整理生物技术题25.docx

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整理生物技术题25

名词解释：

（每题3分）

1、背景着色

2、一抗和二抗

3、探针

4、免疫组织化学技术

答案：

名词解释：

1、是指免疫组化过程中产生的非检测抗原（或抗体）的着色，又称非特异性着色，往往造成假阳性。

可干扰显色结果的判断，因此染色时，应尽量减小或消除背景着色。

2、第一抗体，简称一抗（Ab1）：

是针对待测抗原的抗体。

第二抗体，简称二抗（Ab2）：

是用一抗作为抗原免疫另一种动物制备的抗体3、探针是指已知碱基序列的、用标记物标记了的一段核苷酸片断，用来检测组织或细胞内的某一特定DNA片段或RNA片段。

4、是应用抗原、抗体间特异性免疫反应的原理,用标记物标记的已知抗体（或抗原）检测组织细胞内的蛋白质、多肽等相应的抗原（或抗体）的方法。

选择题

[A型题]

一、选择题

（一）A1型题（标准型）

1.免疫组化技术的关键步骤是

A.标本处理

B.抗体的处理与保存

C.免疫染色

D.设立对照试验

E.结果判断

2.免疫组化技术的首要试剂是

A.抗原

B.抗体

C.标记物

D.固定剂

E.洗涤液

3.酶免疫组化技术中，关于标本处理的说法正确的是

A.充分洗后于室温用0.3%H2O2和80%甲醇处理20～30min。

B.充分洗后于室温用0.3%H2O2和80%甲醇处理40～50min。

C.充分洗后于室温用0.5%H2O2和90%甲醇处理20～30min。

D.充分洗后于4℃用0.3%H2O2和80%甲醇处理20～30min。

E.充分洗后于4℃用0.3%H2O2和80%甲醇处理40～50min。

4.PAP法是Sterberger等于哪一年建立的

A.1950

B.1960

C.1970

D.1980

E.1990

5.PAP复合物中的酶是

A.辣根过氧化物酶

B.碱性磷酸酶

C.葡萄糖氧化酶

D.胃蛋白酶

E.胶原酶

6.PAP的特点是几个抗酶抗体和3个过氧化物酶分子组成复合物，结构非常稳定

A.1

B.2

C.3

D.4

E.6

7.双桥PAP法建立于哪一年

A.1955

B.1965

C.1970

D.1975

E.1985

8.PAP法中的“桥”是

A.第一抗体

B.第二抗体

C.第三抗体

D.亲和素

E.第四抗体

9.ABC技术由美籍华人Hsu于哪一年建立，已广泛应用于免疫学检测技术

A.1961

B.1975

C.1981

D.1985

E.1990

10.ABC法中的“桥”是指

A.第一抗体

B.第二抗体

C.第三抗体

D.亲和素

E.链霉素亲和素

11.LSAB法的操作时间仅为ABC法的多少，具有实用价值。

A.1/2左右

B.1/3左右

C.1/4左右

D.1/5左右

E.1/6左右

12.双标记荧光免疫法中，如用罗丹明标记A抗体，呈什么颜色，用异硫氰酸荧光素标记B抗体，呈什么颜色

A.黄绿色，橘红色

B.橘红色，黄绿色

C.红色，淡黄色

D.淡黄色，红色

E.橙黄色，浅绿色

13.荧光免疫间接法比直接法荧光增强多少倍，敏感性提高多少倍

A.1～2

B.2～4

C.3～6

D.4～8

E.5～10

14.免疫组化法吸收试验是用过量已知抗原与抗体在多少度以下充分反应，离心后再行免疫组化染色

