3M快速测试片讲解doc.docx
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3M快速测试片讲解doc
3MTMPetrifilmTM细菌总数测试卡
产品简介：
红色指示剂使读数更方便准群；48H确认菌落数；亦适用乳酸菌检测。
编号：
6046规格：
50片/包，20包/箱
3MTMPetrifilmTM霉菌和酵母菌测试片
产品简介：
测试片中添加抗生素，可抑制细菌生长；含酵母菌指示剂，使酵母菌更容易计数；3－5天确认霉菌酵母数。
编号：
6417规格：
50片/包，20包/箱
3MTMPetrifilmTM大肠菌群测试片
产品简介：
含改良VRB培养基；目的菌落显示为红色气泡；24H即可确认菌落数，节省检验时间2天。
编号：
6416规格：
25片/包，40包/箱
3MTMPetrifilmTM高灵敏度大肠菌群测试片
产品简介：
灵敏度高达1cfu/5ml或1cfu/5g；目的菌落显示为红色带气泡，粉红色菌晕辅助计数；24h即可确认菌落数。
编号：
6415规格：
25片/包，20包/箱
3MTMPetrifilmTM快速大肠菌落群测试片
产品简介：
培养基中含有特定的PH指示剂；6--14h可估计大肠菌落数；24h培养可获得准确的大肠菌群数。
编号：
6046规格：
25片/包，20包/箱
3MTMPetrifilmTM肠杆菌科测试片
产品简介：
同时检测乳糖发酵型的大肠菌群和非乳糖发酵型的沙门氏菌。
志贺氏菌、耶尔森氏菌等；24h确认肠杆菌科菌落数；加工环境
和加工后无染的优良指示。
编号：
6421规格：
25片/包，40包/箱
3MTMPetrifilmTM大肠菌群/大肠杆菌测试片
产品简介：
一个测试片同时检测大肠杆菌和大肠菌群；24—48h确认大肠杆菌数，节省时间2－3天；大肠菌群显示为蓝色带气泡。
编号：
6414规格：
25片/包，20包/箱
3MTMPetrifilmTM金黄色葡萄球菌测试片
产品简介：
一次检测等于三个Baird—Parker琼脂平板和凝固酶实验的效果；适用脱氧核糖核酸酶反应系统，特异性更强；22－29h内确
认为金黄色葡萄球菌数；确认反应片并非必须。
编号：
6491规格：
25片/包，20包/箱
3MTMPetrifilmTM环境李斯特菌属测试片
产品简介：
培养时间仅为28±2h；无需增菌培养；紫红色菌落便于计数；可作定性、半定性和定量判读；便于室内操作。
编号：
6448规格：
25片/包，8包/箱
3MTMPetrifilmTM免疫富集法李斯特菌快速检测试剂盒
产品简介：
样品经过增菌后，无需其他试剂，仅需适用本检测试剂盒就可以完成后续步骤，灵敏度达到1cfu/25g；对于部分食品，可在
不到32h得到推测的阳性结果。
编号：
6448规格：
20～40个/盒
3M细菌测试纸片系列均原产自美国，确认各类细菌菌落12～24H就可出结果，快速、简单、便捷！
！
！
3M细菌总数测试片操作以及判读
一、测试细菌总数操作方法
1、未开封时，冷藏于≤8℃
2
、已开封的，将封口以胶带封紧。
（≤46℉），并在保存期内用完，
高温度时，凝固水可以排除，包装
物最好于室温启开。
3、保存再封的袋于≤25℃
4
、制备1：
10和更大稀释的食物
（≤77℉）和湿度<50％，不要冷
样品稀释液，称取或吸取食物样
藏已开启的包装袋，并于一个月内
品，置入适宜的无菌容器内，如均
使用完。
质袋、稀释瓶、WhirlPakbag或者
其他灭菌容器内.
5、加入适量的无菌稀释液
包括
6
、搅拌或均质样品。
BufferedpeptoneBuffer
起缓冲
样品的稀释液调
PH6.5－7.2对酸
作用的蛋白胨缓冲液
（IDF
性样品的稀释液用
INNaOH
phopsphatebuffer
用0.0425g/L
对碱性样品用INHCL调PH
的KH2PO4调PH7.2）、0.1%的蛋白胶水（ISO方法6887）、缓冲蛋白胶水（ISO方法6579）、盐溶液
（0.85-0.90%）、bisulfite-freeletheenbroth或蒸馏水.不可使
用含有枸橼酸盐、酸性亚硫酸盐或硫代硫酸盐的缓冲液.因为它们
能抑止菌生长。
7、将测试片置于平坦表面处，揭
8、使用吸管将
1mL样液垂直滴加
开上层膜。
在测试片的中央处。
9、允许使用上层膜直接落下，切
10、使用压板隆起面底朝下，放置
勿向下滚动上层膜。
在上层膜中央处。
11、轻轻的压下，使样液均匀覆盖
于圆形的培养面积上，切勿扭转压
12、拿起压板，静置至少
使培养基凝固。
1分钟以
板。
13、测试片的透明面朝上，可堆叠
至20片，对有一定湿度养箱能保
持最少份损失是需要的。
14、可目视及用标准菌落计数器或
其它的照明放大镜计数，并可参考
判读卡计算菌落数。
15、可以分离菌落作进一步鉴定，
即掀起上层膜，由培养胶上挑取单
个菌落。
二、测试细菌总数判读方法
Aerobic
Count=0
bacteria
在
petrifilmAC
count=152
测试片上,很容易
测试片中含有一
解释,图2测试片
种红色指示染剂
上没有任何菌落
可使菌落着色
计
生长.
