常用动物和细胞实验讲义.docx
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常用动物和细胞实验讲义
绪言
一、实验课目的
本学科是一门实验性很强的学科,其实验课教学是整个教学的重要组成部分。
目的有如下几方面:
(一)验证理论。
通过对理论课所学理论的验证,进一步加深对教学内容的理解、巩固和提高。
(二)通过基本技能的训练以及对实验结果的观察分析,使学生了解并掌握细胞生物学有关的实验技术方法,进而培养学生动手实践、观察分析和解决问题的能力。
(三)培养学生实事求是的科学态度和科学的思维方法,为其后续课的实验及今后的医学研究打下基础。
二、实验课要求
(一)学生在实验前应认真预习实验指导及教材中与实验有关的章节,对实验课的原理、内容及方法有初步的了解。
(二)在实验中要认真操作、仔细观察、分析并及时做好记录。
(三)要注重动手能力的培养。
(四)在实验中要注重基本技能的训练及实验仪器、器械的使用方法。
对基本的实验技能要反复训练直至基本掌握。
(五)实验结束后,要根据实验过程中的记录和实验指导的要求,实事求是、认真的写好实验报告,不得抄书或借阅他人的报告参考。
三、实验室规则
(一)遵守实验纪律,不迟到、不早退或无故缺席。
(二)进入实验室要穿好白大衣。
(三)进实验室后要按学号对号入座,不能随意更换座位。
要保持肃静。
(四)要严肃认真地进行实验。
实验期间不得进行任何与实验无关的活动。
(五)实验中各种用品使用后应放回原处。
示教标本应按顺序观察,不能任意移动标本,以免妨碍他人观察。
(六)要爱护仪器、标本和器械,如有损坏,应及时报告老师,以便修理或更换。
损坏仪器、器械和标本者应按规定进行赔偿。
(七)要注意节约实验材料、药品和水、电等资源。
(八)保持实验室内清洁整齐。
实验废物及纸屑应放到指定地点,不得随意乱丢。
实验结束后要认真清理各自的实验台面,将器械清洗后点清数目并摆放整齐。
值日生负责清扫实验室,清扫结束后要关好水、电、门窗等,经教师允许方可离开实验室。
附:
实验课绘图要求学生每人准备一支HB铅笔、直尺和橡皮。
四、实验教学的内容
实验顺序
实验内容
实验一
普通光学显微镜的结构和使用
实验二
动物细胞的基本形态观察和显微测量
实验三
细胞组分的化学反应
实验四
线粒体的活体染色
实验五
液泡系的活体染色
实验六
细胞膜通透性的观察
实验七
细胞计数
实验八
细胞超微结构电镜照片的识别
实验九
细胞分裂
实验十
细胞的原代和传代培养
实验十一
细胞融合
第一次实验:
普通光学显微镜的结构和使用
动物细胞的基本形态观察和显微测量
第二次实验:
细胞组分的化学反应
线粒体的活体染色
液泡系的活体染色
第三次实验:
细胞膜通透性的观察
细胞计数
第四次实验:
细胞超微结构电镜照片的识别
细胞分裂
细胞的原代和传代培养录像
常用实验动物的了解和解剖器械的使用
一、常用实验动物
常用的实验动物有蟾蜍、小白鼠、大白鼠、豚鼠、猫、兔和狗等。
在医学实验中,常常根据不同的实验目的而选用不同的动物进行实验研究。
例如,蟾蜍可以用于观察离体心脏搏动情况的实验,小白鼠常用于样本很大的实验(如药物的半数致死量的测定等),猫常用于测定脑内电位的实验,而狗是局解手术中常用的实验动物。