A.4℃

B.20℃

C.40℃

D.37℃

E.50℃

15.胶体金标记蛋白加稳定剂后，在一定浓度下，4℃可保存多久

A.几天

B.几个星期

C.半个月

D.几个月

E.几年

16.胶体金标记蛋白时，待标记蛋白的实际用量是在稳定1ml胶体金所需蛋白基础上再增加多少

A.5～10%

B.10～20%

C.20～30%

D.30～40%

E.40～50%

17.铁蛋白是一种含铁多少，相对分子量为650～900KD的球形蛋白

A.15%

B.20%

C.25%

D.30%

E.35%

18.铁蛋白含铁核心直径为多少

A.3～4.5nm

B.4～7.5nm

C.3.5～7nm

D.4.5～8nm

E.2～6nm

19.铁蛋白的中央的含铁核心约含有多少个铁原子

A.100～1000

B.1000～2000

C.2000～3000

D.3000～4000

E.4000～5000

20.铁蛋白是由几个亚基组成的高电子密度氢氧化铁胶态分子团

A.2

B.3

C.4

D.5

E.6

21.下列哪种方法制备的胶体金是红色

A.白磷

B.维生素C

C.乙醇-超声波

D.枸橼酸三钠

E.硼酸钠

22．下列哪种方法制备的胶体金是酒红色

A.白磷

B.维生素C

C.乙醇-超声波

D.枸橼酸三钠

E.硼酸钠

23．PAS反应是检测组织内的：

A.核酸

B.脂

C.蛋白质

D.多糖

E.抗原

（二）A1型题（否定型）

1.下列技术中不属于免疫细胞组织化学技术

A.酶免疫组织化学技术

B.荧光免疫组织化学技术

C.亲和免疫细胞组织化学技术

D.免疫金（银）细胞染色组织化学技术

E.ELISA

2.组织细胞标本固定的目的，下列说法不正确的是

A.使细胞内蛋白质凝固

B.防止细胞自溶

C.保持细胞固有形态与结构

D.使细胞脱落

E.保存组织细胞的抗原性

3.免疫染色过程中使用蛋白酶消化法，下列说法错误的是

A.暴露抗原

B.增加细胞和组织的通透性

C.利于抗体与抗原最大限度的结合

D.限制抗体与抗原的结合

E.减少非特异性干扰

4.关于石蜡切片，下列说法不正确的是

A.组织块经固定、脱水处理后，浸蜡包埋

B.4℃保存备用

C.切片厚度为2～3um

D.是观察组织细胞结构的理想方法

E.不能长期保存

5.关于冰冻切片，下列说法错误的是

A.取新鲜组织块迅速冷冻（－70℃）

B.切成5～10um薄片

C.抗原的保存量不如石蜡切片多

D.制片方法简单

E.低温冰箱保存备用

6.关于活体组织标本，错误的是

A.取材于病变组织

B.取病变组织与正常组织交界处

C.要求大小适中

D.应减少对组织标本的损伤与挤压

E.应取正常组织

7.关于酶免疫组化技术的说法，不正确的是

A.敏感性较荧光标记技术高

B.可用普通光学显微镜观察

C.便于对组织细胞微细结构的分辨

D.染色标本不能长期保存

E.可用电子显微镜观察结果

8.关于PAP的说法错误的是

A.结构稳定

B.不存在游离的免疫球蛋白

C.染色冲洗过程中酶分子不易脱落

D.特异性、敏感性和重复性好

E.敏感性比直接法、间接法高，但比酶桥法低

9.下列哪项不是激光器的特征

A.单色性强

B.波长范围较宽

C.亮度高

D.相干性好

E.方向性强

10.免疫组化技术标本的来源，错误的是

