限制性核酸内切酶分子手术刀黏性末端平末端牡丹江一中doc.docx

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DNA重组技术的基本工具

基因的大小以纳米计算，要对它进行剪切、拼接等操作，没有非常精细的工具是不行的。

进行基因操作最少需要以下三种工具：

U准确切割DNA的工具（“分子手术刀"）

2、DNA片段的连接工具（“分子缝合针”）

3、基因转移工具（“分子运输车乃）

•在自然界中有一些生物的DNA可能进入另

一种生物的细胞中。

我们有没有学过相关

的实例?

•现今存在的生物为什么没有在长期的进化过程中被外源DNA的入侵而灭绝，仍能保持一种稳定状态？

•怎样才能使外来的DNA失效从而保护自身?

来源:

主要是从原核生包中牛讐种酶。

能癇外来的DNA切断，更于这种切割作用是在DNA分子内部进行的，故名限制性核酸内切酶。

2、种类雷4000种。

3、作用•识别双链DNA分子的某种長定的越査酸宦住■S1,并且使每一条链中特定部位的两个

孩昔簸之间的越豪二童I断开。

4v结果：

形成两种末端囂端

限制酶切割DNA后形

成的末端——黏性末端、平末端是如何形成的？

Til-ATIA

AITG—c

•什么叫黏性末端？

当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切开时，被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核昔酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。

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什么叫平末端？

当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。

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CCC:

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Cd

GGC

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1

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切断的DNA片段要与受体细胞的dna连接,你觉得可以用什么酶？

二、DNA连接酶——“分子缝合针”

DNA聚合酶和DNA连接酶有何7相同点和不同点?

DNA连接酶

DNA聚合酶

连接DNA链

双链

单链

连接部位

在两DNA片段之间形成磷酸二酯键，两个缺口同时连接，不需模板。

以一条DNA链为模板,将单个脱氧核昔酸加到已存在的核酸片段的3,末端的羟基上，形成磷酸二酯键。

作用结果形成重组形成与模板链互补的DNA分子

DNA链

限制酶切割后有两种不同的结果,

一种产生黏性末端，一种产生平末端。

那么恢复它们的连接时，所用DNA连

接酶是否可以不加选择？

［来源：

大肠杆菌

1vE.coliDNA连接酶:

I特点：

连接黏性末端

来源：

T4噬菌体

2、T4DNA连接酶:

特点=连接黏性末端和平末端

“分子运输车乃

要让一个从甲生物细胞内取出来

的基因在乙生物体内进行表达，首先得将这个基因送到乙生物的细胞内去！

能将外源基因送入细胞的工具就是载体。

心杆Bom

有标记基因的存在，将来可用含青霉素的培养基鉴别。

能复制并带着插入的目的基因一起复制

1、作用：

将外源基因送入受体细胞

2、

种类:

质粒：

是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的很小的双链环状DNA分子。

人噬菌体衍生物:

不会使宿主细胞裂解。

天然的噬菌体使细胞裂

解。

动植物病毒：

灭毒或减毒的，但保留侵

染特性。

3、作为载体的必要条件

沁胞轆歸翻觀严

体DNA上,

誌嫩鳩纏鮭外源

练习

|=

1、在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的DNA片段，需使用（）

可同种限制酶B■两种限制酶

C■同种连接酶D■两种连接酶

练习

2、不属于质粒被选为基因运载体的理由是

A、能复制（D）

B、有多个限制酶切点

C、具有标记基因

D、它是环状DNA

练习

3、基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。

在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是（C）

A、人工合成目的基因

B、目的基因与运载体结合

C、将目的基因导入受体细胞

D、目的基因的检测和表达大肠杆菌的一种限制酶

（EcoRI）能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开形成黏性末Wo

Smal能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切割形成平末端。

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磷酸二酯键

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腔血樓瞎按n報

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