在我们细胞生物学实验中,除应用培养细胞外,最常用的动物是蟾蜍和小白鼠,下面对其特点及基本处置做一简单的介绍。
蟾蜍
蟾蜍是两栖类动物,由于其取材方便,常用于各种实验。
其细胞较哺乳类动物的细胞大得多,因此常用于观察细胞形态的实验。
1.雌雄鉴别
通常雄性蟾蜍较雌性的为小,且在其前肢的l~3趾基部有被称为婚垫的黑疣。
2.捉拿及处死方法:
常用捣髓法处死蟾蜍,即用解剖针捣毁其脑组织和脊髓。
具体方法是,左手握住蟾蜍的身体和四肢,使其腹部贴着掌心,食指压住蟾蜍头部前端使其尽量腹屈。
在头与躯干之间可触及一凹陷(即枕骨大孔所在处),右手持解剖针直插入此凹陷约l~2mm,随即将针尖转向头侧插入颅腔捣毁脑组织。
然后将解剖针抽回并转向尾侧刺入脊椎管内捣毁其脊髓。
如此直至其四肢松软,呼吸消失为止。
小白鼠
小白鼠是哺乳动物,是最为常用的实验动物。
1.捉拿方法:
将小白鼠放在鼠笼盖铁网上,用右手持其尾巴向后拉,小鼠则会尽力向前蹬。
用左手的拇指和食指抓住其头顶部皮肤,然后用左手小指与手掌之间夹住其尾巴。
2.处死方法:
处死应以安乐死为原则,即使之无痛苦而迅速死亡。
常用的方法有颈椎脱位法,断头法和二氧化碳吸入法等。
断头法需用特殊的断头器,二氧化碳吸入法则将小鼠放入盛有二氧化碳的容器内即可。
颈椎脱位法的具体方法是:
左手拇指和食指按住小白鼠的头部,左手捉住其尾巴迅速向后猛拉,使其颈椎脱位而立即死亡。
3.给药方法:
小自鼠的给药途径有经口给药、腹腔内注射、尾静脉注射、皮下注射、皮内注射和肌肉注射等。
我们常用的是腹腔注射。
具体方法是:
左手捉住小鼠(如前所述),在其腹正中线稍外侧(避开膀胱和血管)用酒精消毒后,首先将注射针头向头部方向刺入皮下,进针1~2mm后,再以45°角刺穿腹部肌肉而进入腹腔(刺穿腹肌时有一落空感)。
针头刺入腹腔后切勿左右摆动,以免损伤肠管或肝脏。
注意每次注入的液体量应为0.1~0.2ml/10克体重。
二、常用手术器械及操作方法:
1.解剖针:
用于挑、刺等。
常用来捣髓处死蟾蜍,持法如执笔法。
2.解剖刀(即外科手术刀):
用于各种皮肤切口和组织切除等。
持法有执弓法与执笔法两种。
前者用于较大力量切开较长距离的坚韧的组织,如大动物的皮肤切口等;后者则用于小力量的短距离切开,或分离皮肤和肌肉等。
3.大剪刀:
用于剪毛、皮肤、皮下组织和肌肉等。
持法如图。
4.眼科剪刀:
用于剪断神经、血管、筋膜等细软组织。
5.眼科镊子:
用于提取神经、血管和筋膜等细软组织。
6.钝头镊子:
用于提取脏器、组织等。
7.有钩镊子:
用于提取皮肤切口等。
常用手术器械
执刀方法
执镊姿势
执剪姿势
实验一普通光学显微镜的结构和使用
实验目的:
1.熟悉普通光学显微镜的主要构造及其性能。
2.掌握低倍镜及高倍镜的使用方法。
3.初步掌握油镜的使用方法。
实验用品:
1.普通光学显微镜、二甲苯、香柏油、擦镜纸。
2.羊毛装片、蛙血涂片、神经细胞标本。
实验内容:
一、光学显微镜的类型
光学显微镜,简称显微镜或光镜,是利用光线照明使微小物体形成放大影像的仪器。
400多年来,经不断改进,显微镜的结构和性能逐步完善,形成了品种繁多、型号各异的光学显微镜系列(图1—1)。
除了广泛使用的普通光镜外,还有相差显微镜、暗视野显微镜、荧光显微镜和倒置显微镜等具有特殊功能或用途的光镜。