算所有红色菌落
（不论其大小和颜
色深浅均计算
之）.
Count=16
Count=143
图3示有不多的
PetrifilmAC
测
菌落.
试片菌落数适宜
计数范围是
25-250,见图
4
Count=560
Count=tntc（esti
测试片面积约为
matedcount=103）
20cm2,当菌落数
图6所示
超过250个,如图
petrifilmAC
测
5所示,为了估计
试片上菌落太多
菌落数,可选择其
而无法计数
中一个或数个有
（tntc）
代表性菌落的小
方格（1cm2）,
计算
平均菌落数,再乘
以20可得到整个测试片上的菌落数
count=tntc（Esti
count=tntc（Esti
mated
matedcount=103）
count=105）
有时菌落分布出
有很多高数量菌
现不均衡,如图8
落,使整个生长区
所示,这也记录为
变粉色,如图
7所
TNTC.
示,你仅可在生长
区边缘现观察到
单个菌落,应计录
为菌落太多无法
计数（TNTC）
Count=tntc（Esti
Estimated
mated
count=160
count=107）
很少数菌种会液
在图9中
化petrifilmAC
petrifilmAC测
测试片上的培养
试片上的菌落,最
基,如图10所示.
先粗略一看是可
若有这种现象发
计数的,然而,你
生,可选择没有液
密切注意到生长
化区的几个有代
区边缘,能看到高
表性菌落的小方
密度的菌落,应记录为TNTC
格（1cm2）,
计算平均菌落数.不要计数液化区内的红点.
Count=83
因为在petrifilm
AC测试片上菌落
是红色的,你会和
不透明的不规则
形状的事物颗粒
区分开,见圆圈1
和2.
3M乳酸菌测试片操作以及判读
2*MRS的操作步骤
1、按说明书要
2、用标准稀释液
求的2倍用量
制备1：
10样品稀
制备2×MRS肉
释液，该样品稀释
汤。
例如：
如
液可用于检测其
果说明书要求
他微生物。
1L水中加入55gMRS,则2×MRS则为1L水中加入
110gMRS.
3、用1mL3M
4、接种：
在PAC
电子加样器将
检测片上接种
1：
10样品稀释
1mL1：
20样品稀
液做1：
2稀释。
释液（0.5mL1：
先取0.5mL肉
10标准稀释液
2×MRS肉汤，然后再吸取
0.5mL1:
10样品稀释
+0.5mL2×MRS肉汤＝1:
20
含单倍MRS的样品稀释
液，混匀后即可获得含单倍
MRS的1：
20样品
液）。
稀释液。
5、培养：
厌氧
6、判读：
PAC测
培养测试片。
试片可在标准菌
将检测片透明
落计数器或其他
膜一面朝上放
放大光源下计数。
入厌氧罐中，
测试片赏的菌落
叠放数量不得超过20片。
如果检测片超过20片，
数×稀释倍数（
20）即为每毫升样品中酸乳菌数。
可在同一罐中用一个坚硬的分隔器将检测片分
详见判读手册。
开培养。
将厌氧罐放入30℃～35℃（86℃～95℉）
培养箱中培养48＋3h.
