ml，1ml，1.5ml，2ml，2.5ml，3.0ml，3.5ml，4ml，置于25ml容量瓶中!

，用无水乙醇稀释至刻度摇匀。

以无水乙醇为空白溶液在274nm波长处测定吸光度。

以吸光度为纵坐标样品浓度为横坐标绘制标准曲线。

5.6.1.4.3丹皮酚含量测定

准确称取牡丹皮粉末3.000g（分析天平），置于50ml锥形瓶中，加入25ml无水乙醇，60度恒温水浴2h，趁热过滤，置于25ml容量瓶中用无水乙醇溶液定容，作为供试品溶液。

量取5份0.1ml牡丹皮供试品溶液分别置于25ml容量瓶中。

用无水乙