常用动物和细胞实验讲义.docx

1、常用动物和细胞实验讲义绪 言一、实验课目的本学科是一门实验性很强的学科，其实验课教学是整个教学的重要组成部分。目的有如下几方面： （一） 验证理论。通过对理论课所学理论的验证，进一步加深对教学内容的理解、巩固和提高。 （二） 通过基本技能的训练以及对实验结果的观察分析，使学生了解并掌握细胞生物学有关的实验技术方法，进而培养学生动手实践、观察分析和解决问题的能力。 （三） 培养学生实事求是的科学态度和科学的思维方法，为其后续课的实验及今后的医学研究打下基础。二、实验课要求（一） 学生在实验前应认真预习实验指导及教材中与实验有关的章节，对实验课的原理、内容及方法有初步的了解。（二） 在实验中要认真

2、操作、仔细观察、分析并及时做好记录。（三） 要注重动手能力的培养。（四） 在实验中要注重基本技能的训练及实验仪器、器械的使用方法。对基本的实验技能要反复训练直至基本掌握。（五） 实验结束后，要根据实验过程中的记录和实验指导的要求，实事求是、认真的写好实验报告，不得抄书或借阅他人的报告参考。三、实验室规则 （一） 遵守实验纪律，不迟到、不早退或无故缺席。 （二） 进入实验室要穿好白大衣。 （三） 进实验室后要按学号对号入座，不能随意更换座位。要保持肃静。 （四） 要严肃认真地进行实验。实验期间不得进行任何与实验无关的活动。 （五） 实验中各种用品使用后应放回原处。示教标本应按顺序观察，不能任意移

3、动标本，以免妨碍他人观察。 （六） 要爱护仪器、标本和器械，如有损坏，应及时报告老师，以便修理或更换。损坏仪器、器械和标本者应按规定进行赔偿。 （七） 要注意节约实验材料、药品和水、电等资源。 （八） 保持实验室内清洁整齐。实验废物及纸屑应放到指定地点，不得随意乱丢。实验结束后要认真清理各自的实验台面，将器械清洗后点清数目并摆放整齐。值日生负责清扫实验室，清扫结束后要关好水、电、门窗等，经教师允许方可离开实验室。附：实验课绘图要求学生每人准备一支HB铅笔、直尺和橡皮。四、实验教学的内容实验顺序实 验 内 容实验一普通光学显微镜的结构和使用实验二动物细胞的基本形态观察和显微测量实验三细胞组分的化

4、学反应实验四线粒体的活体染色实验五液泡系的活体染色实验六细胞膜通透性的观察实验七细胞计数实验八细胞超微结构电镜照片的识别实验九细胞分裂实验十细胞的原代和传代培养实验十一细胞融合第一次实验：普通光学显微镜的结构和使用动物细胞的基本形态观察和显微测量第二次实验：细胞组分的化学反应线粒体的活体染色液泡系的活体染色第三次实验：细胞膜通透性的观察细胞计数第四次实验：细胞超微结构电镜照片的识别细胞分裂细胞的原代和传代培养录像常用实验动物的了解和解剖器械的使用 一、常用实验动物 常用的实验动物有蟾蜍、小白鼠、大白鼠、豚鼠、猫、兔和狗等。在医学实验中，常常根据不同的实验目的而选用不同的动物进行实验研究。例如，

5、蟾蜍可以用于观察离体心脏搏动情况的实验，小白鼠常用于样本很大的实验(如药物的半数致死量的测定等)，猫常用于测定脑内电位的实验，而狗是局解手术中常用的实验动物。 在我们细胞生物学实验中，除应用培养细胞外，最常用的动物是蟾蜍和小白鼠，下面对其特点及基本处置做一简单的介绍。 蟾蜍 蟾蜍是两栖类动物，由于其取材方便，常用于各种实验。其细胞较哺乳类动物的细胞大得多，因此常用于观察细胞形态的实验。 1雌雄鉴别 通常雄性蟾蜍较雌性的为小，且在其前肢的l3趾基部有被称为婚垫的黑疣。 2捉拿及处死方法： 常用捣髓法处死蟾蜍，即用解剖针捣毁其脑组织和脊髓。具体方法是，左手握住蟾蜍的身体和四肢，使其腹部贴着掌心，食

