生化实验常用溶液的配制doc.docx

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生化实验常用溶液的配制doc

生化实验常用溶液的配制

一.常用贮液与溶液

1mol/L亚精胺（Spermidine）:

溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。

分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L精胺（Spermine）：

溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。

分装成小份贮存于-20℃。

10mol/L乙酸胺（ammoniumacetate）：

将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。

10mg/ml牛血清蛋白（BSA）：

加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，

须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。

不要涡旋混合。

加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：

在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。

或转移100mg的二硫苏糖醇

至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。

8mol/L乙酸钾（potassiumacetate）：

溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。

1mol/L氯化钾（KCl）：

溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。

3mol/L乙酸钠（sodiumacetate）：

溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。

0.5mol/LEDTA:

配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。

或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。

1mol/LHEPES：

将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。

1mol/LHCl：

加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。

25mg/mlIPGT：

溶解250mg的IPGT（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份贮存于-20℃。

1mol/LMgCl2:

溶解20.3gMgCl2·6H2O于足量的水中，定容到100ml。

100mmol/LPMSF：

溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。

分成小份并用铝箔将装液管包裹

或贮存于-20℃。

20mg/ml蛋白酶K（proteinaseK）：

将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。

不要涡旋混合。

加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

10mg/mlRnase（无DNase）（DNase－freeRNase）：

溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH5.0）。

溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。

用1mol/L的Tris－HCl调pH至7.5，于-20℃贮存。

（配制过程中要戴手套）

5mol/L氯化钠（NaCl）：

溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。

10N氢氧化钠（NaOH）：

溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。

10％SDS（十二烷基硫酸钠）：

称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。

用水定容至1L。

2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：

溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。

100％三氯乙酸（TCA）:

在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。

（稀释液应在临用前配制）

2.5％X－gal（5-溴-4-氯-3-吲哚－β-半乳糖苷）：

溶解25mg的X－gal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20℃。

100×Denhardt试剂（Denhardt'sregent）

100×Denhardt试剂（Denhardt'sregent）

成分及终浓度

配制100ml溶液各成分的用量

2%聚蔗糖（Ficoll，400型）

2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）

2%BSA（组分V）

水

2g

2g

2g

加水至总体积为100ml

依照上表称取各组分，溶于水中定容。

过滤除菌及杂质，分装成小份于-20℃贮存。

10×标准DNA连接酶缓冲液（standardDNAligasebuffer）（粘端、平端连接）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分的用量

0.5mol/LTris-HCl

100mmol/LMgCl2

100mmol/LDTT

2mmol/LATP

5mmol/L盐酸亚精胺（可选）

0.5mg/mlBSA（组分V）（可选）

水

5ml1mol/L贮液

1ml1mol/L贮液

1ml1mol/L贮液

200ul100mmol/L贮液

50ul1mmol/L贮液

0.5ml10mg/mL贮液

2.25ml

将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20℃。

100mmol/LdNTP溶液（dNTPsolutions）

可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80℃可贮存至少6个月。

10mmol/LdNTP混合液

成分及终浓度

配制20ul溶液各成分的用量

10mmol/LdATP

10mmol/LdCTP

10mmol/LdGTP

10mmol/LdTTP

水

2ul100mmol/LdATP贮液

2ul100mmol/LdCTP贮液

2ul100mmol/LdGTP贮液

2ul100mmol/LdTTP贮液

12ul

20％PEG8000/2.5MNaCl

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分的用量

质量浓度为20％聚乙二醇

2.5mol/L氯化钠

水

20g

50ml5mol/L氯化钠或14.6g固体氯化钠

补足100ml

加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。

20×SSC

成分及终浓度

配制1L溶液各成分的用量

300mmol/L柠檬酸三钠（二水）

3mol/L氯化钠

水

88.2g

175.3g

补足1L

溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约0.9L水中，加几滴10NNaOH溶液调pH为7.0，用水补足体积至1L。

DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水

加100ulDEPC于100ml水中，使DEPC的体积分数为0.1％。

在37℃温浴至少12h，然后在15psi条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC失活。

DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。

甲酰胺（deionizedformamide）

直接购买或加DowexXG8混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h，可去除甲酰胺中的离子。

经Whatman1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80℃贮存（防止氧化）。

磷酸缓冲液（phosphatebuffer）

按照下表所给定的体积，混合1mol/L的磷酸二氢钠（单碱）和1mol/L磷酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。

配制1mol/L的磷酸二氢钠（NaH2PO4·H2O）贮液：

溶解138g于足量水中，使终体积为1L;1mol/L磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液:

