微生物学检验重点.docx

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微生物学检验重点

一、名词解释：

1、溶原性细菌：

获得温和噬菌体核酸的细菌。

2、前噬菌体：

温和噬菌体整合于细菌染色体（宿主基因组）中的核酸称为前噬菌体。

3、侵袭力：

病原微生物能突破宿主的防御系统，在机体内定植、繁殖和扩散的能力。

4、正常菌群MIC（最低抑菌浓度）：

在体外试验中，抗菌药物抑制培养基中某种细菌生长最低药物浓度，是药物抗菌活性指标，提示药物的抑菌能力（µg/ml）

5、MRSA：

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

6、迁徙生长现象：

变形杆菌在固体培养基上呈扩散性生长，形成以菌种接种部位为中心的，厚薄交替同心圆型的层层波状菌苔

7、菌丝：

真菌在适宜的环境中，由孢子出芽形成芽管，逐渐延长呈丝状，称为菌丝。

8、二相性真菌：

有些真菌在不同寄生环境和培养条件下可出现两种形态，称二相性真菌

9、病毒体：

一个成熟有感染性的病毒颗粒称为病毒体

二、填空、判断、选择、问答部分

（一）革兰氏染色的三个原理，操作步骤与临床意义【选择题】

1、原理：

（1）渗透学说：

革兰阳性菌细胞壁结构较紧密，肽聚糖层厚，含脂质少，脱色时乙醇不易渗入，反而使细胞壁脱水，通透性下降，胞内结晶紫与碘的复合物不易渗出。

格兰阴性菌细胞壁结构较疏松，肽聚糖层薄，含脂质多，易被乙醇溶解，是细胞壁通透性增加，胞内结晶紫与碘的复合物易被乙醇溶解溢出而被脱色。

【主要学说——细胞壁结构学说：

G+菌和G-菌的细胞壁成分差异大，对脱色剂的反应不同】

（2）化学学说：

革兰阳性菌含大量核糖核酸镁盐可与结晶紫、碘牢固结合，而不易被乙醇脱色。

革兰阴性菌内所含核糖核酸镁盐少，故易被脱色。

（3）等电点学说：

革兰阳性菌的等电点（pH2~3）比格兰阴性菌（pH4~5）低，在相同pH的条件下，革兰阳性菌比格兰阴性菌所带的负电荷多，与带正电荷的碱性染料结合较牢固，而不易脱色。

2、操作步骤：

①细菌涂片、干燥，经火焰固定（菌膜>1cmX1cm）②结晶紫染色1min，水洗甩干③加碘液媒染1min，水洗甩干④加95%乙醇脱色30s，水洗甩干⑤用稀释复红或沙黄复染30s，水洗吸干后镜检