形形色色的光学显微镜虽然外形和结构差异较大,但其基本构造和工作原理是相似的。
二、光学显微镜的结构
1.机械系统
(1)镜筒是安装在光镜最上方或镜臂前方的圆筒状结构或方形结构,其上端装有目镜,下端与物镜转换器相连(图1—2)。
(2)物镜转换器又称旋转盘,是安装在镜筒下方的一圆盘状结构,可以按顺时针或逆时针方向旋转,其上均匀分布有3~4个圆孔,用以装载不同放大倍数的物镜。
转动旋转盘可使不同的物镜到达工作位置(即与光路合轴),此时能听到“咔”的一声。
(3)镜臂是支持镜筒和镜台的弯曲状结构,是取用显微镜时握持的部位。
图1-2普通光学显微镜的结构示意图
(4)调焦器也称调焦螺旋,是调节焦距的装置,位于镜柱的下端,左右对称各一套。
分粗调螺旋(大螺旋)和细调螺旋(小螺旋)两种。
粗调螺旋可使载物台以较快速度或较大幅度升降,能迅速调节好焦距,使物像呈现在视野中,适于低倍镜观察时的调焦。
细调螺旋只能使载物台缓慢或较小幅度地升降,升或降的幅度不易被肉眼观察到,适用于高倍镜和油镜焦距的精细调节;也常用于观察标本的不同层次,一般在粗调螺旋调焦的基础上使用。
有些类型的光镜,在左侧粗调螺旋的内侧有一窄环,称为粗调松紧调节轮,其功能是调节粗调螺旋的松紧度。
另外,在右侧粗调螺旋的内侧有一粗调限位凸柄,当用粗调螺旋调准焦距后向上推紧该柄,可使粗调螺旋限位,此时镜台不能继续上升,但细调螺旋仍可调节。
(5)载物台也称镜台,是位于物镜转换器下方的方形平台,用于放置被观察的玻片标本。
载物台的中央有圆形的通光孔,来自下方的光线经此孔照射到标本上。
在载物台上装有标本移动器,也称推进器或推进尺,其上安装的弹簧夹用于固定玻片标本,载物台的左下方的两个螺旋可以移动推进器,可使玻片标本在水平面上前后左右移动,用来寻找目标。
(6)镜柱是连接镜臂与镜座的短柱,其上有调焦器。
(7)镜座位于最底部,是整台显微镜的基座,用于支持和稳定镜体。
在镜座内装有照明光源。
2.光学系统
光学系统包括目镜和物镜。
(1)目镜又称接目镜,安装在镜筒的上端,起着将物镜所放大的物像进一步放大的作用。
每个目镜一般由两个透镜组成,在上下两个透镜(即接目透镜和会聚透镜)之间安装有能决定视野大小的金属光阑——视场光阑,此光阑的位置即是物镜所放大实像的位置。
因此,可将一小段细金属丝或头发粘附在光阑上作为指针,用以指示视野中的某一部分供他人观察。
另外,还可在光阑的面上安装目镜测微尺。
每台显微镜通常配置2~3个不同放大倍数的目镜,如“5×”、“10×”和“15×”(数字表示放大倍数)目镜,可根据不同需要选择使用,最常使用的是“10×”目镜。
(2)物镜也称接物镜,安装在物镜转换器上。
每台光镜一般有3~4个不同放大倍数的物镜,每个物镜由数片凸透镜组合而成,是显微镜最主要的光学部件,决定着光镜分辨力的高低。
常用物镜的放大倍数有“10×”、“40×”和“100×”等几种。
一般将“10×”物镜称为低倍镜(而将“5×”及以下的叫做放大镜),将“40×”或“45×”物镜称为高倍镜,将“100×”物镜称为油镜(这种镜头在使用时其顶端需浸在香柏油中)。
在每个物镜的侧壁通常都标有能反映其主要性能的参数(图1—3),主要有放大倍数和数值孔径(如10/0.25、40/0.65、100/1.25)、该物镜所要求的镜筒长度和标本上的盖玻片厚度(160/0.17,单位为mm);另外,在油镜上还常标有“油”或“oil”字样。
