血液凝集实验报告.docx

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血液凝集实验报告

血液凝集实验报告

篇一：

直接凝集反应实验报告

免疫学·直接凝集反应实验报告

实验一：

玻片凝集实验

1.实验原理：

颗粒性抗原（细菌、红细胞等）与相应的抗体结合，在适量电解质（通常是0.85%nacl）存在的条件下出现凝集现象，称为凝集反应。

凝集反应的方法有两种：

①直接法；②间接法。

颗粒性抗原（如完整的细菌或细胞）与相应抗体在体外直接结合而出现的凝集反应，称为直接凝集反应。

如玻片凝集反应和试管凝集反应。

将可溶性抗原预先吸附于一种与免疫无关的颗粒性载体表面，然后与相应的抗体结合，出现凝集现象，称为间接凝集反应。

如RF因子检测

玻片凝集试验是使用已知抗体与未知颗粒性抗原在玻片上直接结合而出现的凝集反应。

此类反应较简单迅速，常用于抗原或抗体的定性检测。

本次实验使用玻片凝集试验的原理进行人类aBo血型的鉴定。

aBo血型系统是按照血液中红细胞表面的抗原分子来命名的。

人类aBo血型抗原有两种：

a抗原和B抗原。

a型血红细胞表面具有a型抗原，血液中具有抗B抗体；B型血红细胞表面具有B型抗原，血液中具有抗a抗体；aB型血红细胞表面具有a抗原和B抗原，血液中不具有抗a、B抗体；o型血红细胞表面不具有a、B抗体，但血液中含有抗a、B抗体。

若用已知的抗a血清和抗B血清与受试者红细胞上的相应抗原结合，即可引起红细胞凝集，根据凝集反应结果便可判断出受试者的血型。

2.实验方法：

（1）取洁净载玻片一张，用马克笔分为两格并注明a、B分区。

（2）倒置标准抗血清试剂瓶，悬空轻挤出抗a血清一滴，滴在a区内；同法在B区内滴加抗B血清一滴。

（3）使用消毒液对左手无名指进行消毒，待消毒液自然干燥后，使用无菌三棱采血针快速刺破手指。

（4）用木棒的两端取血，分别在抗a血清和抗B血清中搅拌均匀。

（5）用无菌棉棒压迫手指止血。

（6）静置玻片数分钟后，观察红细胞凝集反应结果。

3.实验结果：

4.结果分析：

实验二：

试管凝集实验

1.实验原理：

试管凝集反应是在试管内将待检血清对倍稀释后，加入等量的已知颗粒性抗原与待检血清混合，然后观察试管内有无凝集快出现。

如出现凝集块者为阳性反应。

混合后仍均匀浑浊，无凝集块出现者为阴性反应。

根据血清凝集效价判定待检血清中相应抗体的含量。

即在试管内用已知颗粒性抗原检测未知抗体的相对含量的半定量试验。

本次实验是以定量的伤寒杆菌为抗原，根据是否发生凝集反

应来检测血清中是否含有对应的抗体；根据各试管凝集程度的不同，来判断抗体的效价。

2.实验方法：

（1）取试管6支，用马克笔进行标记，依次放入试管架中。

（2）在第一支试管中加入生理盐水0.9ml，其余各管加生理盐水0.5ml。

然后在第一只试管中加入伤寒免疫血清0.1ml，用吸管将它与生理盐水吹打混匀后，取出0.5ml加入第二支试管中；再将第二只试管的液体吹打混匀，取出0.5ml加入到第三支试管中，其余各管依次按照上述步骤将血清对倍稀释。