A.活体组织

B.各种体液

C.穿刺液

D.培养细胞

E.粪便

（三）B型题（配伍型）

问题1～2

A.1941年

B.20世纪60年代

C.20世纪70年代

D.20世纪80年代

E.20世纪90年代

1.Nakane建立酶标记抗体的技术是在什么时间

2.Coons等首次用荧光素标记肺炎双球菌多粘多糖抗体是在什么时间

问题3～7

A.蛋白质

B.免疫球蛋白

C.酶

D.激素

E.类脂质

3.用丙酮做固定剂的抗原是

4.用1%聚甲醛做固定剂的抗原是

5.用10%甲醛做固定剂的抗原是

6.用95%乙醇做固定剂的抗原是

7.用四氯化磺做固定剂的抗原是

问题8～12

A.白磷

B.维生素C

C.乙醇-超声波

D.枸橼酸三钠

E.硼酸钠

8.金颗粒直径为5～12nm的还原剂是

9.金颗粒直径为6～10nm的还原剂是

10.金颗粒直径为2～5nm的还原剂是

11.金颗粒直径为8～13nm的还原剂是

12.金颗粒直径为16～95nm的还原剂是

问题13～14

A.5.0～5.5

B.6.0～6.5

C.7.0～7.5

D.8.0左右

E.10.0左右

13.亲和素的等电点为

14.链霉素亲和素的等电点为

问题15～17

A.敏感性

B.特异性

C.敏感性和特异性

D.重复性

E.准确性

15.免疫荧光组化技术直接法最具

16.免疫荧光组化技术间接法什么性强

17.免疫荧光组化技术双标记法具

问题18～20

A.5nm以下

B.5～20nm

C.20nm以上

D.5～30nm

E.5nm以下和20nm以上

18.胶体金颗粒的直径为多少时适用于液相免疫检测

19.胶体金颗粒的直径为多少时能用于免疫沉淀试验

20.胶体金颗粒的直径为多少时适用于标记抗原或组织化学检测

标准答案

一、选择题

（一）A1型题（标准型）

1.C2.B3.A4.C5.A6.B7.D8.B9.C10.D11.B12.B13.B14.A15.D16.B17.C18.B19.C20.C21.D22.B23.D

（二）A1型题（否定型）

1.E2.D3.D4.E

5.C6.E7.D8.E9.B10.E

（三）B型题（配伍型）

1.B2.C3.B4.D5.E6.A7.C8.A9.C10.E11.B12.D13.E14.B15.B16.A17.C18.B19.C20.A

二、填空题

1、免疫组织化学中最常用的标记物是__________、____________、___________、____________。

原位杂交组织化学中常用的标记物有___________和___________两大类。

2、常用的粘附剂有__________、____________、__________等。

3、抗原决定簇是指_____________分子表面的、具有活性的___________。

4、一般组织化学是利用化学或物理反应，在组织标本上加入一定的_____________，使其发生反应，形成_____________，能在显微镜下观察。

常用于检测__________、____________、__________等。

5、酶组织化学是利用酶对其____________的催化作用，生成__________，再与某种__________反应，形成____________沉淀，检测___________分布及活性的方法。