玻片上表面
物镜头与玻片标本之间的介质一般为空气。
由于玻璃与空气的折光率不同,光线通过载玻片和空气进入物镜,部分光线产生折射而损失掉,导致进入物镜的光线减少,分辨率降低。
而油镜用香柏油或石蜡油作为介质,香柏油或石蜡油折射率与玻璃近似(玻璃、香柏油和石蜡油的折射率分别为1.52、1.51和1.46,空气为1),可减少光线的折射,增加视野亮度,提高分辨率。
物镜分辨率还和数值孔径有关,其数值越大,分辨率越高。
不同物镜有不同的工作距离,所谓工作距离是指显微镜处于工作状态(焦距调好、物像清晰)时,物镜最下端与玻片上表面之间的距离(图1—3)。
物镜的放大倍数与其工作距离成反比。
当低倍镜被调节到工作距离后,可直接转换高倍镜,只需旋动细调螺旋,便可见到清晰的物像,这种情况称为同高调焦。
不同放大倍数的物镜可从长短上加以区分,一般来说,低倍镜最短,油镜最长,而高倍镜的长度介于两者之间。
显微镜的放大倍数是目镜的放大倍数和物镜的放大倍数的乘积。
3.照明系统
(1)聚光器位于载物台通光孔的下方,由2~3个透镜组合而成,其主要功能是将光线集中到所要观察的标本上,增加视野的亮度。
在聚光器的左下方,有一调节螺旋,可使其上升或下降,从而调节光线的强弱。
升高聚光器可使聚光作用增强,反之则聚光作用减弱。
(2)光圈也称彩虹光阑或孔径光阑,位于聚光器的下端,是能够控制进入聚光镜光束大小的可变圆环结构。
它由十几张金属薄片组合排列而成,其外侧有一小柄,可使光圈的孔径开大或缩小,以调节光线的强弱。
有的显微镜光圈的下方还装有滤光片框,可放置不同颜色的滤光片。
(3)光源包括电源线及其插头和灯泡及其开关。
电源线在镜柱下面的镜座侧面。
用时将其插头插入电源插座中。
灯泡在镜座上面中央位置,其开关在镜座上镜柱底部的左侧(有的显微镜开关在镜柱上)。
可通过灯泡开关旋钮来调节光线亮度以适应不同的观察需要。
三、光学显微镜的使用方法
1.准备工作和基本要求
取用显微镜时,一手握住镜臂,另一手托住镜座,将显微镜平稳地放置在实验台上,镜座后缘离桌台边缘约5cm。
用显微镜观察标本时,要求双眼同时睁开,双手并用;逐步养成左手调焦、右手移动标本或绘图记录的良好习惯。
2.低倍镜的使用
(1)调光打开显微镜光源,转动粗调螺旋,使载物台稍下降,调节物镜转换器,使低倍镜转到工作状态(即低倍镜头对准通光孔),当镜头完全到位时,可听到轻微的顿挫声。
侧面观察的同时用粗调螺旋使镜台上升到离物镜约1厘米处。
打开光圈并使聚光器上升到适当位置(以聚光镜上端透镜平面稍低于载物台平面的高度为宜),然后双眼观察目镜,同时调节光源的亮度,使视野内的光线均匀、亮度适中。
(2)放片取需要观察的玻片标本,先对着光线用肉眼观察标本的全貌和位置;再将其放置到载物台上,用推进器上的弹簧夹固定好,注意应使有盖玻片或有标签的一面朝上;然后,旋动推进器的螺旋,使需要观察的标本部位处于通光孔的中央位置。
(3)调焦用眼睛从侧面注视低倍镜,同时用粗调螺旋使载物台上升,直至低倍镜头距玻片标本的距离约0.5cm(注意操作时必须从侧面注视镜头与玻片的距离,以避免镜头压坏玻片);然后,双眼观察目镜,同时慢慢转动粗调螺旋使载物台下降,直至视野中出现较清晰的物像为止;最后,转动细调螺旋,使视野中的物像更清晰。
