届高三生物一轮复习教师用书选修3专题222222动物细胞融合与单克隆抗体.docx
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届高三生物一轮复习教师用书选修3专题222222动物细胞融合与单克隆抗体
一、动物细胞融合
1．概念：
两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程，也称细胞杂交。
2．原理：
与植物原生质体融合的原理相似，即膜的流动性。
3．结果：
形成单核杂交细胞，具有原来两个或多个细胞的遗传信息。
4．诱导方法：
聚乙二醇、灭活的病毒、电激等。
5．意义
（1）突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。
（2）是研究细胞遗传、免疫、肿瘤和新品种培育的重要手段。
（3）利用杂交瘤技术制备单克隆抗体。
二、单克隆抗体
1．传统抗体的制备
（1）方法
（2）缺点：
产量低、纯度低、特异性差。
2．单克隆抗体的制备过
（1）
（2）解决思路：
将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合为杂交瘤细胞。
（3）制备过程
3．单克隆抗体的特点和应用
（1）优点：
特异性强、灵敏度高、产量大。
（2）应用
①作为诊断试剂，具有准确、高效、简易、快速的优点。
②用于治疗疾病和运载药物。
一、动物细胞融合
阅读教材P52，仔细观察图2－23，探讨下列问题：
1．比较植物体细胞杂交与动物细胞融合的区别。
植物体细胞杂交
动物细胞融合
原理
方法步骤
去掉细胞壁后诱导____融合，形成杂种细胞，再经过____________形成杂种植株
分散成单个细胞后诱导细胞融合，形成杂交细胞
诱导手段
离心、振动、电激、聚乙二醇等
聚乙二醇、________、电激等
用途
克服远缘杂交不亲和的障碍，培育具有优良性状的杂种植株
培育杂交细胞，制备单克隆抗体
提示：
细胞膜的流动性、细胞的全能性 细胞膜的流动性 原生质体 植物组织培养 灭活的病毒
2．诱导动物细胞融合特有的诱导手段是什么？
提示：
灭活的病毒。
二、单克隆抗体的制备
阅读教材P52～54，仔细观察图2－24，探讨下列问题：
1．单克隆抗体制备时为什么用免疫小鼠？
提示：
免疫小鼠能产生相应的B淋巴细胞，从而产生抗体。
2．为什么用多个B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合？
提示：
（1）细胞融合成功率太低，仅用两个细胞融合，不一定能得到融合细胞。
（2）用大量免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞进行融合，并从融合细胞中筛选才能得到分泌所需抗体的杂交瘤细胞。
3．细胞融合后会得到哪些杂交细胞？
我们需要的是哪种杂交细胞？
提示：
得到的细胞有：
未融合的亲本细胞、融合的具有同种核的细胞（融有2个B淋巴细胞核或是2个骨髓瘤细胞核）、融合的杂种细胞（即杂交瘤细胞）。
需要的是杂交瘤细胞。
4．对得到的杂交瘤细胞还需做哪些处理？
为什么？
提示：
筛选、克隆化培养、抗体检测。
因为培养的目的是获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。
5．在单克隆抗体制备过程中经过了几次筛选？
作用分别是什么？
提示：
两次。
第一次：
从多种杂交细胞中筛选出杂交瘤细胞。
第二次：
利用专一抗体检测阳性，筛选出能够产生所需特异性抗体的杂交瘤细胞群。
6．获取单克隆抗体的场所在哪里？
提示：
（1）若在培养基中进行杂交瘤细胞培养，则从培养液中提取。
（2）若在小鼠或其他动物腹腔中培养，则从腹水中提取。
7．请写出单克隆抗体的制备流程。
提示：
下列对植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较，描述正确的是（ ）
A．动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理相同，诱导融合的方法也完全相同
