伤寒Vi多糖疫苗.docx

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伤寒Vi多糖疫苗

伤寒Vi多糖疫苗

4.内容：

产品名称及剂型

产品名称：

伤寒Vi多糖疫苗

产品剂型：

液体剂型剂型

产品概述：

本品系用伤寒沙门菌培育液纯化的Vi多糖，经用PBS稀释制成，不含防腐剂。

用于预防伤寒。

生产工艺流程图：

菌种（Ty2株CMCC50098）

↓

传代（1代、2代）

↓

小罐液体培育

↓

大罐液体培育

↓

杀菌、去菌体、搜集多糖

↓

纯化

↓

除菌过滤

↓

原液检定

↓

稀释

↓

半成品检定

↓

分装

↓

成品检定

↓

包装

↓

成品

生产、分包装和检定操作进程及工艺条件：

菌种

生产用菌种应符合《中华人民共和国药典》2010年版三部中“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。

菌种名称

生产用菌种为伤寒沙门菌Ty2株CMCC50098。

工作种子批的成立

工作种子批菌种来源于主种子库菌种。

主种子库菌种经开启，传代扩增后冻干，冻干菌种经检定合格后为工作种子批。

主种子库菌种传代

主代冻干菌种启开后传一代于肉汤琼脂培育基，35～37℃培育16～20小时；传二代于肉汤琼脂培育基，35～37℃培育16～20小时。

工作种子批菌种的冻干制备

生长良好的二代菌种，混悬于脱脂牛奶保护剂中冻干。

工作种子批菌种的检定

培育特性及染色镜检

菌种接种于～的肉汤琼脂培育基35～37℃培育16～20小时，应为无色半透明、边缘整齐、表面滑腻湿润的圆形菌落。

染色镜检应为革兰阴性杆菌。

生化特性

接种葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、乳糖、蔗糖于35～37℃培育5～7日，发酵葡萄糖、麦芽糖、甘露醇（产酸不产气）；不发酵乳糖、蔗糖（现行版《中华人民共和国药典》三部中附录ⅩⅣ）；氧化酶实验阴性。

血清学特性

（1）玻片凝集实验

将在35～37℃培育16～20小时的活培育物与伤寒Vi及O－九、H－d参考血清做玻片凝集实验，与Vi及H－d参考血清有强凝集反映（+++以上），与O－9参考血清不产生凝集或仅有较弱凝集反映。

（2）定量凝集实验

将在35～37℃培育16～20小时的活培育物，用PBS制成×108/ml的菌悬液，加入终浓度为%甲醛溶液，杀菌后的菌液，与伤寒Vi参考血清作定量凝集实验；另取经100℃30分钟加热杀菌的菌液，与伤寒O参考血清作定量凝集实验。

充分摇匀后，放37℃留宿，以肉眼观察结果，出现（+）凝集之血清最高稀释度为凝集反映效价。

凝集效价应不低于血清原效价之半。

种子批的保留

冻干后的主种子库菌种和工作种子库菌种保留于2～8℃。

原液

生产用种子

工作种子批菌种启开后传一代于肉汤琼脂培育基，35～37℃培育16～20小时；传二代于肉汤琼脂培育基，35～37℃培育16～20小时；传三代于改良半综合培育基，培育3～5小时，浓度达30～50亿/ml时用于大罐培育。