如果需观察的物像不在视野中央,甚至不在视野内,可用推进器前后、左右移动标本片,使物像进入视野并移至中央。
在调焦时,如果镜头与玻片的距离已超过了1cm还未见到物像,应严格按上述步骤重新操作。
如果不能确定视野中的物像是目标物像,可先移动一下标本推进尺,如果视野中的物像不随之移动,说明此物像是目镜或物镜头表面上的异物,而不是要找的物像,应继续调焦或移动标本推进器。
如果移动标本推进器物像随之移动,①转动细调节器,使镜台细微上升,使标本上表面上的异物物像消失,进而出现真正要观察的标本物像;②如第①种方法仍不能看到真正的标本物像,可继续用粗调节器缓慢下降镜台,使标本下表面上的异物物像消失,直至看到真正的标本物像;③如果第①和第②种方法都不行,应重复调焦。
3.高倍镜的使用
由于高倍镜放大倍数高于低倍镜,其观察视野小于低倍镜,所以在使用高倍镜前,应先用低倍镜寻找到需观察的物像,并将其移至视野中央,同时转动细调螺旋,使被观察的物像清晰。
转动物镜转换器,使高倍镜转到工作状态(高倍镜头对准通光孔),此时,视野中一般可见到不太清晰的物像,只需调节细调螺旋便可使物像清晰。
有时在低倍镜准焦状态下,直接转换高倍镜时会发生高倍镜镜头碰擦玻片,而使高倍镜不能转换到位的情况。
此时不能硬转,应检查玻片是否放反、玻片是否过厚以及物镜是否松动等情况。
4.油镜的使用
由于油镜头放大倍数高于高倍镜,与上述同样原理,油镜头观察视野小于高倍镜,所以用高倍镜找到所需观察的标本物像,并将需要进一步放大的部位移至视野中央。
将聚光器上升至较高位置并将光圈开至最大(油镜所需光线较强)。
转动物镜转换器,移开高倍镜,在玻片标本上需观察的部位滴一滴香柏油作为介质,然后在眼睛的注视下,使油镜转至工作状态,此时油镜的下端应正好浸在油滴中或与油滴接触。
双眼注视目镜的同时小心而缓慢地转动细调螺旋,直至视野中出现清晰的物像。
操作时不要过度转动细调螺旋,以免镜头下降压碎标本或损坏镜头。
在观察时,如需同老师或同学讨论视野中的某一结构,可用推进器将该结构移至指针尖端处;如果镜中未装指针,可将视野看成一个周缘带有刻度的钟面,说明该结构位于钟面的几点钟位置(如3点、6点、9点、12点等)。
油镜使用结束后,必须及时将镜头上的油擦拭干净。
擦试前,应将镜筒升高约1cm并将油镜头转离通光孔;擦试时,先用擦镜纸蘸少许二甲苯擦2次,再用干净的擦镜纸擦1次。
至于玻片上的油,如果是有盖玻片的永久制片,可直接用上述擦油镜头的方法擦净;如果是无盖玻片的标本,则用拉纸法除去载玻片上的油,即先把一小片擦镜纸盖在油滴上,再往纸上滴几滴二甲苯,立即将纸往外上方提拉2~3次。
如未擦净,应重复上述过程。
5.显微镜用后放置方法
显微镜使用结束后应及时复原,使其处于非工作状态:
先下降载物台,取下标本片,物镜转离通光孔;然后,上升载物台,使物镜与载物台相接近;关闭光源,下降聚光器,关闭光圈。
最后,将显微镜罩上防尘罩,放在实验台正中央。
6.显微镜使用的注意事项
为了能看到、看清和不遗漏标本的物像,不损坏玻片标本和显微镜,培养良好的科学作风,使用显微镜时应注意:
(1)
严格按操作步骤使用
(2)调整适当的视野亮度根据标本材料的厚薄、折光性大小、染色的深浅和选用的物镜放大倍数调节视野的亮度。
