血凝仪SOP文件CA1500.docx

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血凝仪SOP文件CA1500

全自动血凝分析系统标准操作规程

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文件編號：

Lab.SOP-COA-0001

版次：

01

标准作业程序

——全自动血凝仪CA1500

編修日期：

05.09.15

頁次：

第頁共頁

使用单位：

编写：

1.设备基本技术参数

1．1原理——CA1500凝血仪仪器具有三种检测原理方法：

凝固法、发色底物法、免疫法

1.1.1凝固法：

基本测试原理是光学法的散射光检测（用660nm光电二极管检测散射光强度的变化），还并用了百分比方式的测定原理：

当试剂加入标本后，凝血开始启动，随之光学出现变化，仪器把这种光学的变化描绘成凝固曲线：

把开始出现凝集的起始点作为0%、把完全凝固的终点作为100%、把50%变化点处作为凝固时间（报告点），当测定含有干扰物（黄疸、溶血、高脂血症等）或低纤维蛋白原血症的特殊标本时，其作为起始点的0%的基线会随之上移或下移,相当于扣除本底干扰.

以上凝固法检测原理所测定的项目包括了最常用的如PT、APTT、FIB、TT、内源凝血因子（FVIII、XI、XI、XII），外源凝血因子（FII、V、VII、X）等

1.1.2.发色底物法的检测原理：

是通过测定产色物质的吸光度变化，以推算待测物的含量，这种方法属生物化学法，其基本原理是：

试剂中为人工合成的含某种酶裂解位点的短肽，与产色物质如对硝基苯胺（pNA）连接，待检物品中含有活性酶或无活性的酶原被加入的激活剂活化，在检测过程中产色物质被解离下来，使被检物品出现颜色变化，其与被检物含量呈一定的数量关系。

此方法以酶学方法为基础，可检测项目包括如：

AT-III、Plg、PC、PS、FM、PAI，Tpa，α2-AP等。

1.1.3.免疫法：

以被检物作为抗原，制备相应的多克隆抗体，利用抗原抗体的特异结合反应来对被检物进行定性和定量检测，在凝血仪上多采用免疫比浊法测定，其基本原理是当一定波长的光线通过反应混合液时，被其中抗原抗体反应形成的免疫复合物吸收而减弱，在一定范围内，其吸光度与复合物量呈正相关，因此当抗体量固定时，根据复合物的吸光度值，即可推算出待测抗原含量，可测定项目如D-二聚体、vWF因子、FDP等

1．2检测环境要求:

1.2.1温度:

10°-30°C；湿度:

20-80%（无冷凝）

1.2.2电源:

交流电100-240V，50/60Hz；功率：

720VA

1.2.3请勿将仪器直接置于水、直射阳光、冷凝或大风的环境中,这样会导致不正确的检测结果并导致仪器工作不正常而损坏

1.2.4仪器的背面和墙之间要始终保持20厘米以上的距离。

否则，仪器会过热，连接导管和连接负载过大而可能引发火灾。

1．3主要项目检测指标:

1.3.1检测范围：

PT，TT——5~180sec（最宽可设置到600秒）

APTT——5~300sec（最宽可设置到600秒）

Fbg——0.25~10g/L（＜0.5g/L或＞10g/L建议使用重稀释重检模式）

D-DimerPlus50~16000ug/L（＞2000ug/L需使用重稀释重检模式）

1.3.2重复性：

PT,APTT≤CV2%

Fbg≤CV4%

因子≤CV5%

TTCV≤10%

AT-IIICV≤5%

D-DimerPlusCV≤10%

1.3.3检测速度：

单项测试时最快180T/h，组合时约120~140T/h；

2.标本

●使用3.8%或3.2%（W/V）拘橼酸钠溶液作为抗凝剂；

●血样与抗凝剂的比例为9:

1，如果血球压积<20%或>55%，则需调整这个比例，方法是：

0.00185×血液毫升数×（100-压积）=抗凝剂毫升数，按比例重抽血检验；

●血浆分离（如果不能立即测试，应尽快分离血浆）；

——采样后60分钟内进行；

——分离血浆应在3000r/min离心10分钟，务使血小板去除；

●盛血浆容器应加塞，防止PH改变；

●血浆存放时间不能太久：

温度

有效时间

室温

≤2hr

2—8℃

≤4hr

-20℃

≤2Weeks

-70℃

≤6months

●低温保存的样品，要在37℃迅速解冻，减低凝血因子的消耗，并立即测试。

3试剂及配套消耗品

3.1试剂

3.1.1反应试剂:

采用CA1500血凝仪配套DadeBehring试剂，具体见相应项目要求

3.1.2系统清洁液:

厂家配套SysmexCleanI清洁液,用于检测过程中样品针、试剂针的冲洗；

3.1.3系统冲洗液：

蒸馏水，实验室自制，用于检测过程中系统管路的冲洗

3.1.4:

稀释液：

配套DadeBehring的Owern’sVeronalBuffer和CASystemBuffer，用于检测过程中样本的稀释或定标曲线制定中标准血浆的稀释；

3.2其它消耗品

3.2.1反应杯：

厂家配套SysmexReactionTube反应杯,货号：

SU-400

4校准

4.1定期进行光学通道灵敏度校准检测

（半年一次，由厂家工程师进行）

4.2定期进行温度检测校准

（半年一次，或有相应温度错误报警时进行，由厂家工程师执行）

4.3定期进行机械位置检查调校

（半年一次，或有相应定位错误报警时进行，由厂家工程师执行）

4.4项目定标：

入Fbg，D-D，AT-III这些报告单位为含量浓度、活性单位的项目，原则上每更换一批号试剂就要进行定标曲线的重新制备，方法如下：

4.4.1按要求溶解好定标血浆,放室温10分钟后使用

4.4.2在主菜单选择→选择项目（如Fbg）→选→将定标液的定值输入[AssaySheetVal.]处

4.4.3确认输入值上端显示为[Sampler]和[AutoDil.],否则,通过按最底端的Sampler/Holder和ChangeMode改变→通过按SelectDil.Ratio选择合适的稀释度→在每个稀释度后面输入要测试的次数,如1或2（Times）;

4.4.4以上全部输入完后,按,[Return],→[OK]储存设置

4.4.5将定标液用小样本杯放置在样本架上的第一位,放在进样器上,将相应试剂\稀释液等放好在试剂盘相应位置

4.4.6在主菜单选→点击相应项目→[Return]→[Start],则定标曲线测试自动进行;

4.4.7重新进入定标曲线画面[StandardCurve],等所有稀释点结果都测定出来后,如果曲线可接受,则按[Update]→[Update]储存新曲线.

5质控

5.1质控液种类：

DadeBehringCitrolI，II，III

5.2质控液的准备

5.2.1准备方式依照质控血浆配制要求：

每瓶用1ml蒸馏水溶解，置室温15分钟后方可使用，室温下4小时内使用完；

5.2.2溶解后未使用完的质控血浆注明开瓶日期，分装保存于—20℃，3周内使用完。

5.3质控血浆使用时机

5.3.1每天做检体之前

5.3.2做完仪器校正之后

5.3.3重要的维修之后

5.3.5怀疑病患的报告有异常时

5.4质控血浆注意事项

5.4.1当作一般检体操作。

5.4.2接受范围（阀值）：

按质控血浆说明书标注。

5.5超阀值之补救措施

5.5.1检查质控血浆是否过期、失效

5.5.2检查所使用的试剂、清洁、冲洗液、缓冲液等是否过期、失效

5.5.3若解决上述因素仍无法改善质控结果，必须考虑进行仪器校准及调校，联系厂家工程师进行。

6操作步骤

6.1测试前准备：

检查试剂、清洁液、冲洗液、反应杯等足够当日使用，仪器开机自检OK无报警；

6.2开机：

电源开关位于仪器左侧，打开到“ON”状态，开机后仪器自检……约5分钟,屏幕上方"NotReady"变为"Ready",提示可进行检测；

6.3每日针冲洗：

在主屏幕上选“Rinse Probe”，然后按下“Execute”进行针冲洗

6.4标本上机操作步骤：

6.4.1常规标本检测：

从主菜单选[WorkList]---->出现第一架样本工作清单输入画面,选[ID.No.Entry],

输入第一个样本编号------>按相应实验项目名称键（如[PT]、[APTT]…）,输入此标本每项要

测试项目……则选中项目相应位置标记为"○",-->用↑↓键,同样输入其他病人的编号、项目,

全部输入完,仪器接受所输入的工作任务,按键[NEXT]为下一样本架,继续输入…....