至第五支试管时，将试剂混匀后，取出0.5ml弃之不用。

是第六支试管不含伤寒免疫血清，作为实验的阴性对照管。

最后在各管中都加入0.5ml伤寒杆菌菌液。

（3）轻摇试管架，混匀试管内液体，56℃水浴1小时后，观察实验结果。

3.实验结果：

（1）对照组：

即第六支试管，上清液浑浊，管底可有沉淀的细菌，轻摇后分散呈均匀浑浊。

（2）实验组：

按1-5管依次观察。

阳性者管底出现不规则凝集物，较松散。

阴性者与对照组相同。

（3）凝集程度：

++++：

液体澄清透明，细菌全部凝集于管底，轻摇可见大的凝集块。

+++：

液体稍浑，细菌大多数凝集于管底，摇动后凝块较前者小。

++：

液体中等混浊，液体中有明显的凝集物，凝集块较小。

+：

液体混浊，仔细观察可以看见液体中有很小的凝集颗粒。

-：

与对照管相同。

（4）凝集效价：

出现明显可见凝集物（++）时的血清最高稀释度为血清效价。

篇二：

细胞凝集胞实验报告

实验1.血细胞凝集

Lab1.Bloodcellagglutination

摘要：

细胞凝集指的是细胞与细胞之间通过某种凝集素的作用而相互粘连在一起的现象，最终形成大的细胞团块。

而凝集素由于可使细胞凝集而成为一种重要实验和临床试剂。

本次实验就是通过进行对兔血细胞的凝集操作，观察细胞凝集现象，并掌握凝集素促进细胞凝集的实验原理和操作方法。

关键词：

细胞凝集、凝集素

前言：

凝集素是一类能专一识别糖并与之非共价可逆结合的非酶非抗体蛋白质。

凝集素是指从各种植物、无脊椎动物和高等动物中提纯的糖蛋白或结合糖的蛋白，因其能凝集红细胞，故名凝集素。

凝集素按来源可分为植物凝集素、动物凝集素和微生物凝集素三大类;植物凝集素分为7个家族：

豆科凝集素、几丁质结合凝集素、单子叶甘露糖结合凝集素、2型核糖体失活蛋白、木菠萝素家族、葫芦科韧皮部凝集素和苋科凝集素；动物凝集素按分子结构分为c-型凝集素、S-型凝集素、P-型凝集素、i-型凝集素等。

在细胞表面，组成细胞膜的糖脂和糖蛋白伸出的寡糖链，形成细胞外被（又称为糖萼）。

凝集素能与细胞外被中的糖分子连接，在细胞间形成“桥”，从而引起细胞凝集。

其反应机制如下图：

凝集素在生化、医学等方面有广泛的应用：

1.凝集素在实验室中经常被用来分离、纯化蛋白质植物凝集素的功能是结合细胞表面上的糖蛋白，动物凝集素的功能包括结合可溶性的细胞外或细胞内糖蛋白。

凝集素在实验室中经常用来分离、纯化糖蛋白。

这是由于植物凝集素能专一性地、非共价地可逆结合糖蛋白中不同类型的糖链结构，所以首先分别用凝集素亲和层析方法分离富集正常细胞和癌细胞的细胞裂解液中的糖蛋白，从细胞裂解物中高通量的分离出n-糖苷键型糖蛋白之后，再利用双向凝胶电泳技术对于被凝集素吸附的糖蛋白进行分离，最后利用质谱技术进行鉴定。

2.凝集素介导细胞与细胞、细胞与基质的粘附选凝素是一类ca2+依赖的、能与特异糖基识别并结合的细胞粘附分子，主要介导白细胞与血管内皮细胞或血小板的识别和粘附。

选凝素n-末端凝集素结构域可识别特异的寡糖基，是选凝素参与细胞间选择性粘附的重要活性部位。

选凝素c-末端胞内结构域可通过锚定蛋白与细胞内微丝结合，促进细胞粘附。

通过这种粘附介导白细胞从血液迁移至组织内。

3.凝集素检测肿瘤细胞的细胞膜上的糖基化改变

肿瘤细胞膜上组分的改变，较重

要的是糖蛋白及糖脂结构的改变，可用凝集素检测出来。

大量研究发现，凝集素可作为肿瘤特异性诊断的标志和不同肿瘤的分化标记。

凝集素还可以作为探针，监测肿瘤细胞的细胞膜上的糖基化改变，作为多种癌症检测的参考指标。

4.外源凝集素具有促有丝分裂原作用许多植物凝集素可作为有丝分裂原，如PHa、cona和美洲商陆凝集素，在免疫学中广泛用于刺激淋巴细胞的增殖。

在临床上常用PHa来刺激人外周血的T细胞，观察T细胞增殖的程度，称为淋巴细胞转化试验，是一种细胞免疫功能的体外检测方法。

5.纯化的凝集素能够用来鉴定血型通常所说的血型就是红细胞的血型，是根据红细胞表面的抗原特异性来确定的。

在人类的血浆（或血清）中含有凝集素（又称抗体）

a、B。

同名的抗原和凝集素相遇会发生红细胞凝集现象。

所以在人体的血液中，所含的凝集原和凝集素的类型不同，可分为a、B、aB、o四种血型。

纯化的凝集素能用来鉴定血型。

材料和方法：

试剂：

?