B．只有植物体细胞杂交可跨越种属间的生殖隔离，突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能
C．利用动物细胞融合技术而发展起来的杂交瘤技术，为生产单克隆抗体开辟了新途径
D．目前科学家终于实现了两个植物物种间的体细胞杂交，得到了同时具有两个物种遗传物质的超级植物，并使它们的性状全部得以体现
[解析] 动物细胞融合的诱导方法有生物方法，如用灭活的病毒，而植物原生质体融合没有生物方法；两个植物物种间的体细胞杂交，得到了同时具有两个物种遗传物质的超级植物，并不一定使它们的性状都能得以体现，这是基因选择性表达的结果。
[答案] C
动物细胞融合中的诱导剂
（1）常用的病毒诱导剂有仙台病毒、新城鸡瘟病毒、疱疹病毒等，其中仙台病毒最常用。
（2）用作诱导剂的病毒必须事先灭活，使病毒的感染活性、增殖能力丧失但不破坏病毒的抗原结构。
人绒毛膜促性腺激素（HCG）是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，制备抗HCG单克隆抗体可用于早孕的诊断。
如图是抗HCG单克隆抗体制备流程示意图，请分析回答问题：
（1）制备单克隆抗体过程中要用到________________和________________技术。
（2）制备单克隆抗体过程中，给小鼠注射的HCG相当于________，使小鼠产生分泌相应________的淋巴细胞，此过程属于特异性免疫中的________免疫。
（3）在细胞内DNA的合成一般有两条途径，主途径是在细胞内由糖和氨基酸合成核苷酸，进而合成DNA，而氨基嘌呤可以阻断此途径；另一辅助途径是在次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在的情况下，经酶催化作用合成DNA，而骨髓瘤细胞的DNA合成没有此辅助途径。
①利用DNA合成途径不同的特点配制的HAT培养基含有多种成分，其中添加的________成分具有筛选杂交瘤细胞的作用。
②最终筛选获得的杂交瘤细胞的特点是____________________________________。
（4）此过程生产的单克隆抗体可以与______________特异性结合，从而诊断早孕。
[研析] 本题主要考查单克隆抗体制备的原理和过程及识图分析问题的能力。
具体解题过程如下：
[审]——提取信息
信息a：
图示中对B淋巴细胞和骨髓瘤细胞加“促融剂”及“培养”。
信息b：
题干信息制备的单克隆抗体的用途是“抗HCG”。
信息c：
氨基嘌呤可以阻断DNA合成的主途径，且骨髓瘤细胞的DNA合成无辅助途径。
[析]——解读信息
解读信息a：
在给定的两类细胞中加促融剂的目的就是为了实现细胞融合，在HAT培养基上培养、克隆化培养及大规模培养的均为细胞即涉及的细胞工程技术为动物细胞培养。
解读信息b：
制备的单克隆抗体对抗的是“HCG”，即HCG应为抗原。
解读信息c：
骨髓瘤细胞的DNA合成只有主途径，若在HAT培养基中加入氨基嘌呤，则其主途径被阻断，最终导致其无法增殖。
[联]——联系基础
设问
（1）可联系：
动物细胞工程的技术手段即动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合及生产单克隆抗体等。
其中动物细胞培养是其他技术的基础。
设问
（2）可联系：
单克隆抗体制备的原理；B淋巴细胞、杂交瘤细胞的独有特点；体液免疫过程中有抗体产生。
设问（3）可联系：
选择培养基的作用，如通过在培养基中加入特定的物质如氨基嘌呤可使未融合的骨髓瘤细胞、骨髓瘤细胞融合体无法生存而死亡，选择出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。
[答]——解题规范
设问（3）①：
只能答“氨基嘌呤”，答“次黄嘌呤、胸腺嘧啶核苷或糖和氨基酸”等都不能达到筛选的目的，均不得分。
设问（3）②：