将检体按编号顺序摆入普通样本架，放置好在进样器上，在仪器Ready状态下，按

即可

6.4.2急诊标本检测：

在检测过程中如有紧急检体插入，按[STAT]，选择[STATHolder]，当提示

是否要设置急诊标本，选择[OK]，中间5个急诊专用位置设置画面出现，确认急诊位置处指

示灯为绿色，向内推打开急诊小门，按顺序放置好急诊标本，按一下急诊小门左侧门按纽，门

关闭。

用[IDNo.Entry]输入相应急诊样本标号，如6.3.1一样按项目名称键为每标本选择要测

试的项目，确认，按，开始急诊检测。

6.4.3查看结果：

返回主屏幕，检测的项目如果由“◎”变为“●”表明此试验已经完成，然后按下“Stored Data”（储存结果）键，屏幕会换到结果显示界面，按下边第一个菜单“Graph”，查看凝

集曲线、吸光度、结果等，检查是否有Error错误信息，有错误报警的标本需考虑重测

6.4.4关机前冲洗针：

关机前需要洗针，按下“Rinse Probe”，然后按下“Execute”

6.4.5关机：

回到主屏幕下，切断仪器电源，关闭打印机。

7维护保养

7.1每日维护：

7.1.1清空已用过的反应杯:

从仪器左侧取出废杯箱--->倒空废杯--->清洁废杯箱并放回

清洁试剂位：

打开遮光盖--->把试剂架取出.将试剂架连同试剂放入冰箱，--->用棉纱

布擦干净试剂位冷凝水--->盖好遮光盖

7.2每周维护

7.2.1液路冲洗:

仪器在"Ready"状态下,从主菜单按[SpecialMenu]--->按[Maintain]键--->按[Rinse&Prepare]键--->按[Execute]键,运行此程序--->完成后按[Return]键返回

7.2.2清洁仪器:

定期用纱布、棉纤等擦干净仪器内外;包括放试剂位置、放反应杯位置、检测通

道和各处表面位置….

7.3需要时维护：

7.3.1当有压力报警时，调整压力:

仪器在"Ready"状态下,从主菜单按[SpecialMenu]--->按

[Maintain]键--->按[PressureAdjust.]键,显示压力是否在其调整范围内？

（1.0Kg和2.2Kg压力

可调，负压不可调）若否,则打开仪器右侧相应的压力调整旋钮（开锁）,旋动调整至允许范围--->锁紧

旋钮

7.3.2当提示“ReplaceLampUnit”，提示亮度不够（≈2000小时寿命），需更换灯泡:

关机--->从

仪器右侧取下灯泡外盖及内盖--->更换好的灯泡--->装上内外盖--->从主菜单按SpecialMenu]--->

再按[Maintain]--->再按[Calib.Lamp]--->确认关上遮光盖,按[Execute]键运行调整程序

8健康和安全操作指南

所有操作维护需注意以下：

9参考附件

9.1《CA1500OPERATOR’SMANUAL》

9.2《CA1500常规操作流程》

9.3《CA1500日常维护及常见故障处理》

文件編號：

Lab.SOP-COA-0002

版次：

01

标准操作规程

—— 活化部分凝血活酶时间测定（APTT）

編修日期：

05.09.15

頁次：

第頁共頁

单位名称：

编写：

1.项目名称：

活化部分凝血活酶时间（Activated Partial Thromboplastin Time, APTT）

2.检验原理：

2.1.检测原理：

全自动血凝仪测定，散射光凝固法检测——血浆样本经过一定时间的温育后，加入反应试剂，仪器采用波长为660nm的光照射反应物，通过测量散射光光强度的改变来测定凝血过程（纤维蛋白原转化为纤维蛋白）中的浊度变化，从散射光光强度的测定可得凝集曲线，再通过百分比原理方法求得凝血时间。

2.2.反应方法学溯源：

37℃条件下，以鞣花酸激活因子Ⅻ和Ⅺ，以脑磷脂（部分凝血活酶）代替血小板，在Ca²+参与下，观察贫血小板血浆凝固所需时间，即为活化部分凝血活酶时间，是内源凝血系统较敏感和常用的筛选试验。

3.设备参数：

3.1.设备:

仪器型号Sysmex  CA1500全自动血凝分析仪

3.2.分析和计算参数：

报告单位秒（S）

3.3.样本量：

50μl ,试剂量:

50ul激活剂,50ulCaCl2

3.4.检验时间：

在最长检验时间之内测出结果，标准设置最长检验时间：

190秒

3.5.重复性：

CV≤2%

4.试剂及配套品：

4.1.激活剂:

Cephaloplastin试剂（Dade® Actin® Activated Cephaloplastin Reagent）

4.1.1.商标：

德灵（DADE BEHRING）

4.1.2.包装规格：

10×2ml

4.1.3.货号：

B4218-14.1.4.成分：

脑磷脂（从干燥兔脑粉中提取）加入含有缓冲液、稳定剂和防腐剂的1.0×10-4M的鞣花酸溶液4.1.5.使用方法:

液体试剂,直接使用.4.1.6储存:

没开盖试剂放2~8℃存放至包装有效期,开盖后2~8℃有效期7天

4.2. 氯化钙溶液（Calcium Chloride Solution）

4.2.1.商标：

德灵（DADE BEHRING）

4.2.2.包装规格：

10×15ml

4.2.3.货号：

ORHO 37

4.2.4.成分：

0.025mol/L的氯化钙溶液4.2.5.使用方法:

液体试剂,直接使用.4.2.6储存:

没开盖试剂放2~8℃存放至包装有效期,开盖后2~8℃有效期7天

4.3．清洗液（CleanI） :

用于测定过程中的吸样针冲洗

4.3.1.商标：

希森美康（Sysmex）

4.3.2.包装规格：

50ml

4.3.3.货号：

GSA500A

4.3.4.成分：

1%次氯酸钠及活性成分4.3.5.使用方法:

液体试剂,直接使用.4.3.6储存:

没开盖试剂放2~8℃存放至包装有效期,开盖后放于仪器上有效期仅24小时

4.4.校准质控血浆（Ci-Trol®）

4.4.1.商标：

德灵（DADE BEHRING）

4.4.2货号：

Level 1 （Normal）, 291070  10×1ml

             Level 2 （Abnormal）,291071 10×1ml

             Level 3 （Abnormal）, 291072 10×1ml4.4.3.使用方法:

1ml蒸馏水溶解置室温15分钟后使用4.4.4储存:

室温:

2h,2~8℃:

4h,冷冻分装保存：

-20°C<2周,-70°C<6个月

5.操作步骤：

5.1. 开机：

开打印机电源→开CA1500仪器右侧电源→开机后机器进行自检、预热，当屏幕上显示“Ready”时可以进行试验

5.2.每日针冲洗：

在主屏幕上选“Rinse Probe”，然后按下“Execute”进行针冲洗

5.3.准备试剂：

按照仪器试剂位置设定，把上述每项的试剂准备好，放在相应的位置

5.4.准备反应杯：

打开仪器顶部反应杯储存槽，查看反应杯是否够量，需及时添加

5.5.准备标本：

将室内质控和离心好的样本放在相应的样本架上（一个架子可放10个样本），准备好放在进样器上

5.6.输入试验项目：

按下主菜单上的“Work List”键，在试验项目键点击APTT，使APTT项目下显示“—”变为“○”，按“↑或↓”将需要测试标本如上操作选择；

5.7.输入样本号：

按下“ID No.Entry”，按顺序输入样本的序号或病人的病历号

5.8.开始检测：

待一切准备工作就绪，按下屏幕右上角“START”键，仪器开始检测…

5.9.查看结果：

返回主屏幕，检测的项目如果由“◎”变为“●”表明此试验已经完成，然后按下“Stored Date”（储存结果）键，屏幕会换到结果显示界面，按下边第一个菜单“Graph”，查看凝集曲线、吸光度、结果等，检查是否有Error错误信息，有错误报警的标本需考虑重测

5.10.关机前冲洗针：

关机前需要洗针，按下“Rinse Probe”，然后按下“Execute”

5.11.关机：

回到主屏幕下，切断仪器电源，关闭打印机。

6. 参考范围：

APTT （sec）：

25~35s

7. 临床意义：

常用来筛选内源性凝血系统（VIII、IX、XI、XII）及肝素抗凝治疗的监测

7.1.APTT延长：

见于先天性凝血因子缺乏（如血友病甲、乙，接触因子XII、XI缺乏，VWF等）；多种凝血子缺乏（如严重肝病、维生素K缺乏、DIC、纤溶亢进等）；血液中有抗凝物存在

7.2.对内源凝血途径因子（Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ）缺乏较CT敏感（血小板异常不影响APTT）能检出Ⅷ：

C小于25%的轻型血友病。

对凝血酶原、纤维蛋白原缺乏则不够敏感，故APTT延长的最常见疾病为血友病。

此时可进一步做纠正试验，即于患者血浆中加入1/4量的正常新鲜血浆、硫酸钡吸附血浆或正常血清（试剂参见凝血酶原消耗试验的纠正试验），再做APTT，如正常血浆和吸附血浆能纠正延长的结果而血清不能纠正，则为因子Ⅷ缺乏；如吸附血浆不能纠正，其余两者都能纠正，则为因子Ⅸ缺乏；如三者都不能纠正，则为病理性循环抗凝物质。

7.3.APTT缩短：

见于DIC高凝期和妊娠高血压综合症等高凝状态

7.4.是监测肝素治疗的首选指标:

:

在使用肝素治疗时，多用APTT监测药物用量，一般以维持结果为基础值的2倍左右

8.标本要求：

8.1.使用3.8%拘橼酸钠溶液作为抗凝剂；

8.2.血样与抗凝剂的比例为9:

1，如果血球压积<20%或>55%，则需调整这个比例，方法是：

0.00185×血液毫升数×（100-压积）=抗凝剂毫升数；

8.3.血浆分离（如果不能立即测试，应尽快分离血浆）；

一采样后60分钟内进行；

一分离血浆应在3000r/min离心10分钟，务使血小板去除；

8.4.血浆保存条件：

温度

有效时间

室温

≤2hr

2—8℃

≤4hr

-20℃

≤2Weeks

-70℃

≤6months

8.5.低温保存的样品，要在37℃迅速解冻，减低凝血因子的消耗，并立即测试。

8.6.所有与标本接触的试管、吸管等均采用用塑料或硅化处理的。

8.7.拒收标本:

严重溶血、黄疸、脂血或出现凝块,距采集时间超过2小时并且没有按要求储存的

9.参考依据：

《CA1500全自动血凝仪使用手册》，试剂使用说明书

10.附件：

10.1CA1500常规操作流程

10.2.APTT试剂使用说明书

文件編號：

Lab.SOP-COA-0003

版次：

01

标准操作规程

—— 凝血酶原时间测定（PT）

編修日期：

05.09.15

頁次：

第頁共頁

单位名称：

编写：

1.项目名称：

血浆凝血酶原时间测定（prothrombin time ，PT）

2.检验原理：

2.1.检测原理：

全自动血凝仪测定，散射光凝固法检测原理——血浆样本经过一定时间的温育后，加入反应试剂，仪器采用波长为660nm的光照射反应物，通过测量散射光光强度的改变来测定凝血过程（纤维蛋白原转化为纤维蛋白）中的浊度变化，从散射光光强度的测定可得凝集曲线，再通过百分比原理方法求得凝血时间。

2.2.反应方法学溯源：

凝血酶原时间（PT）测定是Quick于1935年创立的。

在受检血浆中加入过量的组织凝血活酶（人脑、兔脑、胎盘及肺组织等制品的浸出液）和钙离子，使凝血酶原变为凝血酶，后者使纤维蛋白原转变为纤维蛋白。

观察血浆凝固所需要的时间即凝血酶原时间。

其凝固时间取决于凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅴ、Ⅹ、Ⅰ的水平。

该试验是反映外源凝血系统最常用的筛选试验。

3.设备参数：

3.1.设备:

仪器型号Sysmex  CA1500全自动血凝分析仪

3.2.分析和计算参数：

凝血酶原时间-秒（S）,国际标准化比值-INR,凝血酶原活动度-%,凝血酶原比值-PTR

3.3.样本量：

50μl ,试剂量:

100ul0

3.4.检验时间：

在最长检验时间之内测出结果，标准设置最长检验时间：

120秒

3.5.重复性：

CV≤2%

4.试剂及配套品：

4.1. 反应试剂:

凝血活酶含钙试剂（Thromborel® S）

4.1.1商标：

德灵（DADE BEHRING）

4.1.2包装规格：

 10×10ml

4.1.3使用方法:

每瓶用10ml蒸馏水溶解,须放置室温或37℃30分钟后才使用

保存:

未溶解试剂2~8℃至包装有效期,试剂溶解后2~8℃：

7天

4.1.4货号：

OUHP49 

4.1.5参数：

ISI（国际敏感度指数）≈1.02

（每次更换试剂批号需将包装中所附ISI指数表中对应仪器型号的ISI值输入仪器中.（输入方法:

主菜单→STANDARDCURVE→SELECTTEST→PT→MANUALENTRY→光标在ISI处输入ISI值

4.1.5.成分：

Thromborel® S  Reagent中包含 :

a. 冻干人胎盘促凝血酶原激酶（lyophilized human placental thromboplastin）

b. 氯化钙 （calcium chloride）

c. 稳定剂 （stabilizers）

d.防腐剂（Preservatives）

4.2．清洗液（CleanI） :

用于测定过程中的吸样针冲洗

4.2.1.商标：

希森美康（Sysmex）

4.2.2.包装规格：

50ml

4.2.3.货号：

GSA500A

4.2.4.成分：

1%次氯酸钠及活性成分4.2.5.使用方法:

液体试剂,直接使用.

4.2.6储存:

没开盖试剂放2~8℃存放至包装有效期,开盖后放于仪器上有效期仅24小时

4.3标准血浆:

（Standard Human Plas