化妆品中甲氧基肉桂酸乙基己酯等16种紫外线吸收剂.docx
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化妆品中甲氧基肉桂酸乙基己酯等16种紫外线吸收剂
附件3：
化妆品中甲氧基肉桂酸乙基己酯等16种紫外线吸收剂及二苯酮的检测方法
（征求意见稿）
1适用范围
本方法规定了化妆品中甲氧基肉桂酸乙基己酯等16种紫外线吸收剂及二苯酮测定的高效液相色谱法。
本方法适用于膏霜类、乳液类、水剂类、唇膏等蜡基类、指甲油类、粉类等化妆品中甲氧基肉桂酸乙基己酯等16种紫外线吸收剂及二苯酮的含量测定。
本方法的检出限、定量下限及取0.1g样品时的最低检出浓度、最低定量浓度见表1（PBSA和PABA按稀释倍数折算的被测样液总体积为100mL，其它15种目标物按稀释倍数折算的被测样液总体积为10mL）。
表1方法的检出限、定量下限、最低检出浓度和最低定量浓度
序号
防晒剂名称
检出限
（μg/mL）
定量下限
（μg/mL）
检出限
g/kg
定量限
g/kg
1
苯基苯并咪唑磺酸（PBSA）
0.10
0.30
0.10
0.30
2
对氨基苯甲酸（PABA）
0.20
0.60
0.20
0.60
3
二苯酮-4和二苯酮-5（Bp4/Bp5）
0.030
0.10
0.030
0.10
4
二苯酮
0.030
0.10
0.030
0.10
5
二苯酮-3（Bp3）
0.030
0.10
0.030
0.10
6
p-甲氧基肉桂酸异戊酯（IAMC）
0.030
0.10
0.030
0.10
7
4-甲基苄亚基樟脑（4MBC）
0.030
0.10
0.030
0.10
8
奥克利林（OC）
0.030
0.10
0.030
0.10
9
二乙氨基羟苯甲酰基苯甲酸己酯（DHHB）
0.10
0.30
0.10
0.30
10
甲氧基肉桂酸乙基己酯（EHMC）
0.030
0.10
0.030
0.10
11
PABA乙基己酯（OD-PABA）
0.030
0.10
0.030
0.10
12
水杨酸乙基己酯（EHS）
0.030
0.10
0.030
0.10
13
胡莫柳酯（HMS）
0.10
0.30
0.10
0.30
14
丁基甲氧基二苯酰基甲烷（BMDBM）
0.030
0.10
0.030
0.10
15
乙基己基三嗪酮（EHT）
0.030
0.10
0.030
0.10
16
亚甲基双-苯并三唑基四甲基丁基酚（MBBT）
0.030
0.10
0.030
0.10
17
双-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪（BEMT）
0.030
0.10
0.030
0.10
2方法提要
样品经过提取后，用高效液相色谱法测定。
以目标物的色谱保留时间和紫外光谱图与标准物质一致进行定性，以色谱峰的峰面积用标准曲线外标法进行定量计算。
必要时，采用高效液相色谱-质谱方法（HPLC-MS/MS）进行确证。
3.试剂和材料
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为一级实验用水。
3.1标准物质英文名称、CAS号、分子式、分子结构式、分子量、纯度见附录A。
3.2 甲醇：
色谱纯。
3.3 甲酸：
色谱纯。
3.4异丙醇：
色谱纯。
3.5 标准储备溶液：
分别准确称取各标准物质100mg（以上质量均精确至0.1mg）于棕色容量瓶中，苯基苯并咪唑磺酸用1%氨水氨化甲醇溶解后定容至10mL，其他均用四氢呋喃溶解后定容至10mL，配置成浓度为10mg/mL的标准储备液于冷藏条件下保存，保存期限为6个月。
3.6标准溶液的配置：
