纯化水微生物限度检查分析报告方法确认方案设计.docx
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纯化水微生物限度检查分析报告方法确认方案设计
纯化水微生物限度检查分析方法确认方案
审批
职务
姓名
签名
日期
编写人
质量中心化验员
审核人
工程部经理
质量中心副经理
质量中心副经理
质量中心副经理
质量中心经理
人力资源部经理
批准人
质量负责人
变更记录
版本号
生效日期
修订原因
01
新修订
1.
介绍
微生物限度检查方法用于纯化水微生物限度测定，方法来源中国药典2010版，二部，附录ⅪJ“微生物限度检查法”。
本方案的目的是建立文件记录证明纯化水微生物限度测定方法在本公司质量控制实验室的适用性和可重现性，方法能够提供一致、可信和准确的微生物限度检测数据。
2.目的
对《纯化水微生物限度测定标准操作规程》（SOP/A0/QC03/038）进行方法确认。
证明该方法适用于纯化水微生物限度检查，具有准确性和可靠性，可达到控制产品质量的目的。
3.适用范围
本验证方案适用于纯化水的微生物限度检查放行测定。
4.职责
4.1验证小组职责
✓对照品/试剂/物料/样品确认
✓方案的实施，数据的收集
✓最终报告的编写
✓偏差报告的编写
4.2工程部职责
✓提供在方案执行中所需仪器的校准证书
✓执行前审核本方案
✓报告审核
4.3质量中心职责
✓执行前审核本方案
✓报告审核
4.4验证办公室职责
✓执行前审核本方案
✓报告审核
4.5质量管理负责人职责
✓批准本方案
5.缩略语
在下面的表格中规定了本方案中使用的缩略语。
缩略语
定义
ChP
ThePharmacopeiaofthePRC
中国药典
COA
CertificateofAnalysis
检验报告单
GMP
GoodManufacturingPractice
药品生产质量管理规范
CFDA
ChinaFoodandDrugAdministration
国家食品药品监督管理总局
SOP
StandardOperatingProcedure
标准操作规程
SMP
StandardManagementProcedure
标准管理规程
NC
NegativeControl
试验阴性对照
PC
PositiveControl
试验阳性对照
6.
法规指南
为了编写本方案，参考了以下文件：
6.1法规
✓中国GMP（2010年修订）中国食品药品监督管理局（CFDA）
✓中国药典（ChP）二部2010版
6.2指南
✓GMP指南中国食品药品监督管理总局（CFDA）2010
7.参考文件
为编写本方案，参考了以下文件：
文件名称
文件编号
版本
确认与验证标准管理规程
SMP/A0/QA02/001
01
生物安全柜使用标准操作规程
SOP/A0/SB05/050
00
QC实验室验证总计划
VMP-QC-2014
01
纯化水微生物限度测定标准操作规程
SOP/A0/QC03/038
00
纯化水质量标准
STP/A0/BZ05/002
00
纯化水检验操作规程
STP/A0/CG05/002
00
培训标准管理规程
SMP/B0/RY/004
00
偏差处理标准管理规程
SMP/A0/QA00/022
00
变更控制标准管理规程
SMP/A0/QA00/023
00
8.
方法描述
8.1测定方法描述
8.1.1实验准备
8.1.1.1核对待检供试品信息是否正确。
8.1.1.2核对试验用培养基、试剂、耗材是否在有效期内。
8.1.1.3核对试验用培养基适用性检查是否合格。
8.2规程
8.2.1检验量：
纯化水的检验量为1ml。
8.2.2供试液的制备：
以原液为供试液。
8.2.3细菌、霉菌及酵母菌检查法
量取100ml无菌0.9%氯化钠溶液加到培养器中，然后取1ml纯化水加入培养器中，并减压抽滤直至抽干。
然后将培养器倒置于洁净工作台上，使滤膜裸露，浇注温度不超过45℃的营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基培养。
阴性对照试验：
取试验用的稀释液100ml，照上述薄膜过滤法操作，作为阴性对照。
阴性对照不得有菌生长。
培养和计数：
细菌培养3天，霉菌、酵母菌培养5天，逐日观察菌落生长情况，点计菌落数，必要时，可适当延长培养时间至7天进行菌落计数并报告。
8.3可接受标准
纯化水每1ml中细菌、霉菌及酵母菌数总数不得过50CFU。
9.