6、指压住蟾蜍头部前端使其尽量腹屈。在头与躯干之间可触及一凹陷(即枕骨大孔所在处)，右手持解剖针直插入此凹陷约l2mm，随即将针尖转向头侧插入颅腔捣毁脑组织。然后将解剖针抽回并转向尾侧刺入脊椎管内捣毁其脊髓。如此直至其四肢松软，呼吸消失为止。 小白鼠 小白鼠是哺乳动物，是最为常用的实验动物。 1捉拿方法： 将小白鼠放在鼠笼盖铁网上，用右手持其尾巴向后拉，小鼠则会尽力向前蹬。用左手的拇指和食指抓住其头顶部皮肤，然后用左手小指与手掌之间夹住其尾巴。 2处死方法： 处死应以安乐死为原则，即使之无痛苦而迅速死亡。常用的方法有颈椎脱位法，断头法和二氧化碳吸入法等。断头法需用特殊的断头器，二氧化碳吸入法则将小

7、鼠放入盛有二氧化碳的容器内即可。颈椎脱位法的具体方法是：左手拇指和食指按住小白鼠的头部，左手捉住其尾巴迅速向后猛拉，使其颈椎脱位而立即死亡。 3给药方法： 小自鼠的给药途径有经口给药、腹腔内注射、尾静脉注射、皮下注射、皮内注射和肌肉注射等。我们常用的是腹腔注射。具体方法是：左手捉住小鼠(如前所述)，在其腹正中线稍外侧(避开膀胱和血管)用酒精消毒后，首先将注射针头向头部方向刺入皮下，进针12mm后，再以45角刺穿腹部肌肉而进入腹腔(刺穿腹肌时有一落空感)。针头刺入腹腔后切勿左右摆动，以免损伤肠管或肝脏。注意每次注入的液体量应为0.10.2ml10克体重。 二、常用手术器械及操作方法： 1解剖针：

8、用于挑、刺等。常用来捣髓处死蟾蜍，持法如执笔法。 2解剖刀(即外科手术刀)：用于各种皮肤切口和组织切除等。持法有执弓法与执笔法两种。前者用于较大力量切开较长距离的坚韧的组织，如大动物的皮肤切口等；后者则用于小力量的短距离切开，或分离皮肤和肌肉等。 3大剪刀：用于剪毛、皮肤、皮下组织和肌肉等。持法如图。 4眼科剪刀：用于剪断神经、血管、筋膜等细软组织。 5眼科镊子：用于提取神经、血管和筋膜等细软组织。 6钝头镊子：用于提取脏器、组织等。 7有钩镊子：用于提取皮肤切口等。 常用手术器械 执刀方法 执镊姿势执剪姿势实验一 普通光学显微镜的结构和使用实验目的：1熟悉普通光学显微镜的主要构造及其性能。2

9、掌握低倍镜及高倍镜的使用方法。3初步掌握油镜的使用方法。实验用品：1普通光学显微镜、二甲苯、香柏油、擦镜纸。2羊毛装片、蛙血涂片、神经细胞标本。实验内容：一、光学显微镜的类型光学显微镜，简称显微镜或光镜，是利用光线照明使微小物体形成放大影像的仪器。400多年来，经不断改进，显微镜的结构和性能逐步完善，形成了品种繁多、型号各异的光学显微镜系列（图11）。除了广泛使用的普通光镜外，还有相差显微镜、暗视野显微镜、荧光显微镜和倒置显微镜等具有特殊功能或用途的光镜。形形色色的光学显微镜虽然外形和结构差异较大，但其基本构造和工作原理是相似的。二、光学显微镜的结构1机械系统（1） 镜筒 是安装在光镜最上方或