生产用培育基

采用改良半综合培育基，不含有与十六烷基三甲基溴化铵能形成沉淀的成份，见。

培育

采用培育罐液体通气搅拌培育。

温度35～37℃、通气量50～200L/min、～、培育6～8小时。

在培育进程中及杀菌前取样进行菌液浓度测定及纯菌实验，涂片做革兰染色镜检，如发觉污染杂菌则予以废弃。

收获及杀菌

当菌液浓度达到200～320亿/ml时中止培育，取样进行菌液浓度测定及纯菌检查。

按培育量的%加入甲醛溶液杀菌。

纯化

去核酸

去菌体

采用持续流离心法将已杀菌的培育液离心后搜集上清液。

按终浓度%～%加入十六烷基三甲基溴化铵，充分混匀，寄存4～24小时，形成沉淀。

采用持续流离心法收取沉淀物，并用L的氯化钠溶液溶解沉淀物，搅拌2小时，使多糖与十六烷基三甲基溴化铵解离。

加入95%乙醇至最终浓度为25%，2～8℃静置3～24小时，离心搜集澄清的上清液。

沉淀多糖

于上述上清液中加入95%乙醇至最终浓度为80%，充分振摇使多糖沉淀，离心搜集沉淀。

沉淀物用无水乙醇及丙酮各洗2次，干燥后即为多糖粗制品。

多糖粗制品应保留在－20℃以下。

多糖纯化

将多糖粗制品溶解于1/10饱和乙酸钠溶液中，使其浓度达5～20mg/ml；按1:

2容量用冷酚（100g结晶酚溶于40ml的1/10饱和乙酸钠溶液）提取3次，离心搜集上清液，并用注射用水透析；加入乙醇至最终浓度为80%，离心搜集的沉淀物用无水乙醇洗2次，干燥后用灭菌注射用水溶解，即为精制多糖原液。