验证设计
9.1验证不确定性控制措施
如果没有其它要求，下列操作和条件应被控制在要求的限度内，以控制验证不确定性。
操作/条件
限度
刻度吸管或tip头
使用容量应大于满容量的10%
温度
±1℃内
9.2潜在风险清单
在给定分析方法生命周期中，不可避免“方法环境”的变化从而影响方法性能，方法的所有关键参数应被明确并经验证。
风险评估表达使用定性描述，如“高”“中”“低”。
一个风险的判定依靠风险优先性来定义。
A.严重性（S）
对失效可能造成的影响进行描述（即使没有失效发生的大的可能性）？
o低（L）：
预计会对产品质量无影响或很微小的影响（质量在标准之内）。
o中（M）：
预期对产品质量具有较小的影响。
（质量不符合标准要求）。
o高（H）：
预期对产品质量具有显著的影响（质量不符合标准要求）。
B.可能性（P）
描述失效发生的可能性（依据失效来源的描述）。
o低（L）：
产品生命周期内不可能发生。
o中（M）：
产品生命周期内可能会发生。
o高（H）：
产品生命周期内将会发生多次。
C.可检测性（D）
描述故障的可检测性。
o低（L）：
不太可能由操作人员或设备控制系统查到。
o中（M）：
可由操作人员很容易地查到或具有报警。
o高（H）：
通过设备控制系统自动检测并报警，可能自动采取恢复措施。
将把严重性和可能性合在一起来评价风险级别。
将采用如下方法来确定风险级别：
风险级别
可能性低
可能性中
可能性高
严重性高
风险级别2
风险级别1
风险级别1
严重性中
风险级别3
风险级别2
风险级别1
严重性低
风险级别3
风险级别3
风险级别2
在此步将对风险级别进行评价。
在进行评价之后，将风险级别和可检测性合并到一起来确定整体的风险优先性。
风险优先性的“高”以“H”表示，“中”以“M”表示，“低”以“L”表示。
通过如下方式对风险优先性进行评价：
风险优先性
可检测性低
可检测性中
可检测性高
风险级别1
风险优先级别高
风险优先级别高
风险优先级别中
风险级别2
风险优先级别高
风险优先级别中
风险优先级别低
风险级别3
风险优先级别中
风险优先级别低
风险优先级别低
潜在风险和控制如下：
因素
变量
失败模式
S
P
D
风险级别
风险优先级别
验证研究
人员
操作人员操作差异、失误
检测结果准确性差
H
L
H
M
L
否
检测环境
环境中微生物污染或温湿度不符合要求
检测结果准确性差
H
L
H
M
L
否
检测方法
制品的干扰性
检查结果不正确
H
H
L
H
H
分析方法确认
样品测量
样品在运输及存放过程中产生污染
检查结果不正确
H
L
H
M
L
否
样品存放期限超出规定
检查结果不正确
H
L
H
M
L
否
方法的关键参数经确定并将在实验过程中进行控制，H级因素将进行独立验证以保证方法的稳定；L级因素将通过实验室控制措施降低风险，不再进行验证。
9.3试验设计
《纯化水微生物限度测定标准操作规程》（SOP/A0/QC03/038）用于纯化水微生物限度测定，方法为中国药典2部附录ⅪJ“微生物限度检查法”。
本公司拟将此方法用于纯化水的微生物限度测定的放行检验。
经过方法评估，方法应进行确认以保证方法在本公司微生物实验室的适用性。
根据评估结果和方法使用目的，验证性能参数设置薄膜过滤法计数方法验证。
验证参数
可接受标准
测试报告
薄膜过滤法计数方法验证
每次试验每种试验菌的回收率均需≥70%
测试报告7
10.文件管理规范
记录用笔：
✓使用黑色签字笔记录。
签名：
✓被授权的人员才能签署文件。
✓应签全名，除非文件另有规定。
✓签名应始终一致。
填写栏目：
✓所有栏目必须填写。
✓填写内容与上面栏目相同也应重新填写。
✓填写栏目内容，应按照实际测试情况，对测试结果使用对勾“√”填写，只能选择一种测试结果填写。
如下：
文件名称
是否完整可读
微生物限度检查分析方法确认方案
□√是□否
✓若有单个栏目不需要填入内容，则在空白处填写英文字母“不适用”的简写“N/A”，表示无此项内容。
✓若有多个栏目不需要填入内容，应用斜线划掉，斜线上方填写“N/A”，下方签名并注明日期。
如下：
N/A
签名日期
更改错误：
✓在错误处划线，填入正确的内容，签名并注明更改日期，确保原先信息仍清晰可识别。
如：
2012年01月02日修改人签名和修改日期
2012年01月01日
记录日期：
✓年用4位数表示，日和月用2位数表示
如：
2012年09月01日
书面语及名称：
✓使用规范的书面语及名称。
文件前后名称要一致。
11.