10、镜臂前方的圆筒状结构或方形结构，其上端装有目镜，下端与物镜转换器相连（图12）。（2） 物镜转换器 又称旋转盘，是安装在镜筒下方的一圆盘状结构，可以按顺时针或逆时针方向旋转，其上均匀分布有34个圆孔，用以装载不同放大倍数的物镜。转动旋转盘可使不同的物镜到达工作位置（即与光路合轴），此时能听到“咔”的一声。（3） 镜臂 是支持镜筒和镜台的弯曲状结构，是取用显微镜时握持的部位。图1-2 普通光学显微镜的结构示意图（4） 调焦器 也称调焦螺旋，是调节焦距的装置，位于镜柱的下端，左右对称各一套。分粗调螺旋（大螺旋）和细调螺旋（小螺旋）两种。粗调螺旋可使载物台以较快速度或较大幅度升降，能迅速调节好焦距，

11、使物像呈现在视野中，适于低倍镜观察时的调焦。细调螺旋只能使载物台缓慢或较小幅度地升降，升或降的幅度不易被肉眼观察到，适用于高倍镜和油镜焦距的精细调节；也常用于观察标本的不同层次，一般在粗调螺旋调焦的基础上使用。 有些类型的光镜，在左侧粗调螺旋的内侧有一窄环，称为粗调松紧调节轮，其功能是调节粗调螺旋的松紧度。另外，在右侧粗调螺旋的内侧有一粗调限位凸柄，当用粗调螺旋调准焦距后向上推紧该柄，可使粗调螺旋限位，此时镜台不能继续上升，但细调螺旋仍可调节。（5） 载物台 也称镜台，是位于物镜转换器下方的方形平台，用于放置被观察的玻片标本。载物台的中央有圆形的通光孔，来自下方的光线经此孔照射到标本上。在载物

12、台上装有标本移动器，也称推进器或推进尺，其上安装的弹簧夹用于固定玻片标本，载物台的左下方的两个螺旋可以移动推进器，可使玻片标本在水平面上前后左右移动，用来寻找目标。（6） 镜柱 是连接镜臂与镜座的短柱，其上有调焦器。（7） 镜座 位于最底部，是整台显微镜的基座，用于支持和稳定镜体。在镜座内装有照明光源。2光学系统光学系统包括目镜和物镜。（1） 目镜 又称接目镜，安装在镜筒的上端，起着将物镜所放大的物像进一步放大的作用。每个目镜一般由两个透镜组成，在上下两个透镜（即接目透镜和会聚透镜）之间安装有能决定视野大小的金属光阑视场光阑，此光阑的位置即是物镜所放大实像的位置。因此，可将一小段细金属丝或头发

13、粘附在光阑上作为指针，用以指示视野中的某一部分供他人观察。另外，还可在光阑的面上安装目镜测微尺。每台显微镜通常配置23个不同放大倍数的目镜，如“5”、“10”和“15”（数字表示放大倍数）目镜，可根据不同需要选择使用，最常使用的是“10”目镜。（2） 物镜 也称接物镜，安装在物镜转换器上。每台光镜一般有34个不同放大倍数的物镜，每个物镜由数片凸透镜组合而成，是显微镜最主要的光学部件，决定着光镜分辨力的高低。常用物镜的放大倍数有“10 ”、“40 ”和“100”等几种。一般将“10”物镜称为低倍镜（而将“5”及以下的叫做放大镜），将“40”或“45”物镜称为高倍镜，将“100”物镜称为油镜（这种