4*MRS肉汤的操作程序
1、按说明书要求的4倍用量制备4*MRS肉汤
2、用标准稀释液制备1：
10样品稀释液（11g/99mL或25g/225mL）。
取8mL供其它种类的微生物检测用。
3、将4*MRS肉汤加入1：
10标准样品稀释液中，将获得含
0.5MRS的样品稀释液。
*如果稀释液中含有
11g样品、99mL标准稀释液，接种其它微生物测试片后，再加入
18mL4*MRS肉
汤。
PAC测试片上生长的菌落数乘以
11即为最终结果（个/g）。
*如果稀释液中含有
25g样品、255mL标准稀释液，接种其它微生物检测片后，再加入
41mL4*MRS
肉汤。
PAC测试片上生长的菌落数乘以
11即为最终结果（个/g）。
1、制备至少
1：
2、加入适当的肉
10或更高稀释
汤稀释液，稀释液
度的样品稀释
的配置方法根据
液。
称量食品
说明书制备。
如果
样品于WirPak
使用一种1：
10
取样袋、均质袋、稀释瓶或其它适合的消容器中。
稀释液检测多种微生物，3M公司提供了更为简便的
多种菌检测程序（见前页）。
3、如果需要进
4、接种：
按操作
行多倍稀释，
说明接种1.0mL
肉汤稀释液只
样品稀释液于
能用于最终稀
Petrifilm
释步骤。
初始
稀释可使用标准稀释液，包括磷酸盐缓冲液（ID）
F磷酸盐缓冲液，0.0425g/LKH2POI4Ph7.2）
、
0.1%蛋白胶水，蛋白胶盐稀释液（
ISO方法
6887）、蛋白胶水缓冲液（ISO方法6579）、生
理盐水（0.85～0.90％），不含亚硫酸氢盐的
Letheen肉汤或蒸馏水，每步稀释都应充分混匀。
5、培养：
厌氧
6、判读：
培养测试片。
Petrifilm:
PAC
将测试片透明
测试片可在标准
面朝上放入
菌落计数器或其
GASPak厌氧罐
他放大光源下计
中，叠放数量不得超过
20片。
如果检测片超过
数。
测试片赏的菌落数乘以稀释倍数，可获得每毫
20片，可在同一罐中用一个坚硬的分隔器将检
升样品中酸乳菌落数。
详见判读手册。
测片分开培养。
将厌氧罐放入30℃～35℃
（86℉～95℉）培养箱中培养48＋3h.
判读手册
Count=238
Count=30
使用PAC测试片,用MRS肉汤稀释样品和厌养,
测试片中有导型发家哦的乳酸菌
（产气）和同型发酵
可促进同型发酵的乳酸菌生长.
的乳酸菌.用MRS肉汤稀释,
使异型发酵的乳酸菌
图1为同型发酵的乳酸菌落（不带气泡）的例子.
在暗影背景下有明显气泡产生
（见黑圈1）
生长区边缘的异型发酵乳酸菌菌落大约在
1/4英寸
时,可能不产生可视的气泡（见黑圈2）.
Count=0
Count=60
图3是用MRS内汤为稀释液接种
PAC测试片作为
测试片最适宜计数范围是
25-250
个菌落,计数所有
对照,以MRS为稀释液及厌氧培养将在测试片上
菌落,不管其大小和颜色深浅
.
产生一个稍显暗色的浅色圆形生长区域
.
Estimatedcount=440
Count=TNTC（Estimatedcount=106）
测试片面积约为
20cm2.
当菌落数超过
250个（如
当菌落数多不可计
（tntc）
时,整个生长区可能变为
图5所示）时,可估算菌落数
.
选择其中一个或数
粉红色,如图
6所示.将测试片与以
MRS肉汤作对照
个有代表性菌落的小方格
（1cm2）,
计算平均菌
的测试片做比较
因为测试片的颜色变化是微小的
落数,在乘以20可得到测试片上的菌落总数.（见图3）,此种情况下样品需作进一步稀释.
Count=TNTC（Estimatedcount=106）Conut=TNTC（Estimatedcount=108）
仔细观察,在测试片生长区中心和边缘处可见针当菌落数很多时,许多针尖大小的菌落会环绕在生
尖大小的菌落,计录为TNTC结果.长区边缘,记录为TNTC.
Count=TNTC
Count=52
图9是TNTC的又一个例子.同型发酵乳酸菌菌落
人为的气泡可能是不适当的接种所致
他们形状不
（无气泡产生）（黑圈1）
与异型发酵乳酸菌菌落
规则,且不与菌落相连接
（有气泡产生）（黑圈2）
同时出现.
3M大肠杆菌/大肠菌群快速检验测试片操作以及判读
一、测试大肠杆菌
/大肠菌群
操作方法
1、未开封时，冷藏于≤8℃（≤46℉），
2、已开封的，将封口以胶带
并在保存期内用完，高温度时，凝固
水可以排除，包装物最好于室温启开。
封紧。
3、保存再封的袋于≤25℃（≤77℉）
4、制备
1：
10和更大稀释的
和温度<50％，不要冷藏已开启的包装
食物样品稀释液，称取或吸取
袋，并于一个月内使用完。
食物样品，置入适宜的无菌容
器内，如均质袋、稀释瓶、
WhirlPakbag
或者其他灭菌
容器内.