3、临床意义：

①鉴别细菌②选择治疗用药③与细菌致病性有关

（二）细菌的基本结构及功能、细菌的特殊结构及功能、细菌的变异机理【选择题】

细菌蛋白质的合成场所：

核糖体（同时也是药物作用的部分）

细菌内毒素的化学成分：

脂多糖

1、细菌的基本结构

基本结构：

由外向内依次为细胞壁、细胞膜、细胞质和核质等。

（1）细胞壁

a.主要功能：

①维持细菌固有形态②抵抗低渗作用③物质交换作用

2、化学组成和结构

a.肽聚糖：

是细菌细胞壁的主要成分，也是原核细胞所特有的成分

革兰阳性菌的肽聚糖（多）：

聚糖骨架、四肽侧链和五肽交联桥三部分构成的三维网架结构

革兰阴性菌的肽聚糖（少）：

聚糖骨架、四肽侧链两部分构成的二维网架结构

b.磷壁酸：

革兰阳性菌细胞壁特有。

作用：

调节、维护细菌细胞内离子平衡作用，是革兰阳性菌重要的表面抗原，与细菌致病性有关。

壁磷壁酸：

由肽聚糖延伸；膜磷壁酸：

由细胞膜延伸

c.外膜层：

革兰阴性菌细胞壁特有。

细胞壁肽聚糖外侧，由外向内依次为脂多糖、脂质双层、脂蛋白三部分①脂多糖：

格兰阴性菌内毒素，脂质A为主要毒性成分

（2）细胞膜：

一层柔软而富有弹性的半渗透性双层脂质生物膜结构，脂质双层中镶嵌有多种蛋白质。

中介体：

细胞膜内陷折叠而成的囊状结构。

（3）细胞质

有质粒（是染色体外遗传物质）

包括：

F质粒（至育性质粒）R质粒（耐药性质粒）Vi质粒（毒力质粒）

2、细菌的特殊结构（鞭毛、荚膜、芽孢和菌毛）

（1）鞭毛：

附着在菌体上面胞壁外的细长呈波浪形弯曲的丝状物。

a.类型：

周毛菌，单毛菌，双毛菌，丛毛菌。

b.作用和意义：

①是细菌的运动器官②与细菌致病性有关③与细菌鉴定、分类及分型有关

（2）菌毛：

是指菌体表面具有比鞭毛更细、短而直的丝状附属物。

化学本质：

蛋白质

a.普通菌毛：

是细菌的黏附器官，与细菌致病性密切相关

b.性菌毛：

F质粒控制，表面有性菌毛的称为雄性菌（F+），无性菌毛称为雌性菌（F-）

（3）荚膜：

某些细菌在细胞壁外包绕的一层黏液性物质。

化学本质：

多糖类，少数为多肽

通常在机体内和营养丰富的培养基中易形成荚膜

a.作用：

①抗吞噬②抗杀伤③抗干燥④与致病性有关⑤细菌鉴别和分型的依据⑥免疫原性

（4）芽孢：

是某些细菌在一定条件下细胞质、核质浓缩脱水而形成的一个折光性很强，具有多层膜状结构、通透性很低的圆形或卵圆形的小体。

a.形成条件：

缺乏营养物质，有害代谢产物的堆积

b.性质：

休眠状态，非繁殖态。

芽孢可脱离母体单独存活

c.特性：

①保留原菌活性②细菌的休眠状态③可转变为繁殖体（不是繁殖方式）

d.作用和意义：

①增强细菌抵抗力②判断灭菌效果的指标③鉴别细菌

（5）细菌的非典型形态与结构

细菌L型：

即细菌细胞膜缺陷型，无细胞壁仍可存活

主要生物学特性：

①多形性②大多数染成革兰阴性③普通培养不上涨（3%~5%高渗培养）④缓慢生长⑤荷包蛋样菌落（中间凸起，四周扁平）⑥可返祖

3、细菌变异的机制

（1）基因突变——点突变

突变：

是指细菌遗传物质的结构发生突然而稳定的改变，所致的变异现象可遗传给后代。

（2）基因转移及重组

a.基因转移：

外源性遗传物质由供体菌转入受体菌细胞内的过程。

b.基因重组：

供体菌的基因进入受体菌细胞，并在其中自行复制与表达，或与受体菌DNA整合在一起的过程。

c.基因转移及重组的方式：

转化、接合、转导、溶原性转换、原生质融合等

①转化：

受体菌直接摄取环境中供体菌游离的DNA片段，并将其整合至自身基因组中，从而获得供体菌的部分遗传性状。

②接合：

通过性菌毛相互沟通，将遗传物质从供体菌直接转移给受体菌。

③转导：

以噬菌体为载体。

将供体菌的遗传物质转移到受体菌，经重组而使受体菌获得供体菌的某些遗传性状。

④溶原性转换。

⑤原生质融合。

基因来源

转移方式

转化

供体菌

直接摄取

接合

供体菌

性菌毛

转导

供体菌

噬菌体为载体

溶原性转换

噬菌体

整合