14、镜头在使用时其顶端需浸在香柏油中）。在每个物镜的侧壁通常都标有能反映其主要性能的参数（图13），主要有放大倍数和数值孔径（如10/0.25、40/0.65、100/1.25）、该物镜所要求的镜筒长度和标本上的盖玻片厚度（160/0.17，单位为mm）；另外，在油镜上还常标有“油”或“oil”字样。玻片上表面物镜头与玻片标本之间的介质一般为空气。由于玻璃与空气的折光率不同，光线通过载玻片和空气进入物镜，部分光线产生折射而损失掉，导致进入物镜的光线减少，分辨率降低。而油镜用香柏油或石蜡油作为介质，香柏油或石蜡油折射率与玻璃近似（玻璃、香柏油和石蜡油的折射率分别为1.52、1.51和1.46，空气为

15、1），可减少光线的折射，增加视野亮度，提高分辨率。物镜分辨率还和数值孔径有关，其数值越大，分辨率越高。不同物镜有不同的工作距离，所谓工作距离是指显微镜处于工作状态（焦距调好、物像清晰）时，物镜最下端与玻片上表面之间的距离（图13）。物镜的放大倍数与其工作距离成反比。当低倍镜被调节到工作距离后，可直接转换高倍镜，只需旋动细调螺旋，便可见到清晰的物像，这种情况称为同高调焦。不同放大倍数的物镜可从长短上加以区分，一般来说，低倍镜最短，油镜最长，而高倍镜的长度介于两者之间。显微镜的放大倍数是目镜的放大倍数和物镜的放大倍数的乘积。3照明系统 （1）聚光器 位于载物台通光孔的下方，由23个透镜组合而成，其

16、主要功能是将光线集中到所要观察的标本上，增加视野的亮度。在聚光器的左下方，有一调节螺旋，可使其上升或下降，从而调节光线的强弱。升高聚光器可使聚光作用增强，反之则聚光作用减弱。（2）光圈 也称彩虹光阑或孔径光阑，位于聚光器的下端，是能够控制进入聚光镜光束大小的可变圆环结构。它由十几张金属薄片组合排列而成，其外侧有一小柄，可使光圈的孔径开大或缩小，以调节光线的强弱。有的显微镜光圈的下方还装有滤光片框，可放置不同颜色的滤光片。（3）光源 包括电源线及其插头和灯泡及其开关。电源线在镜柱下面的镜座侧面。用时将其插头插入电源插座中。灯泡在镜座上面中央位置，其开关在镜座上镜柱底部的左侧（有的显微镜开关在镜柱

17、上）。可通过灯泡开关旋钮来调节光线亮度以适应不同的观察需要。三、光学显微镜的使用方法1准备工作和基本要求取用显微镜时，一手握住镜臂，另一手托住镜座，将显微镜平稳地放置在实验台上，镜座后缘离桌台边缘约5cm。用显微镜观察标本时，要求双眼同时睁开，双手并用；逐步养成左手调焦、右手移动标本或绘图记录的良好习惯。2低倍镜的使用（1） 调光 打开显微镜光源，转动粗调螺旋，使载物台稍下降，调节物镜转换器，使低倍镜转到工作状态（即低倍镜头对准通光孔），当镜头完全到位时，可听到轻微的顿挫声。侧面观察的同时用粗调螺旋使镜台上升到离物镜约1厘米处。打开光圈并使聚光器上升到适当位置（以聚光镜上端透镜平面稍低于载物台

18、平面的高度为宜），然后双眼观察目镜，同时调节光源的亮度，使视野内的光线均匀、亮度适中。（2） 放片 取需要观察的玻片标本，先对着光线用肉眼观察标本的全貌和位置；再将其放置到载物台上，用推进器上的弹簧夹固定好，注意应使有盖玻片或有标签的一面朝上；然后，旋动推进器的螺旋，使需要观察的标本部位处于通光孔的中央位置。（3） 调焦 用眼睛从侧面注视低倍镜，同时用粗调螺旋使载物台上升，直至低倍镜头距玻片标本的距离约0.5cm（注意操作时必须从侧面注视镜头与玻片的距离，以避免镜头压坏玻片）；然后，双眼观察目镜，同时慢慢转动粗调螺旋使载物台下降，直至视野中出现较清晰的物像为止；最后，转动细调螺旋，使视野中的物