PBS缓冲液（pH=7.2）

?

土豆

?

2%兔血红细胞悬液

工具、仪器：

?

移液管

?

载玻片

?

显微镜

?

离心机、离心管（本次实验并未用到）

方法：

?

土豆切片后，取2g放入10mlPBS溶液中浸泡2小时。

土豆凝集素将会溶解于溶液中。

（实验前已准备好了）

?

梯度稀释制备不同浓度（1X，0.5X和0X）的土豆凝集素悬液

?

取用抗凝血剂处理过的1ml的兔静脉血，加3ml的生理盐水，1000r/min离心5min，弃上清。

（实验前也已准备好了）

?

将细胞沉淀悬浮于4ml生理盐水（注意不是PBS溶液），制成2%细胞悬液。

通过系列稀释，将血细胞制成3种不同浓度（0.5%，1%和2%）的悬液。

?

按照如下表一所示，用移液管取一滴凝集素或PBS溶液于载玻片凹坑内，加上一滴红细胞悬液，漩摇混合。

10min后于显微镜下观察。

表一?

各组中凝集素和血细胞的浓度

图1.在载玻片上所观察到的各组血细胞凝集现象

图2.显微镜下细胞凝集形态（10x10）

实验结果描述：

总结结论:

1.土豆凝集素可以使血红细胞凝集，而且在红细胞浓度一定的情况下，凝集素浓度与凝集程度和凝集速度呈正相关。

2.由a-3、B-3、c-3可以得，PBS对血红细胞没有凝集作用。

3.由于时间与土豆凝集素没有明显关联，且凝集程度相似，所以当凝集素浓度一定的情况下，无法对土豆凝集素浓度和凝集程度和凝集速度的相关性进行判断。

补充实验：

漩摇对细胞凝集的影响

方法：

取B-1和B-2进行实验，记为B-1’和B-2’，不对其进行漩摇，静置10min其他

步骤相同。

结果：

结论：

不进行漩摇，血细胞依然可以进行凝集，但由图可以看出进行漩摇的一组凝集程度更好。

根据实验书所述，若不进行漩摇，所要进行的操作是“静置20min”，也可以看出漩摇的效果更好，但静置20min和漩摇10min所达到的效果是否相同，由于没有进行实验，因此还有待考究。

讨论：

1.从实验结果上看，此次实验还是比较成功的，从血细胞凝集的宏观和微观两方面观

察，都可以得到预期的结果，这应该是规范操作的结果。

2.这次实验也存在一定的瑕疵，首先是观察到的现象和时间的错乱，a-1两次的记录的

时间（）相差也比较大，也没有进行进一步的实验验证，我也无法得出在土豆凝集素浓度及其他客观因素相同的条件下，血细胞浓度与凝集反应速率的相关关系。

血细胞浓度与凝集反应速率这两者的关系，这是本次实验遗留下来的问题。

原因有以下3点：

一是用秒表计时，来回记录时间上会有误差，但也不会相差太大；二是不同的组员所进行的实验并不绝对同步，而且同样的实验前后两次做，会存在一定的误差；三是每个人的判断标准不尽相同，因而所记录的时间也会有所偏差；四是操作方式和习惯也会对实验结果带来一定的影响，比如每个人漩摇的力度不同等。

3.从这次实验中，我体会到了团队合作的重要性，默契的合作不仅对实验的结果有很

大的帮助，对每个人的能力提高也发挥着重要作用。

4.由于是首次进行细胞生物学的实验，还是有些不适应，主要体现在进行实验操作和

实验记录的分配上，这次的许多实验现象和凝集时间的漏记，对结果分析带来了一

篇三：

细胞凝集反应实验报告山东大学

科目细胞生物学实验题目细胞凝集反应

细胞凝集反应

【实验目的】

1.了解细胞膜的表面结构；

2.掌握凝集素促使细胞凝集的原理；

3.学习研究细胞凝集反应的方法。

【实验原理】

1.凝集素

凝集素是一类含糖（少数例外）并能与糖转移结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。

目前已发现近千种植物中含有凝集素，在各种真菌、无脊椎动物、脊椎动物，人体的各种组织和器官中及某些病毒体内也含有凝集素，在各种真菌、无脊椎动物、脊椎动物，人体的各种组织和器官中及某些病毒体内也含有凝集素。