准确移取标准储备液各100μL，用甲醇定容至10mL，配置成100μg/mL的混合标准溶液，再用甲醇逐级稀释配置50μg/mL，20μg/mL，10μg/mL，5μg/mL，1μg/mL的系列混合标准溶液，用于高效液相色谱法的标准曲线的绘制。
系列标准溶液于冷藏条件下的保存期限为1个月。
4仪器和设备
4.1高效液相色谱仪二极管阵列检测器
4.2高效液相色谱串联四级杆质谱仪配置ESI离子源（确证时使用）
4.3分析天平：
感量0.0001g
4.4分析天平：
感量0.00001g。
4.5漩涡混合器。
4.6超声波清洗仪。
4.7离心机。
4.8移液枪或移液器
5.分析步骤
5.1样品预处理
称取约0.1g化妆品样品（精确至1mg）于15mL具塞刻度试管中，首先向试管中加入6mL四氢呋喃（含0.1%氨水），涡旋或超声使样品完全分散。
若不能分散一般适当超声可解决问题，对超声15min仍无法分散的样品（例如唇膏样品），需用60℃水浴，振荡加热约1~2分钟即可溶解分散。
继续向试管中加入甲醇/水（3:
1）（含0.1%氨水）定容至10mL，涡旋混合。
于5000转/分离心5~10min，取清液，聚丙烯微孔滤膜过滤，待用。
涉及对氨基苯甲酸、苯基苯并咪唑磺酸的检测，需取上述待用清液100μL用甲醇稀释至1mL，用聚丙烯微孔滤膜过滤后，方可上机测试。
其他目标化合物的检测视情况可适当稀释后上机测试，也可无需稀释，将上述待用清液直接上机测试。
5.2测定
5.2.1液相色谱分析参考条件
色谱条件一：
色谱柱：
PFP（五氟苯基）色谱柱，4.6mm×250mm（I.D.），5μm。
柱温：
35℃
流动相：
A水溶液（含0.1%甲酸），B异丙醇:
甲醇=1:
4（v/v,含0.1%甲酸）。
流速：
1.2mL/min。
检测波长：
311nm和280nm。
进样量：
10μL。
表2液相色谱分离条件
时间，min
A，%
B，%
0
68
32
2
68
32
2.1
30
70
5
15
85
15
10
90
15.1
0
100
25
0
100
25.1
68
32
30
68
32
色谱条件二：
（仅水杨酸乙基己酯与胡莫柳酯同时存在时使用）
色谱柱：
C18，4.6mm×250mm（I.D.），5μm。
柱温：
35℃
流动相：
A水溶液（含0.1%甲酸），B乙腈（含0.1%甲酸）。
流速：
1.5mL/min。
检测波长：
311nm。
进样量：
10μL。
梯度洗脱：
0~20min，线性改变B相比例，从75%增加至100%。
5.2.2校准曲线的制备
移取10μL系列标准溶液（3.6）进行高效液相色谱分析。
一般情况下，按照色谱条件一（5.2.1）进行高效液相色谱分析，以系列标准溶液质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，制作校准曲线。
对水杨酸乙基己酯和胡莫柳酯同时使用的情况，需按照色谱条件二（5.2.1）进行高效液相色谱分析。
5.2.3样品测定
将在相同的液相色谱条件下获得的样品溶液的液相色谱分离谱图与标准物质的液相色谱分离谱图进行比较，若样品谱图中存在保留时间与某标准物质的保留时间一致的色谱峰，并且其扣除背景后的紫外吸收图谱与该标准物质的紫外吸收图谱一致，则可确认样品中存在该物质。
确证后，样品溶液中目标物的含量，用标准曲线外标法确定。
若待测溶液中目标物的质量浓度超过校准曲线线性范围的上限，须对待测液进行适当稀释后重新测定。
化妆品样品中目标物的含量则按“7”项下计算公式计算。
6平行实验
按以上步骤操作，对同一样品独立进行测定，获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算数平均值的10%。
7结果计算
式中：
——从标准曲线中计算出的样品溶液中目标物的质量浓度，μg/mL；
V——样品定容积，mL；
m——称取样品的质量，g。