测试项目列表
在下面的表格列出了本方案将要执行的测试。
编号
名称
12.1
人员确认
12.2
仪器/设备确认和校准确认
12.3
文件确认
12.4
培养基/试剂确认
12.5
样品确认
12.6
薄膜过滤法计数方法验证
12.
测试描述和可接受标准
12.1人员确认
✓目的
确认所有执行本方案的人员符合要求。
✓程序
●列出所有执行本方案的人员（姓名、部门、职位）。
●在验证程序开始前，对所有参与测试的人员进行方案和相关技能培训，培训应该有记录。
●执行方案人员本人在签名处使用黑色签字笔书写本人签名以及日期。
✓可接受标准
●所有执行本方案人员本人使用黑色签字笔正确书写本人签名及日期。
●所有执行本方案的人员已经过方案和相关技能培训并已记录。
✓测试报告
测试结果填写在测试报告1《人员确认》表内。
12.2仪器/设备确认和校准确认
✓目的
保证使用的仪器/设备都已经过验证和校准，并有文件记录。
✓程序
●列出所有实验使用的仪器/设备。
●在测试报告2《仪器/设备确认和校准确认》中对每一台测试所用的仪器应标识出仪器名称、编号、型号、用途、校准证明、校准日期、下次校准日期；每台设备应标识出设备名称、编号、型号、用途、验证文件编号、验证日期、下次验证日期。
✓可接受标准
●测试使用仪器仪表均经过确认和校准，且在有效期内。
●用于校准的计量标准应该能够追溯到中国国家计量基准或相当的国际标准。
●所有确认和校准有文件记录。
✓测试报告
测试结果填写在测试报告2《仪器/设备确认和校准确认》表内，如有偏差记录在偏差报告中。
12.3文件确认
✓目的
确认验证相关的SOP和验证方案已经完成审批。
✓程序
●在测试报告3《文件确认》中记录验证所需要文件名称、文件编号、版本，存放位置和文件状态。
●检查本验证方案的批准状态。
✓可接受标准
●文件放置在相应操作现场适当的区域；
●文件已经过批准，并且是现行版本，以保证准确性。
●本验证方案已经批准。
✓测试报告
测试结果填写在测试报告3《文件确认》表内，如有偏差记录在偏差报告中。
12.4培养基/试剂确认
✓目的
确认使用的培养基和试剂的适用性。
✓程序
●列出实验使用的培养基和试剂。
●检查培养基的来源/批号/有效期/保存条件，非官方对照品提供检验报告单。
●检查试剂来源/批号/有效期/保存条件。
✓可接受标准
所有培养基/试剂均来自批准的供应商，存放在需要的条件下，均在有效期内。
✓测试报告
测试结果填写在测试报告4《培养基/试剂确认》表内，如有偏差记录在偏差报告中。
12.5样品确认
✓目的
确认验证所用样品的来源和适用性。
✓程序
●检验使用样品生产信息或来源信息。
●检查样品的包装完整程度及状态。
✓可接受标准
最终产品应为生产规模产品；验证前样品包装完整，样品外观符合规范。
✓测试报告
测试结果填写在测试报告5《样品确认》表内，如有偏差记录在偏差报告中。
12.6薄膜过滤法计数方法验证
✓目的
检查验证用纯化水对薄膜过滤法计数方法检测无干扰。
✓程序
●供试液的制备：
取原液作为供试液。
●验证用菌种应在5代内使用，按下表执行：
菌种名称
菌种编号
菌种类型
菌种来源
枯草芽胞杆菌
CMCC（B）63501
需氧细菌
中国食品药品检定研究院
大肠埃希菌
CMCC（B）44102
需氧细菌
中国食品药品检定研究院
金黄色葡萄球菌
CMCC（B）26003
需氧细菌
中国食品药品检定研究院
黑曲霉
CMCC（F）98003
真菌
中国食品药品检定研究院
白色念珠菌
CMCC（F）98001
真菌
中国食品药品检定研究院
●试验组：
取稀释液100ml加入培养器中，然后取纯化水1ml加入培养器中，并减压抽滤直至抽干，加入制备的50～100CFU的试验菌，过滤，将培养器倒置于洁净工作台上，使滤膜裸露，浇注温度不超过45℃的营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基培养。
●菌液组：
取制备的50～100CFU的试验菌，倾注培养基，冷却后至合适的温度培养。
●供试品对照组：