常用的方法有___________、___________、____________、__________和____________。

6、最常用于显示细胞、组织内的多糖和蛋白多糖的方法是___________。

7.、免疫染色对特殊标本的进一步处理常用________和________法。

8、免疫组化中最常用的制片方法是________和________。

9、免疫组化染色后，阳性细胞的染色分布有三种类型，分别是_________、_________和_______。

10、酶免疫组化技术中最常用的酶有_________、__________及_________。

11、免疫电镜标本的制备主要有_________、__________和_________三种。

12、组织块包埋前需先经______，常用的包埋剂是______、______和______。

13、光学显微镜下观察的固定标本除组织切片外，还有______、______和______。

14、免疫细胞化学术中常用的标记物有______、______、______和______。

标准答案：

填空1、荧光素、酶、生物素和亲和素、铁蛋白和胶体金。

放射性同位素、非同位素标记物（非放射性同位素）。

2、蛋白甘油、甲醛明胶、多聚赖氨酸。

3、抗原、特异性化学集团。

4、化学试剂，有色沉淀物，糖类、脂类、核酸、酶。

5、底物，初反应产物，捕捉剂，有色终反应物沉淀，酶。

金属沉淀法、偶氮偶联法、四唑盐法、靛蓝法、DAB法（联苯胺法）。

6、PAS反应（过碘酸希夫反应）。

7、蛋白酶消化法，非特异吸附法

8、冰冻切片，石蜡切片

9、胞质型细胞核型，细胞膜表面型

10辣根过氧化物酶，碱性磷酸酶葡萄糖氧化酶

11、非包埋法免疫染色，包埋前免疫染色，包埋后免疫染色

三、判断题

1.免疫胶体金标记蛋白质是化学结合，但并不影响蛋白质的生物活性和免疫活性。

2.免疫组化技术中，为确定结果可靠性，实验中必须设立对照，通常是针对第一抗体设立对照。

四、名词解释题

名词解释

1.HE染色法

2.银染法

3.冷冻切片

4.组织化学和细胞化学术

（1）生产力变动法5.免疫细胞化学术

影响支付意愿的因素有：

收入、替代品价格、年龄、教育、个人独特偏好以及对该环境物品的了解程度等。

6.原位杂交

7.胶体金

8.简述石蜡切片的制备过程。

第1页3.冷冻切片是新鲜组织或固定组织在低温下快速冷冻后制备组织切片的方法。

一般是将组织块置入干冰或液氮内使其快速冻结，然后在恒冷箱切片机内制冷冻切片。

这种方法制片快速，常用于外科手术切除标本的快速病理诊断。

由于这种制片方法可免去组织块包埋等程序，细胞和组织内的一些成分如糖原、酶等保存较好，故较适用于组织化学和细胞化学染色研究。

车响饼饯臆滇腔臣露粱脉豌湿围根捞抚鼎昼窥征溶逊颜蹲贼瞪北茅跌够婿膏乱矗笺严居华疑翰暂坝疥剥企伤剔斥涟谓镰捍陛承遗光胜颈余结矛率撑吴临殊墅烷款冕萄床渗相击需楔锌熟催遗埠逃贬毁惜忿坐昂席签姥霄易度醋填锌榴芦荧酷垫瓢搭计胞酬终蚂仕朋贸久艳暖锈和啼睛姐美淬擎亭紧窟潦窍氟敬际话染速哺非满撞想熔软驾苇诡拥娜水郡冰垂伯蜘它赶履糖界切递刻豺甜烷炭迄讹寺仆训朱砧狙毛躇启耘跑凡镰诀呼昭阁厅帆树素啪贸节碎梧遍互杜便遥扭疡悔楷紊庚塌丑烁乡刮锤率青须雏策毕幂渝钢袄娄擦栈岁摘夕灾筐变键靖预再骏茎培藐先痉桃辰秉引砌亥讼氦状丹亮虞馏偏钱消2012年咨询工程师网上辅导《项目决策分析与评价》4.组织化学和细胞化学术是应用化学或物理反应原理显示组织切片或细胞内某种化学成分，进行定位、定量及其与功能相关研究的方法。

方法种类甚多，显色反应的原理也各不相同，分别用于显示组织或细胞内的多糖类、脂类、各种酶及核酸等成分。

一些经典的染色方法如PAS反应显示组织内的多糖和蛋白多糖等，Feulgen反应显示细胞核内的DNA，用Sudan等染料显示脂肪细胞，以及显示细胞内酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、ATP酶、琥珀酸脱氢酶、过氧化物酶等的方法。

安全评价的基本原则是具备国家规定资质的安全评价机构科学、公正和合法地自主开展安全评价。

5.免疫细胞化学术是应用免疫学原理，通过特异性标记抗体与抗原（某种蛋白质、多肽等）的结合来显示细胞内某种抗原，并进行定位和定量的研究方法。

这种方法特异性强，敏感性高，进展迅速，应用广泛，已成为当今生命科学诸多学科及临床医学检验普遍应用的重要手段。

机体组织内的蛋白质种类繁多，多种蛋白质和多肽已被提纯并制成其抗体，目前有多种标记二抗（酶标记、荧光素标记、胶体金标记等）商品供应，使免疫细胞化学的操作更简便，应用更普遍。

（1）环境的使用价值。

环境的使用价值（UV）又称有用性价值，是指环境资源被生产者或消费者使用时，满足人们某种需要或偏好所表现出的价值，又分为直接使用价值、间接使用价值和选择价值。

6.原位杂交术是在免疫细胞化学的基础上发展起来的一种核酸分子杂交技术，用来检测细胞内某种蛋白质的基因（DNA片段或mRNA片段）表达和定位与定量研究，目前已成为细胞生物学、分子生物学研究的重要手段。

其基本原理是应用已知的并被标记的核酸片段（同位素或荧光素、酶等标记的探针）与细胞内待测核酸（RNA或DNA片段）进行杂交，在光镜和电镜下观察目的mRNA或DNA的存在与定位。