（三）培养基的制备方法，常用培养基的原理及用途（SSMACMIUO/F采用的指示剂，结果观察等），常见生化反应的原理

1、制备程序：

调配—>溶化—>矫正pH—>过滤澄清—>分装—>灭菌—>检定—>保存

矫正pH：

一般将培养基的pH值矫正至7.4~7.6。

由于培养基经高压灭菌后，其pH降低约0.1~0.2，因此矫正时pH应比实际值高0.1~0.2

分装：

①基础培养基：

一般分装于三角烧瓶，灭菌后备用；②琼脂平板；③半固体培养基：

一般分装于试管中，分装量约为试管长度的1/3，灭菌后直立凝固待用；④琼脂斜面：

分装量约为试管1/5，灭菌后趁热放置斜面凝固，斜面长度约为试管长度的2/3；⑤液体培养基：

分装与试管，分装量为试管长度的1/3，灭菌后备用

保存：

标记名称、制备时间等，保鲜袋内存放于4℃冰箱或冷暗处，保存时间一般不超2周。

2、常用培养基的原理及用途

（1）SS：

强选择分离致病肠杆菌

（2）MAC：

弱选择分离正常肠杆菌

（3）MIU：

①原理：

见各试验各自原理。

动力：

有鞭毛的细菌有动力，穿刺培养后穿刺线不清晰。

②用途：

检测细菌动力+靛基质试验（吲哚试验）+尿素酶试验

③结果观察：

a.接种线变宽、变模糊，培养基变浑浊为动力阳性；

b.加入靛基质试剂后形成玫瑰吲哚，则为靛基质试验阳性；

c.整只试管变为桃红色，则为尿素酶试验为阳性（产生尿素酸分解培养基中尿素产碱，使酚磺酞指示剂显桃红色）

（4）KIA：

①原理：

乳糖发酵+葡萄糖发酵+葡萄糖产气+硫化氢

②用途：

肠杆菌科细菌的鉴定和鉴别。

③结果判断：

a.整个培养基呈黄色，则乳糖发酵阳性；b.斜面呈红色，则葡萄糖发酵阳性；

c.试管底部有气泡，说明葡萄糖产气阳性；d.整只试管变黑，则硫化氢阳性（细菌能分解培养基中硫氨基酸，可产生H2S，H2S与培养基中枸橼酸钠铵铁反应，产生黑色FeS）

（5）O/F：

①原理：

细菌分解葡萄糖产生有机酸，使培养基pH下降，培养基由绿色变为黄色。

指示剂溴麝香草酚蓝（黄色<—绿色—>蓝色）

②用途：

用于肠杆菌和非发酵菌的鉴别，葡萄球菌和微球菌的鉴别

③结果判断：

O：

开放管变黄，封闭管不变（绿色）；F：

开放管变黄，封闭管也变黄；K：

开放管不变，封闭管变绿（产碱）；N：

开放管不变，封闭管也不变（不利用）

3、常见生化反应的原理

（一）十个基础试验

IMViC试验：

I——吲哚试验M——甲基红试验V——V-P试验C——枸橼酸盐试验

1、糖（醇、苷）类发酵试验

①原理：

细菌分解糖产生有机酸，使培养基pH下降，指示剂溴甲酚紫由紫变黄（酚红则是由红变黄），如该菌具有甲酸解氢酶，可进一步分解甲酸产生H2和CO2，使倒插管中出现气泡。

②方法：

细菌接种糖发酵管，37℃、24h孵育后观察结果

③结果判断：

有的细菌能分解某些糖产酸产气（AG/+），有的只能产酸而不产气（A/+），有的则不能分解糖类（N/-）

2、葡萄糖氧化/发酵试验（O/F试验）

①原理：

细菌分解葡萄糖产生有机酸，使培养基pH下降，指示剂溴麝香草酚蓝（黄色<—绿色—>蓝色）

②方法：

2支试管，一只加灭菌的液体石蜡覆盖，使培养基与空气隔绝；另一只不加灭菌的液体石蜡，培养基暴露于空气中。

35℃培养18~24h后，观察结果

③结果判断：

氧化型细菌（O）——仅在有氧环境中分解葡萄糖，在无氧环境中不分解，加液体石蜡不变色，不加液体石蜡变色；

发酵型细菌（F）——在有氧或无氧环境中都能分解葡萄糖，两管均变色

不利用型细菌（N）——有氧或无氧的环境中都不能分解葡萄糖，两管均不变色

产碱型细菌（K）——开放管变蓝，封闭管不变色

3、甲基红试验（MR试验）

①原理：

细菌发酵葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸进一步分解成甲酸、乙酸、乳酸等混合酸，培养基pH下降至4.4以下，加入甲基红指示剂变为红色，为MR试验阳性；若因其他因素使培养基pH在5.4以上，则甲基红指示剂呈黄色，为MR试验阴性。