溶解142g于足量水中使终体积为1L。

1mol/L磷酸二氢钠（ml）

1mol/L磷酸氢二钠（ml）

最终pH值

877

850

815

775

735

685

625

565

510

450

390

330

280

123

150

185

225

265

315

375

435

490

550

610

670

720

6.0

6.1

6.2

6.3

6.4

6.5

6.6

6.7

6.8

6.9

7.0

7.1

7.2

TE（用于悬浮和贮存DNA）

成分及终浓度

配制100ml溶液各成分的用量

10mmol/LTris－HCl

1mmol/LEDTA

水

1ml1mol/LTris-HCl（pH7.4-8.0，25℃）

200ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）

98.8ml

Tris缓冲液（Tris-HClbuffer）

将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH（25℃下）加一定量的浓盐酸（11.6N），用水调整终体积至1L。

浓盐酸的体积（ml）

pH

8.6

14

21

28.5

38

46

56

66

71.3

76

9.0

8.8

8.6

8.4

8.2

8.0

7.8

7.6

7.4

7.2

二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液

电泳缓冲液

50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液

成分及终浓度

配制1L溶液各成分的用量

2mol/LTris碱

1mol/L乙酸

100mmol/LEDTA

水

242g

57.1ml的冰乙酸（17.4mol/L）

200ml的0.5mol/LEDTA（pH8.0）

补足1L

5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液

成分及终浓度

配制1L溶液各成分的用量

445mmol/LTris碱

445mmol/L硼酸盐

10mmol/LEDTA

水

54g

27.5g硼酸

20ml的0.5mol/LEDTA（pH8.0）

补足1L

染料

1％溴酚蓝（bromophenolblue）

加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。

1％二甲苯青FF（xylenecyanoleFF）

溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。

10mg/ml的溴化乙锭（ethidiumbromide）

小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。

用铝箔包裹装液管，于4℃贮存。

凝胶上样液（gelloadingsolutions）

6×碱性凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0.3N氢氧化钠

6mmol/LEDTA

18％聚蔗糖（400型）

0.15％溴甲酚绿

0.25％二甲苯青FF

水

300ul10N氢氧化钠

120ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）

1.8g

15mg

25mg

补足到10ml

6×聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0.15％溴酚蓝

0.15％二甲苯青FF

5mmol/LEDTA

15％聚蔗糖（400型）

水

1.5ml1％溴酚蓝

1.5ml1％二甲苯青FF

100ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）

1.5g

补足到10ml

6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0.25％溴酚蓝

0.25％二甲苯青FF

15％聚蔗糖（400型）

水

2.5ml1％溴酚蓝

2.5ml1％二甲苯青FF

1.5g

补足到10ml

6×甘油凝胶上样液（4℃贮存）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0.15％溴酚蓝

0.15％二甲苯青FF

5mmol/LEDTA

50％甘油

水

1.5ml1％溴酚蓝

1.5ml1％二甲苯青FF

100ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）

3ml

3.9ml

6×蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0.15％溴酚蓝

0.15％二甲苯青FF

5mmol/LEDTA

40％聚蔗糖

水

1.5ml1％溴酚蓝

1.5ml1％二甲苯青FF

100ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）

4g

补足到10ml

10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0.2％溴酚蓝

0.2％二甲苯青FF

200mmol/LEDTA

0.1％SDS

50％甘油

水

20mg

20mg

4ml0.5mol/LEDTA（pH8.0）

100ul10％SDS

5ml

补足到10ml

三.常用培养基

LB培养基

将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨

10g

酵母提取物

5g

氯化钠

10g

如果需要用1NNaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。

注：

琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。

SOB培养基

将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨

20g

酵母提取物

5g

氯化钠

0.5g

1mol/L氯化钾

2.5ml

用水补足体积到1L。

分成100ml的小份，高压灭菌。

培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。

SOC培养基

成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌）。

TB培养基

将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨

12g

酵母提取物

24g

甘油

4ml

各组分溶解后高压灭菌。

冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mmol/LKH2PO4/0.72mol/LK2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml。

高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌）。

2×YT培养基

将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨

16g

酵母提取物

10g

氯化钠

4ml

如果需要用1NNaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。

注：

琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。

YPD培养基

将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨

20g

酵母提取物

10g

葡萄糖

20g

用水补足体积为1L后，高压灭菌。

建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸，因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。