常用的为植物凝集素，通常一起被提取的植物命名，如伴刀豆凝集素a、麦胚凝集素、花生凝集素和大豆凝集素等，凝集素是他们的总称。

在细胞表面，组成细胞膜的糖脂和糖蛋白伸出寡糖链，形成细胞外被（又称为糖萼）。

凝集素能与细胞外被中的糖分子连接，在细胞间形成“桥”，从而引起细胞凝集。

凝集素引起的血细胞凝集，其细胞膜结构没有发生变化，与血液凝固中发生的复杂生物化学过程完全不同；另外，凝集素能与不同的糖蛋白特异结合，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集，但是凝集素不是来源或参与免疫反应的产物，因此，Ponder提出应称“凝集素组织化学”而不能称为“凝集素免疫组织化学”。

人们利用凝集素与不同的糖蛋白特异性结合的原理，识别和研究不同类型膜结构的生物学特征，以及进行血型鉴定。

aBo血型鉴定主要用于临床输血，在皮肤、肾等器官移植的时候选择aBo血型相符的供体；不孕症和新生儿溶血症病因的分析及亲子鉴定等。

另外，凝集素在临床疾病防治、机体生理活动调控以及生物工程等方面展示出了十分广阔的应用前景。

如：

植物凝集素可抑制受精；芸豆凝集素可直接抑制HiV-1反转录酶的活性，减少HiV感染者的病毒载量；细胞膜表面糖复合物的糖链结构与肿瘤细胞增殖、侵染、转移等发展过程密切相关，凝集素芯片技术实现了对癌症的快速、高通量检测，有助于筛选出癌症相关的糖链标志物。

2.细胞凝集

细胞凝集是指细胞彼此聚集在一起，成为一簇不规则的细胞团。

细胞膜是双层脂镶嵌蛋白质结构，脂和蛋白质又能与糖分子结合为细胞表面的分枝状糖外被。

目前认为，细胞间的联系，细胞的生长和分化，免疫反应和肿瘤发生都和细胞表面的分枝状糖分子有关。

凝集素是一类含糖的（少数例外）并能与糖专一结合的蛋白质，如植物血球凝集素，伴刀豆凝集素和土豆凝集素等，它具有凝集细胞核刺激细胞分裂的作用。

凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。

3.细胞凝集的反应技术

一、直接凝集反应技术

颗粒性抗原（细菌、螺旋体、红细胞等）与相应的抗体血清混合后，在电解质的参与下，经过一定时间，抗原抗体凝聚成肉眼可见的凝集块，这种现象称为凝集反应。

血清中的抗体称为凝集素。

抗原称为凝集原。

细菌或其他凝集原都带有相同的电荷（阴电荷），在悬液中相互排斥而呈均匀的分散状态。

抗原与抗体相遇后，由于抗原和抗体分子表面存在着相互对应的化学基团，因而发生特异性结合，称为抗原抗体复合物。

由于抗体与抗原结合，降低了抗原分子间的经典排斥力，抗原表面的亲水基团减少，由亲水状态变为疏水状态，此时已有凝集的趋向，在电解质（如生理盐水）参与下，由于例子的作用，中和

科目细胞生物学实验题目细胞凝集反应

了抗原抗体复合物外面的大部分电荷，使之是去了彼此间的经典排斥力，分子间相互吸引，凝集成大的絮片或颗粒。

出现了肉眼可见的凝集反应。

但是，直接凝集反应技术也有缺点：

特异性不高、抗原抗体无法获得或无法用于实验。

二、间接凝集反应技术

可溶性抗原（或抗体）吸附于免疫学反应无关的颗粒（称为载体）表面上，当这些致敏的颗粒与相应的抗体（或抗原）相遇时，就会产生特异性的结合，在电解质参与下，这些颗粒就会发生凝集现象。