取稀释液100ml加入培养器中，然后取纯化水1ml加入培养器中，并减压抽滤直至抽干，浇注温度不超过45℃的营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基培养。
●稀释液对照组：
取稀释液100ml，过滤，加入制备的50～100CFU的试验菌，过滤，将培养器倒置于洁净工作台上，使滤膜裸露，浇注温度不超过45℃的营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基培养。
●上述三组试验平行做三次。
●试验组菌回收率=（试验组平均菌落数-供试品对照组平均菌落数）/菌液组平均菌落数。
●稀释液对照组的菌回收率=稀释液对照组平均菌落数/菌液组平均菌落数。
✓可接受标准
●稀释液对照组的菌回收率均应不低于70%。
●若试验组的菌回收率均不低于70%，则可按该供试液制备方法和菌落计数法测定供试品的细菌、霉菌及酵母菌数；若任一次试验中试验组的菌回收率低于70%，应建立新的方法，消除供试品的抑菌活性，并重新验证。
✓测试报告
测试结果填写在测试报告6《薄膜过滤法计数方法验证》表内，如有偏差记录在偏差报告中。
13.偏差处理
如验证执行过程中出现任何偏差，需按照《偏差处理标准管理规程》（SMP/A0/QA00/022，版本：
00）处理。
对验证中出现每个偏差都要给予一个唯一的编号并记录在偏差报告里。
在测试报告7《偏差清单》中汇总所有的偏差，并注明解决日期。
如有需要可复印偏差报告。
14.变更控制
如确认中存在变更，需按照《变更控制标准管理规程》（SMP/A0/QA00/023，版本：
00）进行控制并提交报告，变更控制表将被收集。
15.验证报告
执行本方案并完成了纠正措施之后，将生成一份最终报告。
将编写对所获得结果的总结，并根据这些结果得出结论。
由负责验证的审核人及批准人做出正式的接受/拒绝验证结果的决定。
报告将包括签批页、测试结果总结、偏差处理、变更控制、验证结论和建议、测试记录、附件清单和支持性附录清单组成。
16.附件清单
在附件清单中记录所有附在本方案中的测试报告，注明附件编号、测试报告号、名称和页数。
17.支持性附件清单
在支持性附录清单中记录所有对测试报告数据进行支持的各类文件，如：
培训记录、校准证书、各种图表等文件。
应注明附录编号、名称和页数。
附录编号可遵循附录所属附件号码，即所属附件1的附录即为附录1。
如附件中仅有一个附录，则以附录所属附件编号表示，例如：
附录1，附录4。
如一个附件中包含多个附录，可按顺序进行编号，例如：
附录1-1，附录1-2。
名称为此附录的名称。
页数为此项附录所包含所有页数。
18.测试报告
按照本方案中的测试项目设置，测试报告为：
测试报告1
人员确认
目的
确认所有执行本方案的人员符合要求。
程序
列出所有执行本方案的人员（姓名、签名、部门、职位）。
在验证程序开始前，对所有参与测试的人员进行方案和相关技能培训，培训应该有记录。
执行方案人员本人在签名处使用黑色签字笔书写本人姓名。
可接受标准
所有执行本方案人员本人使用黑色签字笔正确书写本人签名及日期。
所有执行本方案的人员已经过方案和相关技能培训并已记录。
序号
姓名
签名
部门
职位
是否经过培训
培训记录
日期
1.
质量中心
2.
质量中心
3.
质量中心
4.
质量中心
备注/偏差/支持性文件：
结论：
□合格□不合格
执行人签字/日期
审核人签字/日期
测试报告2
仪器/设备确认和校准确认
目的
保证使用的仪器/设备都已经过验证和校准，并有文件记录。
程序
列出所有实验使用的仪器/设备。
在测试报告2《仪器/设备确认和校准确认》中对每一台测试所用的仪器应标识出仪器名称、编号、型号、用途、校准证明、校准日期、下次校准日期；每台设备应标识出设备名称、编号、型号、用途、验证文件编号、验证日期、下次验证日期。
可接受标准
测试使用仪器仪表均经过确认和校准，且在有效期内。
用于校准的计量标准应该能够追溯到中国国家计量基准或相当的国际标准。
所有确认和校准有文件记录。
序号
仪器名称
编号
型号
用途
校准证明
校准日期
下次校准日期
结果
1.