19、像更清晰。如果需观察的物像不在视野中央，甚至不在视野内，可用推进器前后、左右移动标本片，使物像进入视野并移至中央。在调焦时，如果镜头与玻片的距离已超过了1 cm还未见到物像，应严格按上述步骤重新操作。如果不能确定视野中的物像是目标物像，可先移动一下标本推进尺，如果视野中的物像不随之移动，说明此物像是目镜或物镜头表面上的异物，而不是要找的物像，应继续调焦或移动标本推进器。如果移动标本推进器物像随之移动，转动细调节器，使镜台细微上升，使标本上表面上的异物物像消失，进而出现真正要观察的标本物像；如第种方法仍不能看到真正的标本物像，可继续用粗调节器缓慢下降镜台，使标本下表面上的异物物像消失，直至看到真

20、正的标本物像；如果第和第种方法都不行，应重复调焦。3高倍镜的使用由于高倍镜放大倍数高于低倍镜，其观察视野小于低倍镜，所以在使用高倍镜前，应先用低倍镜寻找到需观察的物像，并将其移至视野中央，同时转动细调螺旋，使被观察的物像清晰。转动物镜转换器，使高倍镜转到工作状态（高倍镜头对准通光孔），此时，视野中一般可见到不太清晰的物像，只需调节细调螺旋便可使物像清晰。有时在低倍镜准焦状态下，直接转换高倍镜时会发生高倍镜镜头碰擦玻片，而使高倍镜不能转换到位的情况。此时不能硬转，应检查玻片是否放反、玻片是否过厚以及物镜是否松动等情况。4油镜的使用由于油镜头放大倍数高于高倍镜，与上述同样原理，油镜头观察视野小于高

21、倍镜，所以用高倍镜找到所需观察的标本物像，并将需要进一步放大的部位移至视野中央。将聚光器上升至较高位置并将光圈开至最大（油镜所需光线较强）。转动物镜转换器，移开高倍镜，在玻片标本上需观察的部位滴一滴香柏油作为介质，然后在眼睛的注视下，使油镜转至工作状态，此时油镜的下端应正好浸在油滴中或与油滴接触。双眼注视目镜的同时小心而缓慢地转动细调螺旋，直至视野中出现清晰的物像。操作时不要过度转动细调螺旋，以免镜头下降压碎标本或损坏镜头。在观察时，如需同老师或同学讨论视野中的某一结构，可用推进器将该结构移至指针尖端处；如果镜中未装指针，可将视野看成一个周缘带有刻度的钟面，说明该结构位于钟面的几点钟位置（如3

22、点、6点、9点、12点等）。油镜使用结束后，必须及时将镜头上的油擦拭干净。擦试前，应将镜筒升高约1 cm并将油镜头转离通光孔；擦试时，先用擦镜纸蘸少许二甲苯擦2次，再用干净的擦镜纸擦1次。至于玻片上的油，如果是有盖玻片的永久制片，可直接用上述擦油镜头的方法擦净；如果是无盖玻片的标本，则用拉纸法除去载玻片上的油，即先把一小片擦镜纸盖在油滴上，再往纸上滴几滴二甲苯，立即将纸往外上方提拉次。如未擦净，应重复上述过程。5 显微镜用后放置方法显微镜使用结束后应及时复原，使其处于非工作状态：先下降载物台，取下标本片，物镜转离通光孔；然后，上升载物台，使物镜与载物台相接近；关闭光源，下降聚光器，关闭光圈。最

23、后，将显微镜罩上防尘罩，放在实验台正中央。6显微镜使用的注意事项为了能看到、看清和不遗漏标本的物像，不损坏玻片标本和显微镜，培养良好的科学作风，使用显微镜时应注意：（1） 严格按操作步骤使用（2） 调整适当的视野亮度 根据标本材料的厚薄、折光性大小、染色的深浅和选用的物镜放大倍数调节视野的亮度。当标本材料厚、折光性小、染色深、物镜放大倍数高时，视野亮度应相对较大。反之视野亮度应较小。（3） 切勿放反玻片标本 放反标本时，虽不影响低倍镜观察，但转换高倍镜和油镜时不但不能找到标本的物像，反而极易损坏玻片标本和物镜头。（4） 牢记各种放大倍数物镜的工作距离。因为只有在工作距离附近调焦，才能找见标本物