原液检定

多糖原液取样进行。

辨别实验

采用免疫双扩散法（现行版《中华人民共和国药典》三部中附录ⅧC），Vi多糖与伤寒Vi血清24小时内应形成明显沉淀线，而与伤寒O血清不形成沉淀线。

化学检定

固体总量

依法测定（现行版《中华人民共和国药典》三部中附录ⅦM）。

蛋白质含量

不高于9mg/g（现行版《中华人民共和国药典》三部中附录ⅥB二法）。

核酸含量

不高于15mg/g，核酸在波长260nm处的吸收系数（E

）为200（现行版《中华人民共和国药典》三部中附录ⅡA）。

O－乙酰基含量

不低于2mmol/g（现行版《中华人民共和国药典》三部中附录ⅥF）。

多糖分子大小测定

多糖分子KD值在以前的洗脱液多糖回收率应在50%以上（现行版《中华人民共和国药典》三部中附录ⅧH）。

无菌检查

依法检查（现行版《中华人民共和国药典》三部中附录ⅫA），符合规定。

细菌内毒素检查

不高于40EU/ug。

苯酚残余量

不高于L。

甲醛残余量

不高于L。

丙酮残余量

不高于L。

乙醇残余量

不高于L。

保留及有效期

于－20℃以下保留，自多糖粗制品制造之日起有效期为60个月。

半成品

半成品配制

半成品由单批或多批多糖原液归并，用无菌无热原PBS（pH）稀释。

每1次人用剂量含多糖不低于30μg，不含防腐剂。

PBS配方

Na2HPO4万ml

KH2PO4万ml

NaCl68g/万ml

PBS配制

正确称量NaCl、Na2HPO4和KH2PO4，在大立瓶顶用适量注射用水溶解，湿热灭菌。

稀释配制

用无菌无热原PBS，将伤寒Vi多糖原液稀释到每1次人用剂量含多糖不低于30μg，取样送检。

半成品检定及贮存效期

无菌检查

依法检查（现行版《中华人民共和国药典》三部附录ⅫA），符合规定。

半成品配制至分装完成不超过72小时。

成品

分批

应符合现行版《中华人民共和国药典》三部中“生物制品分批规程”的有关规定。

分装及冻干

应符合现行版《中华人民共和国药典》三部中“生物制品分批规程”的有关规定。

规格

每安瓿5ml、1ml、，每西林瓶。

每1次人用剂量、含伤寒Vi多糖不低于30ug。

包装

应符合《生物制品包装规程》的有关规定。

包装规格为10瓶/盒、1000瓶/箱。

分装后制品，经质量保证部检定和综合审评，对符合质量标准者发出包装通知单后，进行包装。

制品在包装前必需进行外观检查。

凡制品颜色异样、有异物、封口不严、有黑头或裂纹等全数剔除。

制品包装标签及标签的内容、格式符合《中华人民共和国药品管理法》及国务院药品监督管理部门的有关规定。

包装前，按质量保证部发出的包装通知单所载有效期预备瓶签，瓶签上的笔迹清楚。

包装规格

每安瓿，5支/盒，1000支/箱。

每安瓿，5支/盒，1000支/箱。

每西林瓶，1瓶/小盒，10瓶/中盒，200瓶/箱。

每安瓿，5支/盒，500支/箱。

包装制品在25℃以下进行。

每一个最小包装盒内附有本制品的利用说明书。

成品检定

除装量不同、水分测定、多糖含量、多糖分子大小测定和异样毒性检查外，按制品标示量加入灭菌PBS复溶后进行其余各项检定。

辨别实验

按项进行。

外观

为无色透明液体，无异物。

化学检定

pH值

～（现行版《中华人民共和国药典》三部附录VA）。

多糖含量

每人用剂量多糖含量应不低于30μg。

称取琼脂糖，加入L巴比妥缓冲液（）40ml中，加热溶胀完全，待冷却至约56℃时，加入伤寒Vi血清1ml，混匀后迅速倾倒于10cm×9cm的干净水平玻板上，待凝胶凝固后用直径3mm的打孔器在距底边处打孔。

各孔中别离加入各稀释好的伤寒Vi抗原标准品溶液（浓度别离为：

100μg/ml，50μg/ml，25μg/ml，μg/ml，μg/ml）和本品5μl（本品做双孔）。

靠近边缘一孔中可加入10μl溴酚蓝指示液。

加样后将玻板置于电泳槽上，滤纸搭桥，加样端与电泳仪负极相连。

采用L巴比妥缓冲液（）为电极缓冲液，8V/cm恒压电泳至指示剂迁移到前沿。

取下玻板浸泡于%无菌氯化钠溶液1～2小时后，覆盖干净滤纸移至培育箱中留宿烤干。

用考马斯亮兰染色液染色至火箭峰出现，用甲醇－乙酸脱色液脱色至背景清楚。

准确测量火箭峰高，以标准品浓度的对数和相应的峰高作直线回归，得直线回归方程，将供试品的峰高均值代入直线回归方程，求出供试品浓度。

无菌检查

依法检查（现行版《中华人民共和国药典》三部附录ⅫA），符合规定。

异样毒性检查

依法检查（现行版《中华人民共和国药典》三部附录ⅫF），符合规定。

　热原检查

依法检查（现行版《中华人民共和国药典》三部附录ⅫD），注射剂量家兔体重每1kg注射多糖。

保留、运输及有效期

于2～8℃避光保留和运输，自生产之日起有效期为24个月。

质量监控：

菌种

菌种检定

按本规程的要求对每批菌种进行全面检定，检定合格的菌种方可用于生产。

生产菌种

三代菌种收集后取样做纯菌实验，浓度检测、测pH值，染色镜检，按投料批次，每批次检测一次。

大罐培育

浓度检测、测pH值，染色镜检，开始培育2～3小时后，每小时监测一次作浓度检测和pH值检测，每罐镜检一到两次观察生长进程中是不是有杂菌污染及细菌生长形态。

培育结束后，取样做纯菌实验、杀菌实验，按投料批次，每批次检测一次。

纯化

十六烷基三甲基溴化铵、氯化纳溶液、乙醇、乙酸钠溶液、冷酚加量，离心速度、温度，生产进程控制。

除菌过滤

操作完成后取样做无菌检查。

半成品配制

配制前取稀释用水做细菌内毒素检查、半成品取样做无菌检查。

检定

原液检定

按本规程的要求进行。

半成品检定

无菌检查。

成品检定

按本规程项进行。