当标本材料厚、折光性小、染色深、物镜放大倍数高时,视野亮度应相对较大。
反之视野亮度应较小。
(3)切勿放反玻片标本放反标本时,虽不影响低倍镜观察,但转换高倍镜和油镜时不但不能找到标本的物像,反而极易损坏玻片标本和物镜头。
(4)牢记各种放大倍数物镜的工作距离。
因为只有在工作距离附近调焦,才能找见标本物像,并能在用高倍镜和油镜时注意防止玻片标本和物镜头相碰损坏。
(5)转换物镜时,必须手指握在物镜旋转盘的周缘上,严禁用手指勾动物镜,以防物镜松动,甚至脱落。
从相对低等倍数物镜转换用高等倍数物镜前,应将所需观察的标本物像移至视野的中心,并须在侧面观察的同时转动相对高等倍数的物镜至工作位置。
(6)眼睛注视目镜观察标本时,禁止用粗调节器上升镜台,以防物镜头与玻片标本相碰损坏。
用高倍镜和油镜时,只能用细调节器调焦,且只能转动正反2~3圈。
如果不能找到或看不清标本物像,原因可能有:
①物像未移到视野的中心;②用前一个物镜观察时,物像未调得十分清楚(焦距未调准);③玻片标本放反了;④转换用的物镜头脏了;⑤转换用的物镜松动了。
(7)观察标本应全面,以便选择标本材料厚薄适宜、分散好、染色好和形态结构典型的部位观察,尤其是能防止遗漏有意义的物像。
(8)显微镜的光学和照明部分只能用擦镜纸擦拭;用完油镜后,一定将油镜头和标本擦干净。
二甲苯有毒致癌,应尽量少用,用后应立即盖好瓶盖,放回原处或放在不易碰到和打碎的地方。
(9)显微镜应平拿平放。
使用前和使用中不能随意拆卸显微镜的零部件,如发现玻片标本或显微镜的零件缺失或损坏等异常情况,应立即报告老师。
(10)观察显微镜时应将座椅高度调适当,上身应挺直而放松;双眼应同时注视目镜,不要将手放在眼睛或目镜的周围。
(11)显微镜用后必须关闭电源和照明灯开关,按要求放置,并认真如实填写显微镜使用卡。
四、操作练习
1.蛙血涂片
蛙血涂片上的的血膜经瑞氏染料染色后呈蓝紫色,将蓝紫色的血膜对着通光孔,低倍镜下,调焦后可看到大量密集的红细胞及少量散在的白细胞、血小板。
换用高倍镜或油镜仔细观察:
红细胞有核、中央色淡;白细胞胞体大,核质比大,核形态不一;血小板较小,形态不规则,由巨核细胞的胞质脱落而来。
2.羊毛装片
先在低倍镜下仔细观察两根羊毛的交叉点,将交叉点移至视野中央后换用高倍镜观察,利用细调螺旋分别对两根羊毛进行调焦,分辨出两根羊毛的上下位置。
3.神经细胞标本
动物脊髓神经细胞在镜下较大、有多个突起,胞体呈三角形或星形,中央有一没着色的圆形或椭圆形细胞核。
有的可见核仁。
散布于神经细胞之间的染色较深的小的细胞是神经胶质细胞(图1-4)。
按照上述操作程序反复练习低倍镜、高倍镜和油镜的使用方法。
思考题:
1.使用显微镜观察标本时,为什么必须按从低倍镜到高倍镜再到油镜的顺序进行?
2.在调焦时,为什么要先将低倍镜与标本表面的距离调节到0.5cm?
3.如果标本放反了,可用高倍镜或油镜找到标本吗?
4.怎样才能准确而迅速地在高倍镜或油镜下找到目标?
5.如果细调螺旋已转至极限而物像仍不清晰,应该怎么办?
6.如何判断视野中所见到的污点的来源?
作业:
1.填图:
标注显微镜的部件名称。
2.使用显微镜时应注意哪些问题?
3.显微镜使用后应如何放置?
4.在观察标本时,发现视野光线太暗,应如何调节显微镜视野中的光线强度?