24、像，并能在用高倍镜和油镜时注意防止玻片标本和物镜头相碰损坏。（5） 转换物镜时，必须手指握在物镜旋转盘的周缘上，严禁用手指勾动物镜，以防物镜松动，甚至脱落。从相对低等倍数物镜转换用高等倍数物镜前，应将所需观察的标本物像移至视野的中心，并须在侧面观察的同时转动相对高等倍数的物镜至工作位置。（6） 眼睛注视目镜观察标本时，禁止用粗调节器上升镜台，以防物镜头与玻片标本相碰损坏。用高倍镜和油镜时，只能用细调节器调焦，且只能转动正反23圈。如果不能找到或看不清标本物像，原因可能有：物像未移到视野的中心；用前一个物镜观察时，物像未调得十分清楚（焦距未调准）；玻片标本放反了；转换用的物镜头脏了；转换用的物镜

25、松动了。（7） 观察标本应全面，以便选择标本材料厚薄适宜、分散好、染色好和形态结构典型的部位观察，尤其是能防止遗漏有意义的物像。（8） 显微镜的光学和照明部分只能用擦镜纸擦拭；用完油镜后，一定将油镜头和标本擦干净。二甲苯有毒致癌，应尽量少用，用后应立即盖好瓶盖，放回原处或放在不易碰到和打碎的地方。（9） 显微镜应平拿平放。使用前和使用中不能随意拆卸显微镜的零部件，如发现玻片标本或显微镜的零件缺失或损坏等异常情况，应立即报告老师。（10） 观察显微镜时应将座椅高度调适当，上身应挺直而放松；双眼应同时注视目镜，不要将手放在眼睛或目镜的周围。（11） 显微镜用后必须关闭电源和照明灯开关，按要求放置，

26、并认真如实填写显微镜使用卡。 四、操作练习1. 蛙血涂片蛙血涂片上的的血膜经瑞氏染料染色后呈蓝紫色，将蓝紫色的血膜对着通光孔，低倍镜下，调焦后可看到大量密集的红细胞及少量散在的白细胞、血小板。换用高倍镜或油镜仔细观察：红细胞有核、中央色淡；白细胞胞体大，核质比大，核形态不一；血小板较小，形态不规则，由巨核细胞的胞质脱落而来。2. 羊毛装片先在低倍镜下仔细观察两根羊毛的交叉点，将交叉点移至视野中央后换用高倍镜观察，利用细调螺旋分别对两根羊毛进行调焦，分辨出两根羊毛的上下位置。 3. 神经细胞标本动物脊髓神经细胞在镜下较大、有多个突起，胞体呈三角形或星形，中央有一没着色的圆形或椭圆形细胞核。有的可

27、见核仁。散布于神经细胞之间的染色较深的小的细胞是神经胶质细胞（图1-4）。按照上述操作程序反复练习低倍镜、高倍镜和油镜的使用方法。思考题：1 使用显微镜观察标本时，为什么必须按从低倍镜到高倍镜再到油镜的顺序进行？2 在调焦时，为什么要先将低倍镜与标本表面的距离调节到0.5cm？ 3 如果标本放反了，可用高倍镜或油镜找到标本吗？4 怎样才能准确而迅速地在高倍镜或油镜下找到目标？5 如果细调螺旋已转至极限而物像仍不清晰，应该怎么办？6 如何判断视野中所见到的污点的来源? 作业：1 填图：标注显微镜的部件名称。2 使用显微镜时应注意哪些问题？3 显微镜使用后应如何放置？4 在观察标本时，发现视野光线