②方法：

将待测菌接种于葡萄糖蛋白胨水中，35℃培育18~24h，滴加甲基红试剂，呈现红色为MR试验阳性，黄色为阴性

4、V-P试验

①原理：

有些细菌在发酵葡萄糖产生丙酮酸后，能使丙酮酸脱羧生成中性的乙酰甲基甲醇，其在碱性环境中北空气中的氧氧化成二乙酰，二乙酰与培养基内蛋白胨中精氨酸所含胍基发生反应，生成红色化合物。

②方法：

将待测菌接种于葡萄糖蛋白胨水中，35℃培育18~24h，按每毫升培养基加入0.3%肌酸或肌酐的40%KOH溶液0.1ml，充分混匀后观察，出现红色为V-P试验阳性。

5、靛基质试验（吲哚试验）

①原理：

某些细菌含色氨酸酶，分解培养基中的色氨酸产生靛基质（吲哚），靛基质与对二甲基氨基苯甲醛反应，生成红色复合物。

②方法：

将待测菌接种于葡萄糖蛋白胨水中，35℃培养18~24h，再在培养基中加入靛基质指示剂（对二甲基氨基苯甲醛），试剂与培养基两液面接触处呈红色为阳性，无色为阴性。

6、硫化氢试验

①原理：

有些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸，产生H2S，H2S与培养基中Fe2+（或Pb2+）反应生成黑色的硫化亚铁或硫化铅