——稀释倍数（不稀释则取1）
计算结果保留三位有效数字。
8.回收率和精密度
加标水平在1.0~20mg/g范围内，乙基己基三嗪酮和双乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪的回收率在80~90%之间，RSD小于10%（n=6）。
其他15种目标物的回收率在90~105%之间，RSD小于10%（n=6）。
9.色谱图
图1标准物质液相色谱分离谱图
对应峰号：
1、苯基苯并咪唑磺酸（PBSA）；2、对氨基苯甲酸（PABA）；3、二苯酮-4和二苯酮-5（Bp4/Bp5）；4、二苯酮；5、二苯酮-3（Bp3）；6、p-甲氧基肉桂酸异戊酯（IAMC）；7、4-甲基苄亚基樟脑（4MBC）；8、奥克利林（OC）；9、二乙氨基羟苯甲酰基苯甲酸己酯（DHHB）；10、甲氧基肉桂酸乙基己酯（EHMC）；11、PABA乙基己酯（OD-PABA）；12、水杨酸乙基己酯（EHS）；13、胡莫柳酯（HMS）；14、丁基甲氧基二苯酰基甲烷（BMDBM）；15、乙基己基三嗪酮（EHT）；16、亚甲基双-苯并三唑基四甲基丁基酚（MBBT）；17、双-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪（BEMT）
图2水杨酸乙基己酯和胡莫柳酯液相色谱分离谱图
对应峰号：
1、水杨酸乙基己酯（EHS）；2、胡莫柳酯（HMS）；2’、胡莫柳酯异构体
10.质谱确证
10.1液相色谱分离参考条件
色谱柱：
PFP（五氟苯基）色谱柱，4.6mm×150mm（I.D.），3μm。
流速：
0.5mL/min进样量：
2μL。
柱温：
25℃。
流动相：
A水溶液（正模式含0.1%甲酸，负模式含0.05%氨水），
B甲醇溶液（正模式含0.1%甲酸，负模式含0.05%氨水）。
表3液相色谱分离条件
ESI-
ESI+
时间，min
A，%
B，%
时间，min
A，%
B，%
0
55
45
0
20
80
3
55
45
13
12
88
3.1
5
95
13.1
0
100
6
5
95
30
0
100
6.1
0
100
30.1
20
80
9
0
100
34
20
80
9.1
55
45
13
55
45
10.2质谱参考条件（参考质谱谱图见附录B）
离子源；电喷雾电离源（ESI源）检测方式:
多反应监测（MRM）。
雾化气：
氮气，35Psi。
干燥气：
氮气，流速10L/min，温度:
350℃。
碰撞气:
氮气。
毛细管电压：
4000V。
其他质谱参数见表4。
表417种目标物的质谱分析参考参数（碎裂电压、定性离子、定量离子及其碰撞能量）
序号
化合物名称
母离子（m/z）
子离子（m/z）
碰撞能量
碎裂
电压
扫描模式
1
对氨基苯甲酸
138.0
120.0
94.2
12
10
90
ESI+
2
苯基苯并咪唑磺酸
272.8
193.0
80.0
22
56
160
ESI-
3
二苯酮-4和二苯酮-5
306.8
211.0
80.0
34
48
150
ESI-
4
二苯酮
183.0
105.0
77.0
10
30
100
ESI+
5
二苯酮-3
229.0
151.0
104.9
14
17
100
ESI+
6
p-甲氧基肉桂酸异戊酯
249.0
161.0
179.1
10
4
90
ESI+
7
4-甲基苄亚基樟脑
防晒剂BL-200
255.1
171.0
97.0
15
15
100
ESI+
8
奥克利林
362.1
250.0
232.0
2.0
15
100
ESI+
9
二乙氨基羟苯甲酰基苯甲酸己酯
398.1
149.0
120.9
14
54
120
ESI+
10
甲氧基肉桂酸乙基己酯
291.1
178.9
升级会员 