应把单克隆抗体自身具备的特点“能无限增殖并分泌特异性抗体”与应用上的优点“特异性强、灵敏度高，并可能大量制备”区分开来，答题时不能混答，否则不得分。
设问（4）：
题目中制备的单克隆抗体用来诊断早孕，是与特定的抗原“HCG”相结合，答“抗原”不得分。
[答案]
（1）动物细胞培养 动物细胞融合
（2）抗原 抗体 体液 （3）①氨基嘌呤 ②能无限增殖并分泌特异性抗体 （4）人绒毛膜促性腺激素（或HCG）
解答单克隆抗体的有关题目时应特别注意的几点
（1）所用B淋巴细胞是否为经过免疫的B淋巴细胞。
（2）细胞融合之后需要两次筛选，方可获得能产生单一抗体的杂交瘤细胞。
（3）利用单克隆抗体制成的“生物导弹”，其选择性是由抗体决定的，与药物无关。
———————————————[课堂归纳]——————————————————
[网络构建]
填充：
①细胞膜的流动性 ②PEG、灭活的病毒、电激
③杂种细胞 ④骨髓瘤细胞 ⑤杂交瘤细胞
⑥单克隆抗体
[关键语句]
1．动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。
2．动物细胞融合常用的诱导因素有聚乙二醇（PEG）、灭活的病毒、电激等。
3．动物细胞融合的主要用途是制备单克隆抗体。
4．杂交瘤细胞是由经免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合而成的，具有既能无限增殖又能产生特定抗体的能力。
5．单克隆抗体最主要的优点是特异性强、灵敏度高，并能大量制备。
6．单克隆抗体的主要用途有：
作为诊断试剂、用于治疗疾病和运载药物。
1．关于动物细胞融合的说法，不正确的是（ ）
A．动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程
B．动物细胞融合后形成的具有原来两个或多个动物细胞遗传信息的单核细胞称为杂交细胞
C．常用的诱导动物细胞融合的因素有：
聚乙二醇、灭活的病毒、电激、紫外线照射
D．细胞融合技术突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能
解析：
选C 紫外线照射常用于人工诱变，可诱发基因突变，而不是诱导细胞融合的因素。
2．动物细胞融合主要的用途是（ ）
A．克服远缘杂交不亲和 B．制备单克隆抗体
C．培育新物种D．生产杂交细胞
解析：
选B 植物体细胞杂交技术主要是为了克服远缘杂交不亲和，以培育新物种。
另外，动物细胞作为整体，它的全能性受到限制，目前只见到高度分化的细胞核在去核卵母细胞中表现全能性，还未见到融合细胞表现出全能性的例子，因此动物细胞融合不能用来培育新物种。
生产杂交细胞，不是细胞融合的主要目的，杂交细胞只是细胞融合完成后所形成的结构的名称。
3．单克隆抗体与血清抗体相比，其优越之处在于（ ）
A．单克隆抗体可作为某些药物的载体
B．单克隆抗体可以在体外制备
C．单克隆抗体特异性强、灵敏度高，并可大量制备
D．单克隆抗体的制备过程简单，操作方便
解析：
选C 普通的抗体其实也可作为药物的载体，并可在体外通过细胞培养制备，但因其纯度低、特异性差，在“生物导弹”应用上没有价值。
单克隆抗体的制备过程比普通抗体的制备过程要复杂得多。
4．用单克隆抗体研制而成的“生物导弹”由两部分组成，一是“瞄准装置”，二是杀伤性“弹头”，下列对此描述不正确的是（ ）
A．“瞄准装置”是由识别肿瘤的单克隆抗体构成的
B．“弹头”是由放射性同位素、化学药物和细胞毒素等物质构成的
C．“弹头”中的药物有选择杀伤肿瘤细胞的功能
D．“生物导弹”是利用细胞工程制备出来的
解析：
选C “弹头”中的药物既能杀伤肿瘤细胞，也能杀死正常细胞，不具有选择性。
“生物导弹”中的“瞄准装置”是由专一识别特定肿瘤细胞的单克隆抗体构成的；“弹头”是由杀死肿瘤细胞的放射性同位素、化学药物和细胞毒素等物质构成的；“生物导弹”是利用动物细胞融合、动物细胞培养等细胞工程技术制备出来的。
5．科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交瘤细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体。