②方法：

接种细菌，35℃培养18~24h，呈现黑色沉淀者为阳性，无变化者为阴性

7、尿素酶试验

①原理：

有些细菌能产生尿素酶，可分解尿素生成氨和CO2，氨在水液中形成碳酸铵，使培养基呈碱性

②方法：

将待检菌接种于尿素培养基中，培养后出现红色为阳性，不变色（橙色）为阴性。

8、苯丙氨酸脱氢酶试验

①原理：

某些细菌能产生苯丙氨酸脱氢酶，可使苯丙氨酸脱氢形成苯丙酮酸，苯丙酮酸与10%氯化铁作用形成绿色化合物。

②方法：

将待测菌接种于苯丙氨酸琼脂斜面上（接种量稍大），培养后在斜面上直接滴加4~5滴10%氯化铁试剂，出现绿色反应者即为阳性

9、氨基酸脱羧酶试验

①原理：

某些细菌产生氨基酸脱羧酶，可分解氨基酸使其脱去羧基产生胺和CO2，胺使培养基呈碱性反应

②方法：

将待检菌分别接种于氨基酸脱羧酶培养基（含葡萄糖、精氨酸或鸟氨酸或赖氨酸，指示剂为溴甲酚紫）和氨基对照管（不加氨基酸），培养后观察结果。

③结果鉴定：

对照管为黄色，若培养基由黄色变为紫色为氨基酸脱羧酶试验阳性，若仅发酵葡萄糖显黄色者为阴性。

10、枸橼酸盐利用实验

①原理：

有些细菌能利用培养基中的枸橼酸盐作为唯一的碳源、铵盐作为唯一的碳源。

细菌在生长过程中分解枸橼酸盐产生碳酸盐，分解铵盐生成氨，使培养基变碱性。

②方法：

将待测菌接种于枸橼酸盐培养基上，培养后观察。

阳性——淡绿色变为深蓝色。

（二）其他试验

1、触酶（过氧化氢酶）试验

①原理：

有的细菌具有触媒，能催化过氧化氢生成水核新生态氧，继而形成氧分子出现气泡

②方法：

取待检细菌少量，置于洁净的载玻片上，滴加3%H2O2试剂1~2滴，观察结果。

1分钟内产生大量气泡者为阳性，不产生气泡者为阴性。

2、氧化酶（细胞色素氧化酶）试验

①原理：

某些细胞具有氧化酶（细胞色素氧化酶），能将二甲基对苯二胺或四甲基对苯二胺氧化生成红色的醌类化合物

②方法：

取洁净滤纸条，粘取被检菌菌落，滴加氧化酶试剂1滴于菌落上；或将试剂直接滴加在被检细菌的菌落上。

阳性者立即出现红色，继而变为深红色至深紫色。

3、凝固酶试验

①原理：

金黄色葡萄球菌能产生凝固酶，使血浆中的纤维蛋白原转变为不溶性的纤维蛋白。

凝固酶有两种，一种是结合凝固酶，结合在细菌细胞壁上，可用玻片法检测；另一种是分泌到菌体外的游离凝固酶，可用试管法检测

②方法：

a.玻片法：

取未稀释的兔血浆和生理盐水各一滴分别置于载玻片的两侧，挑取金黄色葡萄球菌少许分别混匀，立即观察结果。

细菌在生理盐水中无自凝，菌液呈均匀混浊状态，为阳性；菌液聚集呈团块或颗粒状，为阴性

b.试管法：

3支洁净试管，各加入0.5ml1:

4稀释的血浆，在其中一只中加入0.5ml待检菌的肉汤培养液，另两只中加入0.5ml凝固酶阳性和阴性的菌株肉汤培养物做对照，37℃水浴箱中孵育1~4h后观察结果。

细菌使试管内血浆凝固成胶冻状，为阳性；试管内血浆能流动、不凝固，则为阴性（24h后不凝固才报告阴性）。

（四）正常菌群的分布、生理意义与致病条件、细菌毒力结构，感染类型，消毒与灭菌的方法与效果监测

1、正常菌群的分布、生理意义与致病条件

（1）分布：

（各部位的优势菌）

部位

常见微生物

皮肤

葡萄球菌、链球菌、铜绿假单胞菌、痤疮丙酸杆菌、类白喉棒状杆菌、白假丝酵母菌等

眼结膜

葡萄球菌、链球菌、结膜干燥棒状杆菌、不动杆菌、奈瑟菌等

口腔

甲型链球菌、丙型链球菌、葡萄球菌、卡他布兰汉菌、乳酸杆菌、梭杆菌、类杆菌、白假丝酵母菌、螺旋体、支原体等

鼻咽腔

链球菌、葡萄球菌、卡他布兰汉菌、类白喉棒状杆菌、肺炎链球菌、类杆菌、嗜血杆菌等

肠道

大肠埃希菌、类杆菌、双歧杆菌、乳酸杆菌、产气肠杆菌、变形杆菌、铜绿假单胞菌、芽孢杆菌、葡萄球菌、粪肠球菌、消化道链球菌、真杆菌、韦荣球菌、八叠球菌，白假丝酵母菌、念珠菌、腺病毒、ECHO病毒等