这种借助于载体的抗原抗体凝集现象就叫做间接凝集反应。

载体的存在使反应的敏感性得以大大提高。

间接凝集反应的优点：

（1）敏感性强：

间接凝集反应是最敏感型的血清学反应方法之一，可以检测到微量的抗体和抗原；

（2）快速：

一般1h-2h即可判定结果，若在玻板上进行，则只需几分钟；

（3）特异性强；

（4）使用方便、简单

三、载体

具有吸附抗原（或抗体）的载体很多，如聚苯乙烯乳胶、白陶土、活性炭、人和多种动物的红血球、某些细菌等。

良好的载体有以下几点基本要求：

（1）在生理盐水或缓冲液无自凝倾向；

（2）大小均匀；

（3）比重与介质相似，短时间内不能沉淀；

（4）无化学或血清学活性

（5）吸附抗原（或抗体）后，不影响其活性。

目前应用最广的是人的o型红血球和绵羊红血球。

而后者应用更广，因为其来源方便。

另外绵羊红血球的表面有大量的（约1000个以上）糖蛋白受体，极易吸附某些抗原物质，吸附性能好，且大小均匀一致。

【实验用品】

1.材料

土豆块茎、家兔

2.试剂

抗凝血剂、PBS、土豆块茎、生理盐水和其他等渗液。

3．器材

5mL注射器、酒精棉球、双凹片、载玻片、普通光学显微镜、托盘天平、滴管、离心管。

【操作步骤】

1.取土豆去皮块茎2克，切碎并加10mlPBS缓冲液，浸泡24小时，浸出的粗体液中即含有可溶性土豆凝集素；

2.用针管抽取一定体积的抗凝剂（1%肝素溶液），并使抗凝剂充分浸润针管各部以及针头。

然后从兔子耳根处或心脏抽取兔子静脉血1ml，加生理盐水3ml，在1000r/min条件下，离心5分钟。

重复三次离心，最后按沉淀的红细胞体积用生理盐水配成1%的红细胞悬液；

3.在双凹片的左孔滴加一滴PBS缓冲液，同时在双凹片的右孔处滴加一滴土豆凝集素；

4.在双凹片的左右孔同时滴加一滴1%的红细胞悬液，然后使左右孔内的液体都充分混匀；

5.左手捏住双凹片的一端，右手轻轻摇晃双凹片，使凹槽内的液体充分的混合，如此摇晃5～10分钟，观察结果。

科目细胞生物学实验题目细胞凝集反应

6.先以白纸为衬托，直接观察双凹片凹槽内混合样品发生凝集的现象，注意左右凹槽内不同现象的对比，对于发生凝集的一边注意观察凝集与不发生凝集的区别。

直接观察后在光学显微镜下观察两凹槽内现象的区别，并用照相机拍摄实验结果。

【实验结果】

1.肉眼观察，对照组中红细胞沉积在双凹片凹槽底部呈大红点；用凝集素处理的实验组。

颜色越来越浅，透明度逐渐变高，经过1

分30秒，背景颜色变为透明，红细胞呈颗粒状聚集

2.低倍镜下可以看到对照组中红细胞分布较均一，无凝集；实验组中红细胞聚集在一起

对照组实验组

【实验结果分析与注意事项】

分析：

1.把液体滴加到双凹片上时，注意用量，防止悬液过多而溢出，使两个细胞悬液接触，导致实验结果不可靠。

科目细胞生物学实验题目细胞凝集反应

2.滴加1%的红细胞悬液时，可适当的多加点儿，便于实验结果的观察。

3.用手晃动双凹片时，注意摇晃的姿势：

一只手用手掌处贴紧双凹片，另一只手抵住双凹片的另一侧上下晃动。

4.摇晃的时间可适当延长，提高红细胞凝集程度。

5.浸出土豆凝集素时选发芽的或发青色的土豆。

由此可知发芽土豆不宜食用，因其所含土豆凝集素可让血细胞发生凝集。

6.区分血清与血浆，血清指血液自然沉降后所得上清液，而血浆是血液加抗凝剂后离心所得上清液。

7.凝血是指多个细胞聚集成不规则细胞簇，溶血是红细胞在低渗溶液作用下，肿胀破裂放出血红蛋白的过程。