与骨髓瘤细胞融合的细胞是（ ）
A．经过特定抗原免疫的B淋巴细胞
B．不经过免疫的B淋巴细胞
C．经过特定抗原免疫的T淋巴细胞
D．不经过免疫的T淋巴细胞
解析：
选A 骨髓瘤细胞必须与经过特定抗原免疫的B淋巴细胞融合，形成杂交瘤细胞，才能大量增殖并产生能够与相应的抗原特异性结合的单克隆抗体。
6．如图表示单克隆抗体制备过程的各阶段图解，请据图回答下列问题：
（1）请用箭头把代表各图解的字母按单克隆抗体制备过程的顺序连接起来。
（2）过程中之所以选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，是因为它们融合后的杂交瘤细胞具有________、________的特性。
（3）由图中可以看出，单克隆抗体制备过程运用了________和__________的动物细胞工程技术手段。
答案：
（1）B CFADHGE
（2）可在体外大量繁殖 产生特异性抗体 （3）动物细胞融合 动物细胞培养
（时间：
25分钟；满分：
50分）
一、选择题（每小题2分，共20分）
1．培养人细胞与小鼠融合细胞发现，细胞会随机丢失来自人细胞的染色体，在仅含有人的1号染色体的融合细胞中，合成出人的尿苷单磷酸激酶。
下列有关叙述中，不合理的是（ ）
A．与人或小鼠细胞相比，融合细胞发生了遗传物质的改变
B．研究方法中需要选择适当的培养基和细胞融合诱导技术
C．在融合细胞中，人的1号染色体DNA与小鼠DNA发生了重组
D．这种研究可能发现人的某一特定基因与特定染色体的关系
解析：
选C 在人细胞与小鼠细胞的融合细胞中，与人或小鼠细胞相比，染色体数目发生了变化，融合细胞发生了遗传物质的改变，属于染色体变异，并非DNA重组。
2．单克隆抗体技术在疾病诊断和治疗以及生命科学研究中具有广泛的应用。
下列关于单克隆抗体的叙述，错误的是（ ）
A．特异性强、灵敏度高
B．与抗癌药物结合可制成“生物导弹”
C．体外培养B淋巴细胞可大量分泌单克隆抗体
D．由B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合而成的杂交瘤细胞分泌
解析：
选C 抗体是由B淋巴细胞分泌的，每一种B淋巴细胞只能分泌一种抗体。
要想获得大量单一抗体，需要将某一种B淋巴细胞大量克隆，但是在体外培养的条件下，B淋巴细胞不能无限增殖。
由B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合而成的杂交瘤细胞，能在体外培养的条件下大量增殖，并分泌单克隆抗体。
3．动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是（ ）
A．诱导融合的方法完全相同
B．所用的技术手段完全相同
C．所采用的原理完全相同
D．都能形成杂种细胞
解析：
选D 两种细胞工程技术中都要进行细胞融合，但融合的技术不完全相同；动物细胞的融合常用灭活的病毒做诱导剂，而植物细胞融合则不用；动物细胞融合的原理是细胞膜的流动性，植物体细胞杂交的原理是细胞膜的流动性和细胞的全能性；两者都能形成杂种细胞，但植物的杂种细胞最终形成杂种植株。
4．20世纪30年代，科学家们发现肺结核、天花、水痘和麻疹等疾病的患者的病理组织中存在多核细胞，这些多核细胞最可能的来源是（ ）
A．细胞进行了无丝分裂造成的
B．细胞进行有丝分裂时，染色体复制后没有分开形成两个子细胞
C．有丝分裂时，细胞核进行了分裂，而细胞质没有进行分裂
D．细胞在体内病毒的作用下发生了细胞融合
解析：
选D 选项C、D都可形成多核细胞，但结合题干信息，此种现象与感染病毒有关，故选项D最有可能。
5．用动物细胞工程技术制备单克隆抗体，下列实验步骤中错误的是（ ）
A．将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B淋巴细胞
B．用氯化钙作诱导剂，促使能产生抗体的B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合