泌尿生殖道

大肠埃希菌、双歧杆菌、葡萄球菌、棒状杆菌、分枝杆菌、乳酸杆菌、拟杆菌、不动杆菌、奈瑟菌、类杆菌、念珠菌、支原体等

（2）生理意义：

①生物拮抗作用——作为障碍；②营养作用——产营养；

③免疫作用；④抗衰老作用——除废物；

（3）致病条件：

①寄居部位改变；②免疫功能低下；③菌群失调

（菌群失调是指宿主某部位正常菌群中各菌群之间的比例发生了大幅度的改变，由生理性组合转变为病理性组合的状态，分I、II、III度）

2、细菌的毒力结构——病原微生物的毒力因子

（一）侵袭力——荚膜、粘附素、侵袭性物质。

（普通菌毛起粘附作用）

侵袭力：

病原微生物能突破宿主的防御系统，在机体内定植、繁殖和扩散的能力

（二）毒素：

是指由生物体产生的、极少量即可引起人和动物中毒的物质

1、外毒素：

只要是革兰阳性菌和少量的革兰阴性菌合成及分泌的毒性蛋白质产物。

（1）化学本质：

蛋白质。

①不耐热②具有很强的抗原性

（2）主要特性：

①具有菌种特异性②毒性作用很强③毒性作用具有组织选择性④具有良好的免疫原性（抗原性强）⑤多数外毒素不耐热⑥外毒素都是蛋白质，易被酸及蛋白质水解酶灭活

（3）检测方法：

体外——Ag-Ab反应；体内——毒素抗毒素中和

（4）分类：

神经毒素（破伤风痉挛毒素、肉毒毒素），细胞毒素（白喉毒素、A群链球菌致热毒素），肠毒素（霍乱弧菌肠毒素、葡萄球菌肠毒素等）三类

2、内毒素：

是格兰阴性菌细胞壁中的脂多糖成分

（1）主要特点：

①产生于革兰阴性菌②化学性质是脂多糖③对理化因素稳定④毒性作用相对较弱，且对组织无选择性⑤抗原性弱

（2）检测方法：

鲎试验

3、感染类型——

（1）按感染的发生发展：

1、不感染：

90%以上

2、隐性感染：

当宿主的抗感染免疫力较强，或侵入的病原体数量不多、毒力较弱，感染后对机体损伤较轻，不出现或出现不明显的临床症状。

隐性感染后，机体常可获得足够的特异性免疫力。

3、显性感染——传染病

①根据病情缓急分为：

急性感染，慢性感染

②根据感染部位和性质分为：

局部感染，全身感染

细菌全身感染常见情况：

①毒血症——血中可检出毒素，检不出细菌（病毒不进入血液，但其产生的外毒素入血）②菌血症——血中可检出细菌，检不出毒素③败血症——血中可检出细菌和毒素④脓毒血症⑤内毒素血症

4、潜伏性感染：

病原体感染人体后，寄生在机体中某些部位，由于机体免疫功能足以将病原局限化而不引起显性感染，但又不足以将病原体清除时，病原体便可长期潜伏起来，等待机体免疫功能下降时，才引起显性感染。