实验二动物细胞的基本形态观察和显微测量
实验目的:
1.掌握不同细胞临时制片的制作方法。
2.观察不同细胞的基本形态。
3.掌握显微镜和测微尺的基本使用方法。
4.熟悉捣髓法处死蟾蜍的方法。
5.熟悉各种常用解剖器材的使用及细胞生物学实验绘图方法。
实验用品:
1.材料和标本
蟾蜍一只,人血液一滴
2.器材和仪器
配有目镜测微尺的光学显微镜一台、载片若干、盖片若干、吸水纸、手术器材一套、解剖盘一个、小平皿一个、表镊子、消毒牙签、镜台测微尺一个。
3.试剂
1%甲苯胺兰、1%甲基兰、Ringer氏液(两栖类用)
理论基础
细胞的形态结构与功能相关是很多细胞的共同特点,在分化程度较高的细胞更为明显,这种合理性是生物漫长进化过程所形成的。
例如:
具有收缩机能的肌细胞伸展为细长形;具有感受刺激和传导冲动机能的神经细胞有长短不一的树枝状突起;游离的血细胞为圆形、椭圆形或圆饼形。
不论细胞的形状如何,细胞的结构一般分为三大部分:
细胞膜、细胞质和细胞核。
但也有例外。
例如:
哺乳类红细胞成熟时细胞核消失。
生物学临时制片的一般步骤是:
1.取材;2.将材料放在载玻片上;3.固定;4.染
色。
因材料的来源、性质和制片的目的不同,各种制片的四个步骤的方法、用料等不尽相同,并且有的制片可省略固定或染色的步骤。
测微尺是用来测定显微镜下细胞等微观结构的大小的。
测微尺分目镜测微尺和镜台测微尺,两尺配合使用。
目镜测微尺是一个放在目镜像平面上的玻璃圆片。
圆片中央刻有一条直线,此线被分为若干格,每格代表的长度随不同物镜的放大倍数而异。
因此,用前必须测定。
镜台测微尺是在一个载片中央封固的尺,长1毫米(1000μm),被分为100格,每格长度是10微米。
实验内容
一、细胞基本形态观察
(一)蟾蜍脊髓压片的制备和脊髓前角运动神经细胞的观察
1.取蟾蜍一只,破坏脑和脊髓,在口裂处剪去头部,除去延脑,剪开椎管,可见乳白色脊髓。
2.取下脊髓放在平皿内,用Ringer氏液洗去血液后放在载片上,剪碎。
3.将另一载片压在脊髓碎块上,用力挤压。
4.将上面的载片取下即可得到压片。
在压片上滴一滴甲苯胺兰染液,染色10分钟。
5.盖上盖片,吸去多余染液。
在显微镜下观察。
实验结果:
染色较深的小细胞是神经胶质细胞。
染成兰紫色的、大的、有多个突起的细胞是脊髓前角运动神经细胞,胞体呈三角形或星形,中央有一个圆形细胞核,内有一个核仁。
(二)蟾蜍骨骼肌细胞的剥离与观察
1.剪开蟾蜍腿部皮肤,剪下一小块肌肉,放在载片上。
2.用镊子和解剖针剥离肌肉块成为肌束,继续剥离,可得到很细的肌纤维(肌细胞)。
3.尽可能拉直肌纤维。
在显微镜下观察。
结果:
肌细胞为细长形,可见折光不同的横纹,每个肌细胞有多个核,分布于细胞的周边。
(三)蟾蜍肝脏压片的制备与观察
1.剪开蟾蜍腹腔,取一小块(约2~3mm3)肝放在平皿内,用Ringer氏液洗净,用镊子轻压将肝中的血挤出。
2.将肝组织放在载片上,制片方法同脊髓压片。
3.用甲基兰染液染色5min。
显微镜下观察。
结果:
可见肝细胞核染成兰色,肝细胞紧密排列,挤成多角形。
(四)蟾蜍血涂片及人血涂片的制备与观察
1.剪开蟾蜍胸腔。