C．筛选杂交瘤细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体
D．该杂交瘤细胞株的增殖方式和产物分别是有丝分裂和单克隆抗体
解析：
选B B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合需要灭活的病毒、聚乙二醇或物理因素来诱导。
氯化钙不能作为诱导剂，氯化钙的作用是在基因工程中用于提高细胞壁的通透性，便于重组质粒进入微生物细胞内。
6．（重庆高考）如图是单克隆抗体制备流程的简明示意图，下列有关叙述正确的是（ ）
A．①是从已免疫的小鼠脾脏中获得的效应T淋巴细胞
B．②中使用胰蛋白酶有利于杂交瘤细胞的形成
C．③同时具有脾脏细胞和鼠骨髓瘤细胞的特性
D．④是经筛选培养获得的能分泌特异性抗体的细胞群
解析：
选D ①是从已免疫的小鼠脾脏中获得的效应B细胞（浆细胞），A项错误；胰蛋白酶常用在动物细胞培养过程中，其作用是使组织分散成单个细胞，图示②中应使用促融剂如聚乙二醇（PEG），B项错误；图示③为杂交瘤细胞，其同时具有浆细胞产生抗体的特性和骨髓瘤细胞无限增殖的特性，C项错误；图示④是经筛选获得的能分泌特异性抗体的杂交瘤细胞，D项正确。
7．单克隆抗体制备过程中，对骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞。
在这种培养基上不能存活、增殖的细胞是（ ）
①B淋巴细胞 ②骨髓瘤细胞 ③B淋巴细胞自身融合细胞 ④骨髓瘤细胞自身融合细胞 ⑤杂交瘤细胞
A．①②③④ B．①③⑤
C．②④D．①③
解析：
选A 在题中特定的选择培养基上，能够存活、增殖的细胞只有杂交瘤细胞。
8．下列与细胞工程技术相关的表述中，不正确的是（ ）
A．植物组织培养技术的理论基础是细胞的全能性
B．细胞融合技术使研究人员得以克服远缘杂交不亲和的障碍
C．动、植物细胞融合技术的基本原理相同，诱导融合的方法类似
D．培养动物细胞与培养植物细胞所用的培养基成分基本相同
解析：
选D 植物组织培养的理论基础是细胞的全能性，即已经分化的细胞仍然具有发育成完整个体的潜能，A正确；动物细胞融合能突破有性杂交的障碍，即可以克服生物远缘杂交不亲和的障碍，B正确；动物细胞融合与植物原生质体融合的原理是基本相同的，即细胞膜的流动性，诱导融合的手段都有物理法和化学法，C正确；动物细胞培养所用培养基为液体培养基，必须添加血清等天然成分，而植物组织培养所用培养基为固体培养基，需要添加植物激素，D错误。
9．如图是某种细胞工程技术，若图表示动物细胞融合和植物体细胞杂交，则对于两者的比较中，正确的是（ ）
①诱导融合的方法完全相同 ②用的技术手段不相同
③采用的原理完全相同 ④都能形成杂种细胞
A．①②B．①③
C．②④D．③④
解析：
选C 若图表示动物细胞融合和植物体细胞杂交，这两者的共同点是：
都能形成杂种细胞。
两者的区别是①诱导融合的方法不完全相同：
前者是使细胞分散后，诱导细胞融合，而后者是去除细胞壁后诱导原生质体融合；②用的技术手段不完全相同：
前者是离心、电激、聚乙二醇、灭活的病毒等试剂诱导，而后者是离心、电激、聚乙二醇等试剂诱导；③采用的原理不完全相同：
前者是细胞膜的流动性，而后者是细胞膜的流动性和细胞的全能性。
10．以H1N1病毒核衣壳蛋白为抗原，采用细胞工程制备单克隆抗体，下列叙述正确的是（ ）
A．用纯化的核衣壳蛋白反复注射到小鼠体内，产生的血清为单克隆抗体
B．体外培养单个浆细胞可以获得大量针对H1N1病毒的单克隆抗体
C．将等量浆细胞和骨髓瘤细胞混合，经诱导融合后的细胞均为杂交瘤细胞
D．利用该单克隆抗体与H1N1病毒核衣壳蛋白特异性结合的方法可以诊断该病毒感染体
解析：
选D 单克隆抗体是相应的杂交瘤细胞产生的，单个浆细胞的培养不能获得单克隆抗体；用纯化的核衣壳蛋白反复注射到小鼠体内，血清中的抗体不是单一抗体，其还含有体内已存在的其他抗原的抗体；等量浆细胞和骨髓瘤细胞混合，可以形成三种杂交细胞，但只有浆细胞和骨髓瘤细胞融合而成的细胞称为杂交瘤细胞。
二、非选择题（共30分）
11.