（2）、按感染发生场合

1、医院感染：

病人在住院期间发生的感染，又称院内感染（细菌性为主）

①交叉感染②内源性感染③医源性感染

2、社区感染：

在医院内发生的一切感染

（3）、医院感染检测的微生物检验

1、物体表面：

棉拭纸法，压印法

2、空气：

平皿沉降法，空气采样器采样法

3、医务人员手部：

棉拭纸法（右手指掌面）

4、环境：

手术室，病房

细菌全身感染常见情况：

①毒血症：

致病菌侵入宿主体后，只在机体局部生长繁殖，病菌不进入血液，但其产生的外毒素入血，因其特殊的毒性症状（血中可检出毒素，检不出细菌）

②菌血症：

致病菌由局部侵入血流，但未在血流中生长繁殖，只是短暂的一过性通过血流循环到达体内适宜部位后再进行繁殖二致病（血中可检出细菌，检不出毒素）

③败血症：

致病菌侵入血流后，在其中大量繁殖并产生毒性物质，引起全身中毒症状（血中可检出细菌和毒素）

④脓毒血症：

指化脓性病菌侵入血流后，在其中大量繁殖，并通过血流扩散至宿主体得其他组织或器官，产生心的化脓性病灶

⑤内毒素血症：

格兰阴性菌侵入血流，并在其中大量繁殖，崩解后释放出大量内毒素；也可由病灶内大量革兰阴性菌死亡、释放的内毒素入血所致。

4、消毒与灭菌的方法与效果监测

（一）与细菌控制有关的基本概念

1、消毒：

是指杀死物体上的病原微生物但不一定能杀死细菌芽胞或非病原微生物的方法

2、灭菌：

是指杀灭物体上所有的微生物

3、防腐：

是指防止或抑制微生物生长繁殖的方法

4、无菌和无菌操作：

无菌是指没有活的微生物存在；无菌操作：

防止微生物进入机体或其他操作对象的方法称为无菌操作。

（二）物理控制法【原理、适用对象】

1、热力灭菌法：

利用高温进行灭菌。

不同种类的细菌对高温的耐受力不同，多数无芽孢细菌在55~60℃经30~60min后死亡，在100℃时数分钟内死亡。

细菌芽胞耐高温。

（1）干热灭菌法：

以热空气为导热介质，提高物品温度，以达到灭菌目的。

①焚烧：

仅适用于无经济价值的物品；②灼烧：

将待灭菌的物品直接放于火焰中灼烧；③干烤法：

将物品置于密闭的专用干烤箱内，通电后利用高热空气达到灭菌目的。

此法适用于耐高温的物体；④红外线

（2）湿热灭菌法

①高压蒸汽灭菌：

a.原理：

在蒸汽不外泄的情况下，随着灭菌器内压力的增高，温度也逐渐升高。

当压力为103.4kPa（1.05kg/cm^3）时，温度达到121.3℃，维持15~30min可杀死所有的细菌繁殖体和芽胞。

b.此法适用于耐高温和不怕潮湿的物品和灭菌。

②间歇灭菌法：

适用于一些不耐高温的物品的灭菌

③巴氏灭菌法：

a.采用较低温度来杀死物品或液体中的病原菌，同时又不破坏其中的营养成分。

b.主要用于牛奶等物的消毒。

c.61.1~62.8℃加热30min，或71.7℃加热15~30s

④煮沸法：

a.将消毒物品浸入水中，加热至沸腾（100℃），经5~6分钟，可杀死一般细菌的繁殖体，但对芽胞无影响。

b.本法适用于饮水、食具、注射器和手术器械的消毒等。

2、紫外线和电离辐射

（1）紫外线：

波长265~266nm；杀菌机理——损伤细菌DNA；特点——杀菌力强，穿透力强；用途——适用于物体表面及空气灭菌

（2）电离辐射：

X射线、β射线、γ射线等；杀菌机理——细菌细胞内水分被电离成H+和OH-，这些游离基可破坏细菌核酸、酶和蛋白质；特点——杀菌力强，穿透力强，不升高温度；用途——适用于塑料制品等不耐热物体

3、滤过：

采用机械性阻留方法，利用滤菌器除去液体或空气中的细菌等微生物。

适用于—一不耐高温、也不能用化学方法消毒的液体（如血清、抗生素、维生素等制品）的除菌，但不能除去病毒和L型。

4、干燥：

使细菌脱水、菌体蛋白质变性和盐类浓缩，从而妨碍细菌代谢、生长繁殖，产生杀菌抑制作用。

（三）化学控制法

常用消毒剂杀菌机制：

①使菌体蛋白质变性或凝固；②影响细菌的酶系统和代谢活性；③损伤菌体细胞膜改变细胞膜的通透性

影响消毒剂作用的因素：

浓度越高，温度越高，时间越长，越有效。

（五）药敏试验的基本概念、KB法与稀释法的原理、方法、影响因素与质量控制方法、β-内酰胺酶检测的方法、联合药敏试验的主要指针

1、药敏试验：

测定抗感染药物在体外对病原微生物有无抑菌作用的方法和抗菌药物敏感性试验（AST）

2、K-B法的原理、方法、影响因素与质量控制

①原理：

将含有定量抗菌药物的纸片贴在咦接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中的水分溶解后不断向纸片周围扩散形成递减的梯度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成无菌生长的透明圈即为抑菌圈。

抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的MIC呈负相关关系。

②方法：

a.接种：

用无菌棉签浸入细菌悬液中，将拭子在试管壁上轻轻挤压以挤去过多的菌液。

棉签在三个方向均匀涂抹琼脂表面（每次转60°）使菌液均匀分布，最后沿平板内缘涂抹一周；

b.贴放药物纸片：

平板置室温干燥3~5分钟后，用纸片分配器或无菌镊子贴上标准抗生素纸片，用镊子轻压纸片使之与琼脂紧贴。

各抗菌纸片中心距离应大于24mm，纸片距平板内缘应大于15mm。

c.培养：

贴好纸片15min内，置35℃孵育16~18h后阅读结果；苛养菌应孵育在含5%CO2的环境中孵育20~24h；葡萄球菌和肠球菌对甲氧西林和万古霉素的药敏试验应孵育24h。

平板最好单独平放，不超过2个，使平板受热均匀。

③影响因素：

培养基，菌量，药敏纸片，操作方法，培养条件、温度和时间的控制，抑菌圈测量工具的精度及测量方法，质控标准菌株本身的药敏特性是否合格、有无变异。

④质量控制：

教材P116

3、稀释法的原理：

①微量稀释法：

聚乙烯板内含有各种稀释度的抗菌药物，加入定量菌液经一定时间培养后观察结果。

凡孔底部清晰不出现细菌沉淀的最低药物浓度即为该抗菌药物对细菌的最小抑菌浓度（MIC）。

②琼脂稀释法：

接种待测的菌株至含不同浓度抗菌药物的MH琼脂平板上，经一定时间和温度的培养后，无细菌生长的最低药物浓度即为测试菌的MIC。

4、β-内酰胺酶检测的方法：

①淀