为了配制平板，需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。

四.常用抗生素

氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml）

溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20℃贮存。

常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）

溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20℃贮存。

常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

甲氧西林（methicillin）（100mg/ml）

溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20℃贮存。

常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。

卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml）

溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20℃贮存。

常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml）

溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20℃贮存。

常以12.5ug/ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

链霉素（streptomycin）（50mg/ml）

溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20℃贮存。

常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

萘啶酮酸（nalidixicacid）（5mg/ml）

溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20℃贮存。

常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

四环素（tetracyyline）（10mg/ml）

溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。

分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。

常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

一、常规溶液

（一）1/15mol/LPBS（磷酸缓冲液PhosphateBufferSolution，PBS）

甲液：

1/15mol/LNa2HPO4溶液

Na2HPO4                  9.465g

蒸馏水                   加至1000ml

乙液：

l/15mol/LKH2PO4溶液

KH2P04                    9.07g

蒸馏水                   加至1000m1

分装在棕色瓶内，于4℃冰箱中保存，用时甲、乙两液各按不同比例混合，即可得所需pH的缓冲液,见下表:

pH

 甲液ml

 乙液mI

   pH

 甲液ml

 乙液mI

   5.29

   5.59

   5.91

   6.24

   6.47

   6.64

   2.5

   5.0

   10.0

   20.0

   30.0

   40.0

   97.5

   95.0

   90.0

   80.0

   70.0

   60.0

   6.81

   6.98

   7.17

   7.38

   7.73

   8.04

   50.0

   60.0

   70.0

   80.0

   90.0

   95.0

50.0

40.0

30.0

20.0

10.0

5.0

（二）0.3％台盼兰染液

   称取台盼兰（Trypanblue）粉0.3克，溶于100ml生理盐水中，加热使之完全溶解，用滤纸过滤除渣，装入瓶内室温保存。

   （三）0.5％酚红指示剂

   酚红                     0.5g

0.1N（0.4％）NaOH          15ml

   双蒸水                   85ml

   将0.5克酚红置研钵中，缓漫滴加0.1NNaOH溶液边加边磨，并不断吸出已溶解的酚红液，直至全部溶解，然后加入85ml双蒸水，颜色为深红，经粗滤纸过滤后使用，室温保存。

   （四）5.6％NaHCO3溶液

   称NaHCO35.6克，溶于100ml蒸馏水中，室温保存即可（如需要也可10磅15分钟高压灭菌，4℃冰箱保存）

   （五）10μg／ml秋水仙素

   秋水仙素                   lOmg

生理盐水                   100ml

装入茶色瓶中，为贮备液，4℃冰箱中保存。

甩时取贮备液1ml加生理盐水9ml即可。

   （六）0.4％KCl-0.4％柠檬酸钠低渗液

   将0.4％KCl和0.4％柠檬酸钠两液等量混合即可，室温保存。

   （七）2％柠檬酸钠

   称取柠檬酸钠2克，加100ml双蒸水即可，室温保存。

  （八）0.2％次甲基兰染液

   称次甲基兰（Methyleneblue）0.2克，加蒸馏水100ml，室温保存。

   （九）0.5％醋酸洋红（AceioCarmine）染液

   洋红                   lg

   醋酸                   90ml

   蒸馏水                 110ml

   将90ml醋酸加入110ml蒸馏水煮沸，然后将火焰移去，立即加入1克洋红，使之迅速冷却过滤，加饱和氢氧化铁（媒染剂）水溶液数滴，直到呈葡萄酒色。

室温保存。

加铁使洋红沉淀于组织而着色。

此染液室温存放时间越长效果越好，室温保存。

   （十）1％甲苯胺兰（Toluidineblue）

   称取甲苯胺兰1克，加蒸馏水lOOml。

   （十一）1/3000中性红染液

   取中性红（Neutralred）0.1克，加蒸馏水300ml。

室温保存。

   （十二）Giemsa染液

   1．贮备液

Giemsa粉                   1g

纯甘油                66ml

甲醇                      66ml

   先将Giemsa粉置于研钵中加少量甘油，充分研磨，呈无颗粒的糊状。

再将全部甘油加入，放入56℃温箱中2小时，然后加入甲醇，保存于茶色瓶中。

一般两周后使用为好。

   2．工作液

   临用时将贮备液与pH6.8的磷酸缓冲液按照1:

20混合。

   （十三）埃利希（Ehrlich）苏木精染液

   苏木精                   1.0g

   乙醇                     50ml

   醋酸                     5ml

   甘油                     50ml

   硫酸铝钾                   5g

   蒸馏水                     50ml

   将苏木精溶于少量的乙醇中，再加醋酸并搅拌，以加速其溶解。

当苏木精溶解后将甘油加入并摇动容器，同时加入其余的乙醇；硫酸铝钾需研磨并加热，然后溶解于蒸馏水中，将其一滴滴地加入上边的溶液，并不断摇动，此液配好后，将瓶口用纱布盖好，置通风处，经常摇动以加速其成熟，成熟约需4周左右，成熟的染液为深红色。

   二、细胞化学和细胞组分分离溶液

（一）M一缓冲液

   眯唑（Imidazole）                   3.404g

   KCI                               3.7g

   MgCl2·6H2O                        101.65mg

   ECTA                              380.35mg

   EDTA                              29.224mg

   巯基乙醇          0.07ml

   甘油                              297ml

   蒸馏水