28、太暗，应如何调节显微镜视野中的光线强度？实验二 动物细胞的基本形态观察和显微测量实验目的：1 掌握不同细胞临时制片的制作方法。2 观察不同细胞的基本形态。3 掌握显微镜和测微尺的基本使用方法。4 熟悉捣髓法处死蟾蜍的方法。5 熟悉各种常用解剖器材的使用及细胞生物学实验绘图方法。实验用品：1. 材料和标本蟾蜍一只，人血液一滴2. 器材和仪器配有目镜测微尺的光学显微镜一台、载片若干、盖片若干、吸水纸、手术器材一套、解剖盘一个、小平皿一个、表镊子、消毒牙签、镜台测微尺一个。3. 试剂1甲苯胺兰、1甲基兰、Ringer氏液（两栖类用）理论基础细胞的形态结构与功能相关是很多细胞的共同特点，在分化程度较高

29、的细胞更为明显，这种合理性是生物漫长进化过程所形成的。例如：具有收缩机能的肌细胞伸展为细长形；具有感受刺激和传导冲动机能的神经细胞有长短不一的树枝状突起；游离的血细胞为圆形、椭圆形或圆饼形。不论细胞的形状如何，细胞的结构一般分为三大部分：细胞膜、细胞质和细胞核。但也有例外。例如：哺乳类红细胞成熟时细胞核消失。生物学临时制片的一般步骤是：1取材；2将材料放在载玻片上；3固定；4染色。因材料的来源、性质和制片的目的不同，各种制片的四个步骤的方法、用料等不尽相同，并且有的制片可省略固定或染色的步骤。测微尺是用来测定显微镜下细胞等微观结构的大小的。测微尺分目镜测微尺和镜台测微尺，两尺配合使用。目镜测微

30、尺是一个放在目镜像平面上的玻璃圆片。圆片中央刻有一条直线，此线被分为若干格，每格代表的长度随不同物镜的放大倍数而异。因此，用前必须测定。镜台测微尺是在一个载片中央封固的尺，长1毫米(1000m)，被分为100格，每格长度是10微米。实验内容一、细胞基本形态观察（一）蟾蜍脊髓压片的制备和脊髓前角运动神经细胞的观察1.取蟾蜍一只，破坏脑和脊髓，在口裂处剪去头部，除去延脑，剪开椎管，可见乳白色脊髓。2.取下脊髓放在平皿内，用Ringer氏液洗去血液后放在载片上，剪碎。3.将另一载片压在脊髓碎块上，用力挤压。4.将上面的载片取下即可得到压片。在压片上滴一滴甲苯胺兰染液，染色10分钟。5.盖上盖片，吸去

31、多余染液。在显微镜下观察。实验结果：染色较深的小细胞是神经胶质细胞。染成兰紫色的、大的、有多个突起的细胞是脊髓前角运动神经细胞，胞体呈三角形或星形，中央有一个圆形细胞核，内有一个核仁。（二）蟾蜍骨骼肌细胞的剥离与观察1.剪开蟾蜍腿部皮肤，剪下一小块肌肉，放在载片上。2.用镊子和解剖针剥离肌肉块成为肌束，继续剥离，可得到很细的肌纤维(肌细胞)。3.尽可能拉直肌纤维。在显微镜下观察。结果：肌细胞为细长形，可见折光不同的横纹，每个肌细胞有多个核，分布于细胞的周边。（三）蟾蜍肝脏压片的制备与观察1.剪开蟾蜍腹腔，取一小块(约23mm 3)肝放在平皿内，用Ringer氏液洗净，用镊子轻压将肝中的血挤出。2.将肝组织放在载片上，制片方法同脊髓压片。3. 用甲基兰染液染色5min。显微镜下观察。结果：可见肝细胞核染成兰色，肝细胞紧密排列，挤成多角形。（四）蟾蜍血涂片及人血涂片的制备与观察1.剪开蟾蜍胸腔。