（10分）如图表示细胞融合技术的一些过程，据图回答：
（1）从A和B细胞到C细胞的过程中，必须用_____________________________________
处理。
（2）若A、B细胞为植物细胞，那么这样的细胞已经用酶降解脱掉了细胞壁，这种酶可能是________________，由此生成的A和B细胞称为______________。
由A、B到C的过程中，常用的物理方法有______________。
融合完成的标志是______________，形成D细胞还要应用______________技术，把其培养成植株。
（3）若A细胞为骨髓瘤细胞，B为淋巴细胞，那么D细胞称为____________，由D细胞连续分裂产生大量细胞的过程，称为____________，这种细胞既能无限繁殖，又能产生____________________。
（4）若A为人细胞，B为鼠细胞，并分别用红、绿荧光染料标记细胞上的蛋白质，在C细胞阶段，细胞一半发红色荧光，一半发绿色荧光，到D细胞阶级，两种颜色的荧光均匀分布，原因是____________________________。
（5）若A、B细胞为动物细胞，一般取自___________________________________________，
然后用________将其分散开。
由A、B到C的过程中，采用的不同于植物细胞融合的手段是________________________________________________________________________。
（6）若该过程为制备单克隆抗体，A和B融合后形成的C有几种？
（只考虑两两结合）____________。
解析：
植物体细胞杂交前需先去掉细胞壁，因为细胞壁由纤维素和果胶组成，应用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁。
第二步就是让不同的原生质体融合，融合必须采用一定的技术手段，进行人工诱导。
在完成细胞融合后，还要用植物组织培养技术将杂种细胞培育成植株。
动物在免疫反应过程中，每一种B淋巴细胞能分泌一种特异性抗体，要想获得大量的特异性抗体，必须使能分泌该单一抗体的B淋巴细胞大量增殖。
B淋巴细胞具有产生单一抗体的能力，但不能在体外增殖；骨髓瘤细胞是一种癌细胞，它能在体外培养条件下无限增殖，但不能产生抗体，将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞同时培养，在灭活的病毒（或聚乙二醇）的诱导下，促使B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，得到杂交瘤细胞。
它兼有两个亲本细胞的特性——既能大量增殖，又能产生某种特异性的抗体。
答案：
（1）诱导因素
（2）纤维素酶和果胶酶 原生质体 电激、振动 产生细胞壁 植物组织培养 （3）杂交瘤细胞 细胞培养 单一抗体 （4）构成细胞膜的蛋白质和磷脂分子具有一定的流动性 （5）动物胚胎或出生不久的幼龄动物的组织或器官 胰蛋白酶 用灭活的病毒诱导细胞融合 （6）3种
12．（10分）人类在预防与诊疗传染疾病过程中，经常使用疫苗和抗体。
已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原，其疫苗生产和抗体制备的流程之一如图：
请回答：
（1）过程①代表的是____________。
（2）过程②构建A基因表达载体时，必须使用________和____________两种工具酶。
（3）过程③采用的实验技术是____________，获得的X是____________。
（4）对健康人进行该传染病免疫预防时，可选用图中基因工程生产的________所制备的疫苗。
对该传染病疑似患者确诊时，可从疑似患者体内分离病毒，与已知病毒进行________比较；或用图中的__________________进行特异性结合检测。
解析：
（1）根据图中①过程中由RNA指导合成DNA可判断①为逆转录。
（2）基因工程中构建基因表达载体时用限制酶将目的基因和运载体切出相同的黏性末端或平末端，再用DNA连接酶将目的基因和运载体连接起来。
（3）图中③为小鼠骨髓瘤细胞和B淋巴细胞的融合过程，可得到杂交瘤细胞。
杂交瘤细胞既能无限增殖，又能产生特异性抗体。
（4）病毒表面的A蛋白为主要抗原，因此可用A蛋白制备疫苗，刺激机体产生抗体。
对于病毒的检测可采用与已知病毒进行核酸序列比较的方法，也可根据抗原与抗体发生特异性结合的特点，用抗A蛋白的单克隆抗体进行检测。
答案：
（1）逆转录
（2）限制酶 DNA连接酶 （3）细胞融合 杂交瘤细胞 （4）A蛋白 核酸（基因）序列 抗A蛋白的单克隆抗体
13．（10分）某研究小组进行药物试验时，以动物肝细胞为材料，测定药物对体外培养细胞的毒性。
供培养的细胞有甲、乙两种，甲细胞为肝肿瘤细胞，乙细胞为正常肝细胞。
请回答下列有关动物细胞培养的问题：
（1）将数量相等的甲细胞和乙细胞分别置于培养瓶中培养，培养液及其他培养条件均相同。
一段时间后，观察到甲细胞数量比乙细胞数量________。
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