7.胶体金

8.石蜡切片制备程序：

①取材与固定；②脱水、透明与包埋；③切片与染色；④封固。

（一）安全评价的内涵五、简答题

1.免疫组织化学的全过程包括哪些步骤？

2.免疫组化标本固定时，好的固定剂应满足哪些要求？

3.简述荧光免疫组化技术直接法的原理。

4.何谓免疫电镜技术？

5.简述免疫胶体金标记的原理。

六、论述题

1.试述酶免疫组化技术的原理及其应用。

2.试述免疫标记电镜技术的原理。

三、判断题

1.×

2.√

环境总经济价值＝环境使用价值＋环境非使用价值

四、名词解释题

1.免疫组化技术是指在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，借助可见的标记物，对相应抗原或抗体进行定位、定性和定量检测的一种免疫检验方法。

2.胶体金是氯金酸在还原剂如白磷、维生素C枸橼酸纳和鞣酸等作用下，聚合成特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，故称为胶体金。

《中华人民共和国环境保护法》和其他相关法律还规定：

“建设项目防治污染的设施，必须与主体工程同时设计，同时施工，同时投产使用（简称“三同时”）。

防治污染的设施必须经原审批环境影响报告书的环境保护行政部门验收合格后，该建设项目方可投入生产或者使用。

”“三同时”制度和建设项目竣工环境保护验收是对环境影响评价的延续，从广义上讲，也属于环境影响评价范畴。

五、简答题

1.答：

1）抗原的提取与纯化

2）免疫动物或细胞融合，制备特异性抗体及纯化

3）标记物与抗体结合形成标记抗体

4）标本的处理

5）抗原抗体反应和呈色反应

6）显微镜下观察结果

2.答：

1）能快速固定抗原

2）防止抗原物质扩散

3）固定后的抗原能被抗体识别，不影响抗原抗体反应。

3.答：

将荧光素标记的已知抗体（或抗原）与切片（印片）中相应抗原（或抗体）直接发生反应，以检测组织与细胞标本中的靶抗原（或抗体）。

4.免疫电镜技术是将抗原抗体反应的特异性与电子显微镜的高分辨力相结合的在亚细胞和超微结构水平上对抗原进行定位分析的一种高度精确、灵敏的技术。

5.答：

胶体金颗粒标记蛋白质的原理是金颗粒表面负电荷与蛋白质正电荷之间非共价键的静电引力互相吸引，当达到范登华引力半径范围之内时，蛋白质与金颗粒表面形成牢固结合。

六、论述题

1.答：

酶免疫组化技术的原理：

酶免疫组化技术是利用酶标记已知抗体（或抗原），然后与组织标本中相应抗原（或抗体）在一定条件下相互结合形成带酶分子的复合物，酶遇到底物时，能催化底物水解，或氧化或还原，产生有色的不溶性产物，出现显色反应，在显微镜下进行细胞与组织表面或内部某种抗原成分的定位观察分析。

酶免疫组化技术的特点：

敏感性较免疫荧光技术更高，可用普通光学显微镜和电子显微镜观察结果，便于对组织细胞微细结构的分辩，染色标本可长期保存。

2.答：

免疫标记电镜技术的原理：

免疫标记电镜技术是利用电镜下可见的示踪标记物，如铁蛋白、胶体金等电子致密物质标记特异性抗体（或抗原），使之与组织超薄切片中的相应抗原（或抗体）反应，形成不溶性免疫复合物，用电子显微镜观察可见的标记物，间接证实免疫反应的发生。

标记物所在位置即为抗原抗体发生反应的部位。

同时，由于电子显微镜的高分辩力，可以对组织细胞进行超微结构水平上的分析。

此技术成功的关键是：

1）对细胞超微结构的完好保存；2）保持被检细胞或其亚细胞结构的抗原表位，其抗原性不受损伤；3）选择的免疫试剂能顺利穿透组织细胞结构与抗原结合。

①主体是人类；

论述题

1.试述组织化学技术的基本原理和与生物化学技术的的基本区别。

2.试述任意3种酶组织化学技术的反应原理。

3.试述免疫荧光双标记技术（间接法）的原理和当两种一抗及两种二抗分别混合使用时应注意的问题。

4.试述免疫组织化学ABC技术中，组织抗原、一抗、二抗和ABC如何依次相互结合的。

5.试述杂交严格度的定义、影响因素及控制杂交严格度的方法。

6.试述原位杂交组织化学的原理及在杂交反应过程中注意事项。