6、搅拌或均质样品
5、加入适量的无菌稀释液,包括
酸性样品的稀释液用INNaoH
调PH6.5－7.5，对碱性样品
BufferedpeptoneBuffer（IDF
的稀释液用INHCL调PH6.5
－7.5。
phopsphatebuffer,用0.0425g/L的
KH2PO4调PH7.2）、0.1%的蛋白胶水（ISO方法6887）、缓冲蛋白胶水
（ISO方法6579）、盐溶液（0.85-0.90%）、bisulfite-freeletheenbroth
或蒸馏水.
但不可用含有枸橼酸盐、bisulfiteorthiosulfate的缓冲液.因为它
能抑止菌生长。
7、将测试片置于平坦表面处，揭开上8、使用吸管将1ml样液垂直
层膜。
滴加在测试片的中央处。
9、细心将上层膜缓慢盖下，避免有气10、使用压板（平面底朝下）
光泡产生，切勿使上层膜直接落下。
放置在上层膜中央处。
11、轻轻的压下，使样液均匀覆盖于12、拿起压板，静置至少1
圆形的培养面积上，切勿扭转压板。
分钟以使培养基凝固。
13、测试片的透明面朝上，可堆叠至14、可目视及用标准菌落计数
20片，对有一定湿度养箱能保持最少器或其它的照明放大镜计数，
份损失是需要的。
并可参考判读卡计算菌落数。
15、可以分离菌落作进一步鉴定，即
掀起上层膜，由培养胶上挑取单个菌
落。
二、测试大肠杆菌/大肠菌群判读方法
Petrifilm
Coliform
TMColiform
测试片含有
VRB培养剂
（Violet
RedBile）
，一种冷水可溶性的凝胶剂和四唑翁
（tetrazollium）
指示剂，
可增强菌落计数效果。
绝大多数E.coli（约占97%）能产生-葡萄糖甘酸酶与培养基中的指示剂反应，产生蓝色沉淀环绕在大肠杆菌菌落周围，表面覆盖的胶膜，可留住发酵乳糖的大肠菌群产生的气体，约有95%的大肠杆菌产生，形成蓝色或深蓝上菌落并有气泡相连接，气泡大小约为1个菌落直径。
AOAC和FDA细菌学分析手册（RAM）规定大肠菌群为革兰氏阴性杆菌，发酵乳糖产酸产气。
大肠菌群菌落在PetrifilmCC测试片上生长
产酸，PH指示剂使培养基颜色变深，在红色菌落周围有气泡者，为大肠菌群细菌。
大肠杆菌鉴定，在不同国家可以有变更（见培养时间
和温度部分指示）。
该测试片不能单独测
Nogrowth=0
定E.coliO157,像大
注意图2到8
多数其他
培养基颜色
E.conliform
培养基
的变化,随着
一样,它没有专门指
E.coliform
示是否有任何0157菌
菌数增多,培
株的存在.
养基颜色变
AOAC确认的方法:
成暗红色或
E.coli=49
（蓝色菌落
蓝紫色,背景
带有气泡）
的泡（沫）为
Totalcoliform=87（红色和蓝色菌落带有气泡）
培养基现象,不是大肠杆菌或大肠菌群生长结果
见方框1.
E.coliconnt=13
E.coli
Totalcoliform
count=3
count=28
任何蓝色菌
PetrifilmEc
测试片
落（蓝色到红
菌落数适宜计数范围
蓝色）表明有
是15-150,
不要计算
E.coli存
圆形培养基外的菌
在,正面照明
落,因为泡棉上已不
增强形成蓝
含选择性培养基.见
色沉淀菌落
圆圈!
的测定,圆圈
1示为背面光照的红蓝菌落
圆圈2示为同一菌落的正面光照蓝
色沉淀更明显些.
E.colicount=17
Actual
Estimatedtotal
count～106
coliformcount=150
Petrifilm
测试片面积约为
EC测试片菌
20cm2,当菌落数超过
落无法计数
150个,为了估计菌
时至少有下
落数可选择其中一个
列现象之一:
或数个有代表性菌落
1.很多小菌
的小方格（1cm2）计算
落
平均菌落数,再乘以
2.有许多气
20方可得到整个测试片上的菌落数
泡
3.培养基的颜色变深,由红色到蓝紫色
Actualcount
～108
Presumptive
高数量的大肠杆菌可
E.couli
以引起长生区变成蓝
count～8
紫色.
Estimated
total
coliform
count～108
当大肠菌群
数>108时,
一些大肠杆
菌菌株可能产生少量气体和不明确的蓝色菌落
.所有不带气泡
的蓝色菌落和（或）蓝色环带,推定为大肠杆菌需计数
如有必要
需挑取不带气泡的蓝色菌落
进行确认试验.
Actualcount
～108
Total
当有大量的非大肠菌
coliform
群细菌如假单胞菌属
count=3
细菌存在
食物颗粒为
时,petrifilm
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