微生物限度检验仪
□合格□不合格
序号
设备名称
编号
型号
用途
验证文件编号
验证日期
下次验证日期
结果
2.
生物安全柜
□合格□不合格
3.
生化培养箱
□合格□不合格
4.
霉菌培养箱
□合格□不合格
备注/偏差/支持性文件：
结论：
□合格□不合格
执行人签字/日期
审核人签字/日期
测试报告3
文件确认
目的
确认验证相关的SOP和验证方案已经完成审批。
程序
在测试报告3《文件确认》中记录验证所需要文件名称、文件编号、版本，存放位置和文件状态。
检查本验证方案的批准状态。
可接受标准
文件放置在相应操作现场适当的区域；
文件已经过批准，并且是现行版本，以保证准确性。
本验证方案已经批准。
序号
文件名称
文件编号
版本号
存放位置
文件状态
1.
纯化水微生物限度检查分析方法确认方案
AMV-VP-QC-02
01
现场
□已批准□草稿
2.
确认与验证标准管理规程
SMP/A0/QA02/001
00
质量中心
□已批准□草稿
3.
生物安全柜使用标准操作规程
SOP/A0/SB05/050
00
现场
□已批准□草稿
4.
QC实验室验证总计划
VMP-QC-2014
01
质量中心
□已批准□草稿
5.
纯化水微生物限度测定标准操作规程
SOP/A0/QC03/038
00
现场
□已批准□草稿
6.
纯化水质量标准
STP/A0/BZ05/002
00
质量中心
□已批准□草稿
7.
纯化水检验操作规程
STP/A0/CG05/002
00
质量中心
□已批准□草稿
8.
培训标准管理规程
SMP/B0/RY/004
00
人力资源部
□已批准□草稿
9.
偏差处理标准管理规程
SMP/A0/QA00/022
00
质量中心
□已批准□草稿
10.
变更控制标准管理规程
SMP/A0/QA00/023
00
质量中心
□已批准□草稿
备注/偏差/支持性文件：
结论：
□合格□不合格
执行人签字/日期
审核人签字/日期
测试报告4
培养基/试剂确认
目的
确认使用的培养基和试剂的适用性。
程序
列出实验使用培养基和试剂。
检查培养基的来源/批号/有效期/保存条件，非官方对照品提供检验报告单。
检查试剂来源/批号/有效期/保存条件。
可接受标准
所有培养基/试剂均来自批准的供应商，存放在需要的条件下，均在有效期内。
序号
名称
来源
规格
批号
纯度
有效期
保存条件
确认结果
1.
营养琼脂培养基
□合格□不合格
2.
玫瑰红钠琼脂培养基
□合格□不合格
备注/偏差/支持性文件：
结论：
□合格□不合格
执行人签字/日期
审核人签字/日期
测试报告5
样品确认
目的
确认验证所用样品的来源和适用性。
程序
检验使用样品生产信息或来源信息。
检查样品的包装完整程度及状态。
可接受标准
最终产品应为生产规模产品；验证前样品包装完整，样品外观符合规范。
序号
名称
来源
监测点编号
取样日期
样品保证完整程度
样品外观
1
纯化水
□合格□不合格
□合格□不合格
2
纯化水
□合格□不合格
□合格□不合格
3
纯化水
□合格□不合格
□合格□不合格
备注/偏差/支持性文件：
结论：
□合格□不合格
执行人签字/日期
审核人签字/日期
测试报告6
薄膜过滤法计数方法验证
目的
检查验证用供试品对薄膜过滤法计数方法检测是否有干扰，以确定供试品稀释倍数及冲洗次数。
程序
1.供试液的制备：
取原液作为供试液。
2.验证用菌种应在5代内使用。
3.试验组：
取稀释液100ml加入培养器中，然后取纯化水1ml加入培养器中，并减压抽滤直至抽干，加入制备的50～100CFU的试验菌，过滤，将培养器倒置于洁净工作台上，使滤膜裸露，浇注温度不超过45℃的营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基培养。
4.菌液组：
取制备的50～100CFU的试验菌，倾注培养基，冷却后至合适的温度培养。
5.供试品对照组：
取稀释液100ml加入培养器
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